珍珠菜黃酮類化學(xué)成分研究

丁林芬， 郭亞東， 吳興德， 馬銀海

（1.昆明醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，云南昆明 650031;2.昆明學(xué)院化學(xué)科學(xué)與技術(shù)系，云南昆明 650031）

珍珠菜（Lysimachia clethroideDuby）為報(bào)春花科珍珠菜屬多年生草本植物。廣泛分布于我國(guó)東北、華北、華東、中南、西南及河北、陜西等地。其味苦、辛、性平。全草入藥，具有清熱解毒、活血調(diào)經(jīng)、利水消腫等功效［1］。文獻(xiàn)報(bào)道已從該植物分離得到黃酮、三萜等化學(xué)成分［2-4］。為更好的開發(fā)和利用珍珠菜資源，本研究對(duì)珍珠菜進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從中分離得到11個(gè)黃酮類化合物，其中化合物3、6為首次從該種植物中分離得到，化合物8～11為首次從該屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

質(zhì)譜用VG Auto Spec-3000型質(zhì)譜儀測(cè)定;核磁共振譜用Bruker AM-400和DRX-500超導(dǎo)核磁共振儀測(cè)定，TMS為內(nèi)標(biāo);Sephadex LH-20為瑞典Pharmacia公司生產(chǎn);1100型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測(cè)器，色譜工作站，半制備用色譜柱ZORBAX SB-C18（9.4 mm ×250 mm，5 μm）均為美國(guó)Agilent公司生產(chǎn);柱色譜硅膠、硅膠GF254為青島海洋化工廠生產(chǎn);溶劑為工業(yè)純（重蒸）。

珍珠菜采自云南省大理州，由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所李錫文教授鑒定為珍珠菜L.clethroide，標(biāo)本現(xiàn)存于該所標(biāo)本室（標(biāo)本號(hào)2006-19）。

2 提取分離

珍珠菜干燥全草5 kg粉碎后，用70%丙酮冷浸提取3次，減壓濃縮得浸膏（800 g），經(jīng)100～200目硅膠柱色譜，用氯仿-丙酮（100∶0～0∶100）梯度洗脫，分成8個(gè)部分（Fr.1～8）。Fr.2（6.5 g）經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-丙酮（100∶1～10∶1）梯度洗脫，分成3個(gè)部分（Fr.2.1～2.3），F(xiàn)r.2.1經(jīng)過反復(fù)Sephadex LH-20柱色譜，分離得到化合物1（55 mg）;Fr.2.2經(jīng)過硅膠柱色譜，Sephadex LH-20柱色譜，半制備液相色譜，甲醇-水（25∶75，3 mL/min）為流動(dòng)相，分離得到化合物6（8 mg）;Fr.2.3經(jīng)過半制備液相色譜，甲醇-水（45∶55，3 mL/min）為流動(dòng)相，分離得到化合物4（15 mg）。Fr.4（2.3 g）經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿-甲醇（30∶1～5∶1）梯度洗脫，分成3個(gè)部分（Fr.4.1～4.3），F(xiàn)r.4.2經(jīng)過反復(fù)Sephadex LH-20柱色譜，分離得到化合物5（75 mg）。Fr.6（9.3 g）經(jīng)硅膠柱色譜，氯仿-甲醇（20∶1～5∶1）梯度洗脫，分成3個(gè)部分（Fr.6.1～6.3），F(xiàn)r.6.1經(jīng)過反復(fù)硅膠柱色譜和Sephadex LH-20柱色譜，分離得到化合物7（13 mg）、9（11 mg），F(xiàn)r.6.2經(jīng)過硅膠柱色譜，Sephadex LH-20柱色譜，半制備液相色譜，甲醇-水（37∶63，3 mL/min）為流動(dòng)相，分離得到化合物3（10 mg）。Fr.7（8.5 g）經(jīng)反相柱色譜，甲醇-水（10∶90～80∶20）梯度洗脫，分成4個(gè)部分（Fr.7.1～7.4），F(xiàn)r.7.2經(jīng)過硅膠柱色譜，Sephadex LH-20柱色譜，半制備液相色譜，甲醇-水（35∶65，3 mL/min）為流動(dòng)相，分離得到化合物2（34 mg）、8（9 mg）、10（14 mg）、11（6 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陰性。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ:6.18（1H，d，J=1.9 Hz，H-6），6.43（1H，d，J=1.9 Hz，H-8），8.03（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，H-6′），6.92（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，H-5′）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ:146.9（C-2），135.7（C-3），175.9（C-4），160.8（C-5），98.3（C-6），164.0（C-7），93.6（C-8），156.3（C-9），103.1（C-10），121.8（C-1′），129.6（C-2′，C-6′），115.5（C-3′，C-5′），159.3（C-4′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5，6］報(bào)道的山柰酚數(shù)據(jù)一致。

