注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的血管刺激性、溶血性和過敏性研究

宋曉娜 王子彪 周 麗

注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣（Calcium Dibutyryladenosine Cyclophosphate for injection）為蛋白酶激活劑，可催化人體內(nèi)一氧化磷酸反應(yīng)和三羧酸循環(huán)，激活人體各種反應(yīng)。同時產(chǎn)生大量ATP，改善細胞能量代謝，促進神經(jīng)再生，擴張血管，舒張平滑肌，改善心肌缺氧缺血等作用。為確保藥品質(zhì)量，保證患者用藥安全、有效，避免毒副反應(yīng)發(fā)生，本文對注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的血管刺激性、溶血性及過敏性試驗結(jié)果進行了詳細闡述。

1 材 料

1.1 藥物

注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣：濟南泰盛達醫(yī)藥技術(shù)開發(fā)公司提供。5%葡萄糖注射液：批號：08010903，浙江濟民制藥有限公司。過敏試驗陽性對照物（4%卵白蛋白葡萄糖水溶液，取新鮮蛋清臨用時在無菌條件下用5%葡萄糖注射液配制）。

1.2 受試動物

白色家兔9只，體質(zhì)量2.22～2.51kg，雌雄各半。由河北醫(yī)科大學(xué)動物中心提供，合格證號：06036。豚鼠18只，體質(zhì)量261～293g，雌雄各半，由河北醫(yī)科大學(xué)動物中心提供，合格證號：06037。

2 方法與結(jié)果

2.1 動物飼養(yǎng)環(huán)境

家兔：溫度：（22±2）℃；濕度：（50±5）%；每籠1只；喂以家兔專用顆粒飼料，輔以新鮮蔬菜。實驗前動物飲水、進食正常，狀態(tài)良好。豚鼠：溫度：（22±2）℃；濕度：（50±5）%；每籠3只；喂以豚鼠專用顆粒飼料，輔以新鮮蔬菜。實驗前動物飲水、進食正常，狀態(tài)良好。

2.2 試驗方法

2.2.1 溶血性試驗[1]

取健康家兔1只，頸動脈取血5mL至潔凈干燥小燒杯中，用玻璃棒攪拌去纖維蛋白，加5%葡萄糖注射液5mL，3000轉(zhuǎn)/min，離心10min，棄去上清液，再加10mL 5%葡萄糖注射液輕輕搖勻，離心，棄去上清液，如此反復(fù)幾次至上清液不呈紅色為止，然后按所得紅細胞比容，用5%葡萄糖注射液配制成2%紅細胞懸液，置冰箱備用；另取試管7支，1～5管分別加入0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL溶解后的注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣（臨用時取1支注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣，用250mL 5%葡萄糖注射液溶解）并用5%葡萄糖注射液稀釋至2.5mL，6號、7號試管中分別加入5%葡萄糖注射液2.5mL、蒸餾水2.5mL（完全溶血對照）。最后每管均加入2%兔紅細胞懸液2.5mL，輕輕搖勻，置37℃水浴中，分別記錄15、30min、1、2、4h各管的溶血和凝集情況。

溶液澄清，紅色，管底無紅細胞殘留為完全溶血；溶液澄清，紅色或棕色，管底尚有少量紅細胞殘留為部分溶血；紅細胞全部下沉，上層液無色澄明為不溶血；雖不溶血，但出現(xiàn)紅細胞凝集，振搖后不能分散，或出現(xiàn)藥物沉淀為凝集。

2.2.2 過敏性試驗

豚鼠18只，按體質(zhì)量、性別隨機分為3組，每組6只，陰性對照組給予5%葡萄糖注射液0.5mL致敏，并以1.0mL該注射液進行攻擊；陽性對照組預(yù)先以4%雞蛋清0.5mL致敏，并以1.0mL該試劑進行攻擊；受試藥組以0.5mL溶解后的注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣致敏，并以1.0mL該藥進行攻擊。各組首先隔日腹腔注射藥液0.5mL/只，共注射3次。然后將每組豚鼠分為2小組，其中1小組豚鼠在第一次腹腔注射藥液后14d由前肢靜脈注射溶解后的原藥液1.0mL/只；另一小組于第一次腹腔注射藥液后第21天從前肢靜脈注射溶解后的原藥液1.0mL/只。觀察靜脈注射后30min內(nèi)的豚鼠過敏反應(yīng)癥狀，并按表1評分標(biāo)準(zhǔn)進行評分。

