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    注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的血管刺激性、溶血性和過敏性研究

    2010-08-21 05:54:08宋曉娜王子彪
    中國醫(yī)藥指南 2010年27期
    關(guān)鍵詞:二丁豚鼠家兔

    宋曉娜 王子彪 周 麗

    注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣(Calcium Dibutyryladenosine Cyclophosphate for injection)為蛋白酶激活劑,可催化人體內(nèi)一氧化磷酸反應(yīng)和三羧酸循環(huán),激活人體各種反應(yīng)。同時產(chǎn)生大量ATP,改善細胞能量代謝,促進神經(jīng)再生,擴張血管,舒張平滑肌,改善心肌缺氧缺血等作用。為確保藥品質(zhì)量,保證患者用藥安全、有效,避免毒副反應(yīng)發(fā)生,本文對注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的血管刺激性、溶血性及過敏性試驗結(jié)果進行了詳細闡述。

    1 材 料

    1.1 藥物

    注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣:濟南泰盛達醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)公司提供。5%葡萄糖注射液:批號:08010903,浙江濟民制藥有限公司。過敏試驗陽性對照物(4%卵白蛋白葡萄糖水溶液,取新鮮蛋清臨用時在無菌條件下用5%葡萄糖注射液配制)。

    1.2 受試動物

    白色家兔9只,體質(zhì)量2.22~2.51kg,雌雄各半。由河北醫(yī)科大學(xué)動物中心提供,合格證號:06036。豚鼠18只,體質(zhì)量261~293g,雌雄各半,由河北醫(yī)科大學(xué)動物中心提供,合格證號:06037。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 動物飼養(yǎng)環(huán)境

    家兔:溫度:(22±2)℃;濕度:(50±5)%;每籠1只;喂以家兔專用顆粒飼料,輔以新鮮蔬菜。實驗前動物飲水、進食正常,狀態(tài)良好。豚鼠:溫度:(22±2)℃;濕度:(50±5)%;每籠3只;喂以豚鼠專用顆粒飼料,輔以新鮮蔬菜。實驗前動物飲水、進食正常,狀態(tài)良好。

    2.2 試驗方法

    2.2.1 溶血性試驗[1]

    取健康家兔1只,頸動脈取血5mL至潔凈干燥小燒杯中,用玻璃棒攪拌去纖維蛋白,加5%葡萄糖注射液5mL,3000轉(zhuǎn)/min,離心10min,棄去上清液,再加10mL 5%葡萄糖注射液輕輕搖勻,離心,棄去上清液,如此反復(fù)幾次至上清液不呈紅色為止,然后按所得紅細胞比容,用5%葡萄糖注射液配制成2%紅細胞懸液,置冰箱備用;另取試管7支,1~5管分別加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL溶解后的注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣(臨用時取1支注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣,用250mL 5%葡萄糖注射液溶解)并用5%葡萄糖注射液稀釋至2.5mL,6號、7號試管中分別加入5%葡萄糖注射液2.5mL、蒸餾水2.5mL(完全溶血對照)。最后每管均加入2%兔紅細胞懸液2.5mL,輕輕搖勻,置37℃水浴中,分別記錄15、30min、1、2、4h各管的溶血和凝集情況。

    溶液澄清,紅色,管底無紅細胞殘留為完全溶血;溶液澄清,紅色或棕色,管底尚有少量紅細胞殘留為部分溶血;紅細胞全部下沉,上層液無色澄明為不溶血;雖不溶血,但出現(xiàn)紅細胞凝集,振搖后不能分散,或出現(xiàn)藥物沉淀為凝集。

    2.2.2 過敏性試驗

    豚鼠18只,按體質(zhì)量、性別隨機分為3組,每組6只,陰性對照組給予5%葡萄糖注射液0.5mL致敏,并以1.0mL該注射液進行攻擊;陽性對照組預(yù)先以4%雞蛋清0.5mL致敏,并以1.0mL該試劑進行攻擊;受試藥組以0.5mL溶解后的注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣致敏,并以1.0mL該藥進行攻擊。各組首先隔日腹腔注射藥液0.5mL/只,共注射3次。然后將每組豚鼠分為2小組,其中1小組豚鼠在第一次腹腔注射藥液后14d由前肢靜脈注射溶解后的原藥液1.0mL/只;另一小組于第一次腹腔注射藥液后第21天從前肢靜脈注射溶解后的原藥液1.0mL/只。觀察靜脈注射后30min內(nèi)的豚鼠過敏反應(yīng)癥狀,并按表1評分標(biāo)準(zhǔn)進行評分。