化合物2黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，ESI-MSm/z447［M-H］－。1H-NMR（CD3COCD3，500 MHz）δ:12.49（5-OH），6.27（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.51（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），8.14（2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，H-6′），6.97（2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，H-5′），5.44（1H，d，J=7.7 Hz，H-1″），3.45（1H，dd，J=8.9，7.8 Hz，H-2″），3.42（1H，t，J=8.9 Hz，H-3″），3.34（1H，t，J=8.9 Hz，H-4″），3.26（1H，m，H-5″），3.64（1H，dd，J=12.0，2.4 Hz，H-6″a），3.50（1H，dd，J=12.0，5.2 Hz，H-6″b）。13C-NMR（CD3COCD3，125 MHz）δ:156.5（C-2），133.3（C-3），177.5（C-4），161.5（C-5），98.6（C-6），164.8（C-7），93.5（C-8），156.2（C-9），103.8（C-10），120.9（C-1′），130.6（C-2′，C-6′），115.8（C-3′，C-5′），159.8（C-4′），101.4（C-1″），74.3（C-2″），76.5（C-3″），69.5（C-4″），77.7（C-5″），62.5（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］報(bào)道的山柰酚 3-O-β-D-葡萄糖苷（紫云英苷）數(shù)據(jù)一致。

化合物3黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，ESI-MSm/z449［M+H］+。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ:6.19（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.39（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），8.06（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，H-6′），6.85（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，H-5′），5.28（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ:157.2（C-2），134.3（C-3），178.4（C-4），161.8（C-5），98.6（C-6），164.8（C-7），93.5（C-8），157.8（C-9），103.7（C-10），121.4（C-1′），131.1（C-2′，C-6′），114.8（C-3′，C-5′），160.4（C-4′），103.7（C-1″），71.7（C-2″），73.7（C-3″），68.7（C-4″），75.8（C-5″），60.7（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道的山柰酚3-O-β-D-半乳糖苷數(shù)據(jù)一致。

化合物4黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，ESI-MSm/z593［M-H］－。1H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ:12.42（5-OH），6.25（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.48（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），8.08（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，H-6′），6.91（2H，d，J=8.7 Hz，H-3′，H-5′），5.35（1H，d，J=7.4 Hz，H-1″），3.47 ～3.20（m，H-2″～H-5″），4.33（1H，dd，J=10.9，1.9 Hz，H-6″a），4.17（1H，dd，J=10.9，6.1 Hz，H-6″b），7.44（2H，d，J=8.6 Hz，H-2?，H-6?），6.87（2H，d，J=8.6 Hz，H-3?，H-5?），7.42（1H，d，J=15.9 Hz，H-7?），6.15（1H，d，J=15.9 Hz，H-8?）。13CNMR（C5D5N，125 MHz）δ:157.7（C-2），133.5（C-3），178.7（C-4），162.8（C-5），99.9（C-6），165.3（C-7），94.6（C-8），157.6（C-9），105.2（C-10），121.8（C-1′），131.8（C-2′，C-6′），116.8（C-3′，C-5′），161.8（C-4′），104.1（C-1″），76.0（C-2″），78.4（C-3″），71.3（C-4″），76.0（C-5″），64.2（C-6″），126.1（C-1?），130.7（C-2?，C-6?），116.1（C-3?，C-5?），161.4（C-4?），145.2（C-7?），114.9（C-8?），167.2（C-9?）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道的山柰酚 3-O-（6″-p-香豆?；?β-D-吡喃葡萄糖苷（銀煅苷）數(shù)據(jù)一致。

化合物5黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish 反應(yīng)陰性。1H-NMR（CD3COCD3，500 MHz）δ:6.24（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.50（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），7.80（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.98（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），7.67（1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′）。13C-NMR（CD3COCD3，100 MHz）δ:146.9（C-2），136.7（C-3），176.5（C-4），162.2（C-5），99.1（C-6），164.9（C-7），94.4（C-8），157.6（C-9），104.0（C-10），123.6（C-1′），116.1（C-2′），145.8（C-3′），148.3（C-4′），115.6（C-5′），121.4（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5，6］報(bào)道的槲皮素?cái)?shù)據(jù)一致。

