川烏配法半夏對(duì)大鼠的長期毒性觀察

劉 剛

四川省瀘州市中醫(yī)醫(yī)院，四川 瀘州 646000

真方白丸子為元代《瑞竹堂方》所裁，主要藥物有川烏頭、白附子、半夏、天南星、天麻及全蝎等。主治中風(fēng)病之半身不遂，于明代中葉失傳。目前該方被發(fā)掘出來后即受到學(xué)術(shù)界的看重，已成為目前治療中風(fēng)急性期中經(jīng)絡(luò)的一個(gè)主要方劑[1]。但該方中主藥川烏頭、白附子、半夏等不僅系有毒藥物，且其中還存在傳統(tǒng)的中藥“十八反”配伍禁忌——川烏反半夏。本實(shí)驗(yàn)的目的是觀察川烏配半夏對(duì)動(dòng)物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)，其首先可能出現(xiàn)的癥狀和嚴(yán)重程度，可能針對(duì)的靶器官及其恢復(fù)和發(fā)展情況，確定無毒反應(yīng)劑量，為擬訂臨床使用安全劑量提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)將川烏配半夏對(duì)大鼠的長期毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 器材

1.1 藥物 由瀘州市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供，按照川烏與法半夏在真方白丸子中的配伍比例，單獨(dú)將2味藥制成混合粉劑供實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，以下簡稱川烏配半夏方。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)SD大鼠，雌雄各半，購自瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。合格證號(hào)：川實(shí)動(dòng)證第17號(hào)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在瀘州醫(yī)學(xué)院普通級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，溫度：22-25℃。

1.3 儀器 血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀sysmenxs－1000i(日本)，生化分析儀Rochemcdular800。

2 方法

選取清潔級(jí)SD大鼠80只，雌雄各半，分籠喂養(yǎng)，每籠10只，隨機(jī)分成川烏配半夏方大劑量組（14.4g/kg），中劑量組（4.8g/kg），小劑量組（1.6g/kg），分別相當(dāng)于成人劑量的45、15、5倍。每組20只（雌雄各10只）?？瞻讓?duì)照組給予等體積蒸餾水，連續(xù)8周。每日觀察記錄大鼠一般狀況如進(jìn)食，行為活動(dòng)，糞便等。每2周稱體重1次，并及時(shí)調(diào)整用藥劑量。末次給藥24h后，每組選取10只大鼠(雌雄各半)，3%戊巴比妥鈉麻醉（30mg/kg），從腹主動(dòng)脈采血，檢測血常規(guī)和血生化指標(biāo)，并對(duì)主要臟器進(jìn)行全面尸檢，取心、肝、脾、肺、腎、腦等臟器稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。之后對(duì)上述主要臟器用4%多聚甲醛固定，進(jìn)行常規(guī)病理學(xué)檢查。各組余下大鼠停藥觀察1周后，同法處理，并檢測上述指標(biāo)。所得結(jié)果通過excel2003作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，用t檢驗(yàn)比較組間差異顯著性。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)動(dòng)物一般情況的影響 在給藥期間，川烏配半夏方及空白對(duì)照組大鼠的外觀體征、行為活動(dòng)、進(jìn)食量及糞便等狀況正常，動(dòng)物無一死亡。在灌胃后3周（20天）左右發(fā)現(xiàn)大鼠有掉毛現(xiàn)象。停藥后觀察1周，亦無明顯變化。

3.2 對(duì)動(dòng)物體重的影響 連續(xù)用藥8周和停藥1周，川烏配半夏方大、中、小劑量組大鼠體重正常增長，與空白對(duì)照組比較，體重變化無明顯差異。結(jié)果見表1。

3.3 對(duì)動(dòng)物臟器系數(shù)的影響 給大鼠連續(xù)用藥8周和停藥1周后，分別檢測各組心、肝、脾、肺、腎、腦等主要臟器系數(shù)，各劑量組同空白對(duì)照組比較，各項(xiàng)指標(biāo)無明顯差異(P＞0.05)，表明給大鼠長期灌服川烏配半夏方，對(duì)大鼠的主要臟器重量無明顯影響。結(jié)果見表2～3。

3.4 對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 給大鼠連續(xù)用藥8周和停藥1周后，分別檢測血常規(guī)中白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板(PLT)、紅細(xì)胞壓積（Hct）等指標(biāo)，各劑量組與空白對(duì)照組比較，除個(gè)別指標(biāo)存在差異（P＜0.01和P＜0.05)外，絕大部分指標(biāo)無明顯差異(P＞0.05)，表明給大鼠長期灌服川烏配半夏方，對(duì)大鼠的主要血液學(xué)指標(biāo)無明顯影響。結(jié)果見表4～5。