    表1 全身性過敏反應(yīng)的評分標(biāo)準(zhǔn)

    2.2.3 血管刺激性試驗

    取家兔8只,隨機分為兩組,每組4只,第一組家兔每日耳緣靜脈緩慢滴注5%葡萄糖注射液24.0mL/kg,第二組動物亦每日由耳緣靜脈緩慢滴注溶解后的注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣24.0mL/kg,連續(xù)滴注7d,末次給藥后24h,每組取2只動物,木棒擊斃家兔,剪取距注射部位1cm處和5cm處兔耳,放于10%福爾馬林溶液中固定,石蠟包埋,HE染色,末次給藥后72h,處死每組剩下2只動物,剪取距滴注部位1cm處和5cm處兔耳,放于10%福爾馬林溶液中固定,石蠟包埋,HE染色。光鏡下觀察注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣給藥后24及72h對兔耳血管的刺激性反應(yīng)。

    表2 注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的溶血試驗結(jié)果

    表3 注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣過敏性試驗結(jié)果

    表4 家兔耳緣靜脈滴注后肉眼觀察結(jié)果

    表5 注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣家兔耳緣靜脈滴注后病理組織學(xué)檢查結(jié)果

    肉眼觀察注射部位兔耳靜脈有無充血、水腫變性、硬結(jié)及壞死現(xiàn)象,記錄病變程度及出現(xiàn)血管組織變化的家兔數(shù)目,血管充血及水腫程度分為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度,0度為無變化,Ⅰ度為輕微變化,Ⅱ度為明顯變化,Ⅲ度為嚴重變化;病理組織學(xué)檢查標(biāo)準(zhǔn)為觀察注射部位兔耳靜脈血管擴張充血、血栓形成、水腫及炎性細胞浸潤等改變,每項內(nèi)容按病變程度分正常、輕、中、重,分別以–、+、++、+++表示。

    2.3 結(jié)果

    2.3.1 溶血性試驗

    由表2所示注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣1~5管在4h內(nèi)均未引起溶血和凝集反應(yīng)。

    2.3.2 過敏性試驗

    注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的兩組豚鼠分別于第1次腹腔注射后14d和第21天用溶解后的原藥液進行攻擊均未發(fā)生過敏性反應(yīng);而陽性對照組豚鼠于注射后3min內(nèi)出現(xiàn)呼吸困難,抽搐倒下,而后死亡,豚鼠死亡均發(fā)生在注射后1~5min內(nèi)。另外,陰性對照組6只豚鼠均未發(fā)生過敏反應(yīng),結(jié)果見表3。

    2.3.3 血管刺激性試驗結(jié)果

    表4所示為肉眼觀察結(jié)果,家兔耳緣靜脈緩慢滴注注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣或5%葡萄糖注射液24.0mL/kg,1次/d,連續(xù)7d,末次給藥后24、72h,肉眼觀察給藥組與對照組無明顯區(qū)別。

    表5所示為病理組織學(xué)檢查結(jié)果,鏡下可見給藥后24h,距注射部位1cm處兔耳緣靜脈可見炎性細胞浸潤、輕微充血等,未見硬結(jié)、壞死現(xiàn)象。與1cm處相比,距注射部位5cm處兔血管炎性細胞浸潤、充血明顯減輕。給藥后72h,1和5cm處兔血管炎性細胞浸潤、充血均明顯減輕。5%葡萄糖注射液組耳緣靜脈組織病理學(xué)呈現(xiàn)相似的變化,與注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣給藥組相比較沒有明顯差別。

    3 結(jié) 論

    注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣對家兔耳緣靜脈無明顯刺激作用,對家兔紅細胞無明顯體外溶血及致凝集作用,對豚鼠無致過敏作用,表明注射用二丁酰環(huán)磷腺苷用于注射是安全可靠的。

    [1]錢之玉.藥理學(xué)實驗與指導(dǎo)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1996:407-410.

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