化合物6黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陰性，ESI-MSm/z315［M-H］－。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ:6.76（1H，d，J=1.9 Hz，H-6），6.87（1H，d，J=1.9 Hz，H-8），8.31（1H，d，J=1.9 Hz，H-2′），7.38（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），8.21（1H，d，J=8.4，1.9 Hz，H-6′），3.87（OMe）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ:148.5（C-2），137.9（C-3），177.4（C-4），157.5（C-5），99.3（C-6），165.6（C-7），94.4（C-8），162.5（C-9），104.5（C-10），123.1（C-1′），116.6（C-2′），147.5（C-3′），149.4（C-4′），112.6（C-5′），122.8（C-6′），56.0（OMe）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道的異鼠李素?cái)?shù)據(jù)一致。

化合物7黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，ESI-MSm/z465［M+H］+。1H-NMR（CD3COCD3，400 MHz）δ:12.36（5-OH），6.27（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.50（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），8.01（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.93（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），7.57（1H，dd，J=8.4，2.0 Hz，H-6′），5.42（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″），3.46 ～3.20（m，H-2″～ H-5″），3.74（1H，dd，J=11.8，2.3 Hz，H-6″a），3.57（1H，dd，J=11.8，5.2 Hz，H-6″b）。13C-NMR（CD3COCD3，100 MHz）δ:157.9（C-2），135.6（C-3），179.1（C-4），162.9（C-5），99.7（C-6），165.3（C-7），94.6（C-8），158.8（C-9），105.4（C-10），122.6（C-1′），115.8（C-2′），145.2（C-3′），149.2（C-4′），117.9（C-5′），122.6（C-6′），105.0（C-1″），75.5（C-2″），77.8（C-3″），70.9（C-4″），78.1（C-5″），62.7（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道的槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷（異槲皮苷）數(shù)據(jù)一致。

化合物8黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，F(xiàn)AB-MSm/z477［M-H］－。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ:12.46（5-OH），6.28（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.53（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），8.05（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.97（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），7.64（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6′），5.42（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），3.94（OMe）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ:156.7（C-2），133.8（C-3），179.1（C-4），161.3（C-5），99.4（C-6），164.1（C-7），94.1（C-8），156.2（C-9），103.4（C-10），122.0（C-1′），113.4（C-2′），146.2（C-3′），149.5（C-4′），115.4（C-5′），122.4（C-6′），101.1（C-1″），71.4（C-2″），73.0（C-3″），67.8（C-4″），75.6（C-5″），60.4（C-6″），56.3（OMe）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］報(bào)道的槲皮素 3′-甲氧基-3-O-β-D-半乳糖苷數(shù)據(jù)一致。

化合物9黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，F(xiàn)AB-MSm/z611［M+H］+。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ:12.61（5-OH），6.14（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.34（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），7.51（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.81（1H，d，J=8.7 Hz，H-5′），7.53（1H，dd，J=8.7，2.0 Hz，H-6′），5.40（1H，d，J=7.4 Hz，H-1″），7.34（2H，d，J=8.5 Hz，H-2?，H-6?），6.77（2H，d，J=8.5 Hz，H-3?，H-5?），7.30（1H，d，J=15.1 Hz，H-7?），6.12（1H，d，J=15.1 Hz，H-8?）。13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ:156.3（C-2），133.1（C-3），177.4（C-4），161.2（C-5），98.7（C-6），164.1（C-7），93.5（C-8），156.3（C-9），103.8（C-10），121.1（C-1′），116.2（C-2′），144.8（C-3′），148.5（C-4′），115.2（C-5′），121.5（C-6′），100.7（C-1″），73.9（C-2″），76.3（C-3″），69.9（C-4″），74.3（C-5″），63.5（C-6″），124.9（C-1?），130.1（C-2?，C-6?），115.7（C-3?，C-5?），159.7（C-4?），144.5（C-7?），113.6（C-8?），166.2（C-9?）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道 的 quercetin 3-O-β-D-（6″-p-coumaroyl）-galactoside數(shù)據(jù)一致。