表1 全身性過敏反應(yīng)的評分標(biāo)準(zhǔn)

2.2.3 血管刺激性試驗

取家兔8只，隨機分為兩組，每組4只，第一組家兔每日耳緣靜脈緩慢滴注5%葡萄糖注射液24.0mL/kg，第二組動物亦每日由耳緣靜脈緩慢滴注溶解后的注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣24.0mL/kg，連續(xù)滴注7d，末次給藥后24h，每組取2只動物，木棒擊斃家兔，剪取距注射部位1cm處和5cm處兔耳，放于10%福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋,HE染色，末次給藥后72h，處死每組剩下2只動物，剪取距滴注部位1cm處和5cm處兔耳，放于10%福爾馬林溶液中固定，石蠟包埋，HE染色。光鏡下觀察注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣給藥后24及72h對兔耳血管的刺激性反應(yīng)。

表2 注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的溶血試驗結(jié)果

表3 注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣過敏性試驗結(jié)果

表4 家兔耳緣靜脈滴注后肉眼觀察結(jié)果

表5 注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣家兔耳緣靜脈滴注后病理組織學(xué)檢查結(jié)果

肉眼觀察注射部位兔耳靜脈有無充血、水腫變性、硬結(jié)及壞死現(xiàn)象，記錄病變程度及出現(xiàn)血管組織變化的家兔數(shù)目，血管充血及水腫程度分為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ度，0度為無變化，Ⅰ度為輕微變化，Ⅱ度為明顯變化，Ⅲ度為嚴重變化；病理組織學(xué)檢查標(biāo)準(zhǔn)為觀察注射部位兔耳靜脈血管擴張充血、血栓形成、水腫及炎性細胞浸潤等改變，每項內(nèi)容按病變程度分正常、輕、中、重，分別以–、+、++、+++表示。

2.3 結(jié)果

2.3.1 溶血性試驗

由表2所示注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣1～5管在4h內(nèi)均未引起溶血和凝集反應(yīng)。

2.3.2 過敏性試驗

注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣的兩組豚鼠分別于第1次腹腔注射后14d和第21天用溶解后的原藥液進行攻擊均未發(fā)生過敏性反應(yīng)；而陽性對照組豚鼠于注射后3min內(nèi)出現(xiàn)呼吸困難，抽搐倒下，而后死亡，豚鼠死亡均發(fā)生在注射后1～5min內(nèi)。另外，陰性對照組6只豚鼠均未發(fā)生過敏反應(yīng)，結(jié)果見表3。

2.3.3 血管刺激性試驗結(jié)果

表4所示為肉眼觀察結(jié)果，家兔耳緣靜脈緩慢滴注注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣或5%葡萄糖注射液24.0mL/kg，1次/d，連續(xù)7d，末次給藥后24、72h，肉眼觀察給藥組與對照組無明顯區(qū)別。

表5所示為病理組織學(xué)檢查結(jié)果，鏡下可見給藥后24h，距注射部位1cm處兔耳緣靜脈可見炎性細胞浸潤、輕微充血等，未見硬結(jié)、壞死現(xiàn)象。與1cm處相比，距注射部位5cm處兔血管炎性細胞浸潤、充血明顯減輕。給藥后72h，1和5cm處兔血管炎性細胞浸潤、充血均明顯減輕。5%葡萄糖注射液組耳緣靜脈組織病理學(xué)呈現(xiàn)相似的變化，與注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣給藥組相比較沒有明顯差別。

3 結(jié) 論

注射用二丁酰環(huán)磷腺苷鈣對家兔耳緣靜脈無明顯刺激作用，對家兔紅細胞無明顯體外溶血及致凝集作用，對豚鼠無致過敏作用，表明注射用二丁酰環(huán)磷腺苷用于注射是安全可靠的。

[1]錢之玉.藥理學(xué)實驗與指導(dǎo)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1996:407-410.