3.5 對(duì)大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響 給大鼠連續(xù)用藥8周和停藥1周后，分別檢測各組大鼠總膽紅素（TBIL）、血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)。各劑量組與空白對(duì)照組比較，除個(gè)別指標(biāo)存在差異（P＜0.01和P＜0.05)外，絕大部分指標(biāo)無明顯差異(P＞0.05)，表明給大鼠長期灌服川烏配半夏方，對(duì)大鼠的主要生化學(xué)指標(biāo)無明顯影響。結(jié)果見表6～7。

表1 川烏配半夏方對(duì)大鼠體重增長的影響（±S,n=20,g）

表1 川烏配半夏方對(duì)大鼠體重增長的影響（±S,n=20,g）

用藥時(shí)間 高劑量組 中劑量組 低劑量組 空白對(duì)照組給藥前 209.75±17.00 212.00±22.27 206.50±22.42 223.00±21.00藥后2周 216.75±18.05 217.00±23.90 211.00±20.47 232.00±20.40藥后4周 227.00±18.74 222.75±23.21 216.00±23.11 242.00±21.35藥后6周 250.00±25.30 238.50±27.07 240.00±28.46 253.00±21.93藥后8周 266.25±22.74 255.00±32.79 261.50±32.60 262.00±26.76停藥1周 27650±20.50 264.00±19.08 267.00±15.52 271.67±19.51

表2 川烏配半夏方用藥8周后對(duì)大鼠主要臟器指數(shù)的影響（±S,n=10,g.100g體重-1）

表2 川烏配半夏方用藥8周后對(duì)大鼠主要臟器指數(shù)的影響（±S,n=10,g.100g體重-1）

組別 心 肝 脾 肺 腎 腦大劑量組 0.31±0.02 2.90±0.27 0.32±0.10 0.57±0.07 0.56±0.09 0.62±0.05中劑量組 0.32±0.03 3.03±0.52 0.35±0.15 0.62±0.10 0.56±0.10 0.65±0.10小劑量組 0. 33±0.06 3.07±0.80 0.27±0.05 0.63±0.08 0.58±0.10 0.64±0.11空白對(duì)照組 0.29±0.05 3.00±0.52 0.32±0.10 0.70±0.40 0.50±0.12 0.68±0.09

表3 川烏配半夏方停藥1周后對(duì)大鼠主要臟器指數(shù)的影響（±S.n=10,g.100g體重-1）

表3 川烏配半夏方停藥1周后對(duì)大鼠主要臟器指數(shù)的影響（±S.n=10,g.100g體重-1）

組別 心 肝 脾 肺 腎 腦大劑量組 0.33±0.04 3.08±0.33 0.32±0.07 0.70±0.32 0.58±0.10 0.67±0.08中劑量組 0.35±0.08 3.26±0.66 0.35±0.12 0.65±0.11 0.58±0.13 0.67±0.06小劑量組 0.34±0.06 3.28±0.78 0.30±0.07 0.60±0.10 0.57±0.12 0.71±0.05空白對(duì)照組 0.29±0.05 3.00±0.52 0.32±0.10 0.70±0.40 0.50±0.12 0.68±0.09

表4 川烏配半夏方灌胃8周后對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（±S.n=10）

注：與空白對(duì)照組比較,1）P＜0.01 2）P＜0.05

組別 WBC(109.L-1) RBC(1012.L-1) HGB(g.L-1) Hct（%） PLT (109.μl-1)大劑量組 9.60±2.77 7.82±0.61 144.71±12.80 43.20±3.21 1043.57±456.44中劑量組 7.68±1.251） 8.70±0.322） 154.25±3.352） 46.63±1.912） 1068.00±194.16小劑量組 2.64±0.64 8.26±0.15 146.33±5.31 44.70±1.72 1084.00±108.47空白對(duì)照組 4.42±0.57 6.83±0.93 140.75±5.72 39.60±4.16 1041.50±56.56

表5 川烏配半夏方灌胃8周后停藥1周對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（±S.n=10）

表5 川烏配半夏方灌胃8周后停藥1周對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響（±S.n=10）

注：與空白對(duì)照組比較，1）P＜0.05

組別 WBC(109.L-1) RBC(1012.L-1) HGB(g.L-1) Hct（%） PLT (109.μl-1)大劑量組 5.37±1.09 7.85±1.07 148.78±14.74 44.11±4.44 1065.89±116.12中劑量組 5.02±2.20 8.17±0.751） 146.56±10.78 46.50±5.281） 1148.56±273.51小劑量組 4.45±1.76 7.94±0.441） 144.90±6.24 44.16±3.26 1098.70±258.58空白對(duì)照組 4.42±0.57 6.83±0.93 140.75±5.72 39.60±4.16 1041.50±56.56

表6 川烏配半夏方灌胃8周后對(duì)大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響（±S.n=10）

表6 川烏配半夏方灌胃8周后對(duì)大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響（±S.n=10）