化合物10白色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陰性，醋酸鎂反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，ESI-MSm/z463［M+H］+。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ:8.12（1H，s，H-2），7.15（1H，s，H-8），7.68（2H，d，J=8.6 Hz，H-2′，H-6′），7.27（2H，d，J=8.6 Hz，H-3′，H-5′），5.25（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），3.98（OMe）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz） δ:154.5（C-2），122.1（C-3），181.7（C-4），153.9（C-5），131.0（C-6），157.7（C-7），94.8（C-8），153.3（C-9），107.7（C-10），123.8（C-1′），131.0（C-2′，C-6′），116.4（C-3′，C-5′），159.4（C-4′），102.0（C-1″），74.7（C-2″），78.7（C-3″），71.2（C-4″），79.5（C-5″），62.5（C-6″），60.8（OMe）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道的 4′-methoxy-5， 6-dihydroxyisoflavone-7-O-β-D-glucopyranoside數(shù)據(jù)一致。

化合物11白色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性，Molish反應(yīng)陽性，F(xiàn)AB-MSm/z419［M+H］+。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ:5.45（1H，dd，J=12.5，2.7 Hz，H-2），2.65（1H，dd，J=15.9，2.7 Hz，H-3），3.05（1H，J=12.5，15.9 Hz，H-3），7.72（1H，d，J=8.8 Hz，H-5），6.51（1H，dd，J=8.8，2.2 Hz，H-6），6.35（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），7.43（2H，d，J=8.8 Hz，H-2′，H-6′），7.13（2H，d，J=8.8 Hz，H-3′，H-5′），4.89（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），3.25-3.33（m，H-2″-H-5″），3.69（1H，dd，J=11.5，5.5 Hz，H-6″a），3.45（1H，dd，J=11.5，3.0 Hz，H-6″b）。13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ:80.7（C-2），44.9（C-3），193.2（C-4），134.5（C-5），111.8（C-6），165.4（C-7），102.3（C-8），164.8（C-9），115.1（C-10），129.9（C-1′），128.8（C-2′，C-6′），116.3（C-3′，C-5′），158.9（C-4′），103.8（C-1″），74.8（C-2″），77.8（C-3″），71.2（C-4″），78.4（C-5″），62.4（C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道的 4′-羥基二氫黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷數(shù)據(jù)一致。

［1］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.上海:上海人民出版社，1975:1498.

［2］鄒海艷，屠鵬飛.珍珠菜黃酮類化合物的研究［J］.中國(guó)天然藥物，2004，2（1）:59-61.

［3］任風(fēng)芝，郄建坤，屈會(huì)化，等.珍珠菜脂溶性部位的化學(xué)成分研究［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2001，17（4）:178-180.

［4］Kitagawa I，Matastuda A，Yosioka I.Saponin and Sapogenol.VII.SapogenolConsitituents of FivePrimulaceousPlants ［J］.Chem Pharm Bull，1972，20（10）:2226-2230.

［5］Barbera O，Sanz J F，Sanchez-Parareda J，et al.Further flavonol glycosides fromanthyllis onobrychioides［J］.Phytochemistry，1986，25（10）:2361-2365.

［6］Markham K R，Ternai B，Stanley R，et al.Carbon-13 NMR studies of flavonoids-Ⅲnaturally occurring flavonoid glycosides and their acylated derivatives［J］.Tetrahedron，1978，34（9）:1389-1397.

［7］潘 婭，劉紅霞，莊玉磊，等.仙鶴草中黃酮類化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2008，33（24）:2925-2927.

［8］Budzianowski J，Skrzypczak L.Phenylproid ester fromLamium albumflowers［J］.Phytochemistry，1995，38（4）:997-1001.

［9］Bouktaib M，Lebrun S，Atmani A，et al.Hemisynthesis of all theO-monomethylated analogues of quercetin including the major metabolites，through selective protection of phenolic functions［J］.Tetrahedron，2002，58（50）:10001-10009.

［10］Kazuma K，Noda N，Suzuki M.Malonylated flavonol glycosides from the petals ofClitoria ternatea［J］.Phytochemistry，2003，62（2）:229-237.

［11］Vvedenskaya I O，Rosen R T，Guido J E，et al.Characterization of flavonoids in Cranberry（Vaccinium macrocarpon）Powder［J］.J Agric Food Chem，2004，52（2）:188-195.

［12］Song Z J，Luo F，Zhou Y，et al.Two new isoflavonoids from the rhizomes ofBelamcanda chinensis［J］.Chin Chem Lett，2007，18（6）:694-696.

［13］許旭東，楊峻山.安徽楤木中的芳香類化學(xué)成分研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2005，30（5）:398-399.