注：與空白對(duì)照組比較,1）P＜0.01 2)P＜0.05

組別 TBIL(μmol.L-1) AST(U.L-1) ALT( U.L-1) BUN(mmol.L-1) Crea(μmol.L-1)大劑量組 4.23±3.52 250.50±93.77 115.90±110.001） 6.68±0.45 49.06±2.60中劑量組 2.31±0.31 225.40±26.93 51.90±33.272） 6.29±0.33 53.32±3.94小劑量組 1.63±0.45 201.70±83.01 41.40±12.111） 5.16±0.85 48.22±3.98空白對(duì)照組 1.60±0.26 31.80±5.64 158.00±24.72 6.04±0.79 37.32±2.06

表7 川烏配半夏方灌胃8周后停藥1周對(duì)大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響（±S.n=10）

表7 川烏配半夏方灌胃8周后停藥1周對(duì)大鼠血液生化學(xué)指標(biāo)的影響（±S.n=10）

注：與空白對(duì)照組比較,1）P＜0.01 2)P＜0.05

組別 TBIL(μmol.L-1) AST(U.L-1) ALT( U.L-1) BUN(mmol.L-1) Crea(μmol.L-1)大劑量組 1.84±0.49 193.88±35.062） 85.63±29.84 5.47±0.29 36.08±2.361）中劑量組 1.91±0.341） 158.44±34.741） 54.00±17.372） 6.38±0.88 39.29±3.121）小劑量組 1.52±0.35 133.30±49.61 45.70±7.13 6.65±0.66 33.91±4.601）空白對(duì)照組 1.60±0.26 31.80±5.64 158.00±24.72 6.04±0.79 37.32±2.06

3.6 病理學(xué)檢查 給大鼠連續(xù)用藥8周和停藥1周后，分別處死動(dòng)物，剖取各組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腦等臟器。首先進(jìn)行肉眼尸檢，主要臟器外形、體積、色澤均屬正常，無充血、腫脹、壞死等異?，F(xiàn)象（僅大劑量組1只雌性大鼠出現(xiàn)肺實(shí)變現(xiàn)象，剪開后見膿液。可能是灌胃時(shí)少量藥物滲入肺后感染所致）。然后，各臟器用4%多聚甲醛溶液固定48h后，按常規(guī)方法做病理切片，HE染色后光鏡下檢查。結(jié)果表明，川烏配半夏方大、中、小劑量組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腦等臟器進(jìn)行全面肉眼尸檢，用藥組和對(duì)照組均未見異常。病理組織學(xué)檢查，大鼠心、肝、脾、肺、腎、腦等臟器組織形態(tài)學(xué)均為正常，與空白對(duì)照組比較，未明顯見到由于藥物毒性引起的病理改變。因此，證明給大鼠長期灌胃川烏配半夏方不影響動(dòng)物器官組織形態(tài)學(xué)。

4 討論

真方白丸子為治療中風(fēng)病的專方，方中主要藥物川烏頭等不僅有毒性，而且川烏與半夏還屬于傳統(tǒng)“十八反”中的配伍禁忌。但川烏與半夏是否能相配使用，古今一直存在爭議。孫氏對(duì)405首半夏與烏頭相配的古方進(jìn)行了分析，認(rèn)為傳統(tǒng)的“十八反”與臨床情況并不一致[2]。目前最新版的藥典也未再提“十八反”，而只是用“不宜”來提示配伍注意事項(xiàng)[3]。但真的將其配伍應(yīng)用后，其毒性如何，只憑臨床觀察，沒有動(dòng)物毒理實(shí)驗(yàn)支撐，缺乏足夠的說服力。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，將川烏與半夏按其在真方白丸子中的劑量比例制成粉劑，以大劑量組（14.4g/kg），中劑量組（4.8g/kg），小劑量組（1.6g/kg），分別相當(dāng)于成人劑量的45、15、5倍，連續(xù)給大鼠灌胃給藥8周及停藥1周后，與空白對(duì)照組比較，動(dòng)物的一般狀況、體重、主要臟器系數(shù)無明顯差異；血液學(xué)指標(biāo)、血液生化學(xué)指標(biāo)檢查，各劑量組的各檢測項(xiàng)目與空白對(duì)照組比較，雖有個(gè)別檢測指標(biāo)存在一定差異，但其測定值仍在正常值范圍內(nèi)，故無實(shí)際意義。主要臟器的病理檢查表明，組織形態(tài)學(xué)正常，未見與藥物毒性相關(guān)的明顯病變。說明川烏配半夏方對(duì)大鼠未出現(xiàn)嚴(yán)重的毒副反應(yīng)，未顯示明顯的中毒靶器官，停藥一周后也未見藥物延遲性毒性反應(yīng)。表明川烏配半夏方毒性不大，推論在真方白丸子中川烏配半夏及臨床擬用劑量應(yīng)是安全的。

[1]周仲瑛.新世紀(jì)（第二版）中醫(yī)內(nèi)科學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2007：309.

[2]孫世發(fā).十八反藥物半夏與烏頭同方應(yīng)用的文獻(xiàn)理論探討[J].湖南中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1999，5（12）：40－41.

[3]國家藥典編委會(huì)編.藥典2010年版（第一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010，1：38－111.