抗菌藥物敏感性試驗(yàn)中應(yīng)注意的問題

周春鳳 王艷萍 郭時(shí)金

（①山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院 ②山東綠都安特動(dòng)物藥業(yè)有限公司 256600）

抗菌藥對(duì)細(xì)菌性傳染病的控制起到了非常重要的作用，但由于養(yǎng)殖過程中不科學(xué)的、盲目的濫用抗菌藥，很多致病性細(xì)菌產(chǎn)生了耐藥性，使得抗菌藥對(duì)細(xì)菌性疾病的控制效果越來越差，這樣不但造成藥物浪費(fèi)，而且還延誤病情，給養(yǎng)殖戶造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失。為了更準(zhǔn)確有效的治療，必須對(duì)現(xiàn)有藥物進(jìn)行藥物敏感度測(cè)定，通過這種有的放矢的投藥方式，會(huì)大大減少藥物浪費(fèi)，降低養(yǎng)殖成本，下面就從藥敏紙片的制備和藥敏試驗(yàn)的操作等方面作一總結(jié)。

1 藥敏紙片的制備

（1）選用質(zhì)地均勻、吸水力強(qiáng)的濾紙(如國(guó)產(chǎn)新華1號(hào)濾紙)，印上藥物名稱，然后用打孔機(jī)打成直徑6mm的圓紙片，置于干凈的小西林瓶?jī)?nèi)，壓線后瓶口以單層牛皮紙包扎。經(jīng)15磅20min高壓滅菌，置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，將滅菌紙片傾倒于滅菌90mm培養(yǎng)皿，均勻鋪開，然后置于60℃干燥箱內(nèi)充分干燥。

（2）在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將紙片傾斜于培養(yǎng)皿一角，然后按每100張紙片加入一種抗菌藥物1ml，用滅過菌的小鑷子翻動(dòng)紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動(dòng)紙片時(shí)不能將紙片攪爛。同時(shí)在培養(yǎng)皿上記錄藥物名稱，浸泡0.5h后，將培養(yǎng)皿放平后，用小鑷子將紙片在培養(yǎng)皿內(nèi)均勻鋪開，置37℃溫箱內(nèi)干燥，干燥后即可在超凈工作臺(tái)內(nèi)裝瓶，密塞，如有條件可真空干燥。置陰暗干燥處存放，避免受潮，有效期3～6個(gè)月。

（3）各種抗菌素紙片的制備：青霉素：用無菌生理鹽水稀釋成10000u/ml，吸取1ml加甲醇9ml即成。每片含藥量10IU。鏈霉素：稱取原藥10mg，加無菌生理鹽水1ml混勻，再加75%的甲醇9ml，即成。每片含藥量10μg。四環(huán)素、土霉素、金霉素：稱取原藥10mg，加0.9%甘氨酸鈉1ml，再加pH3.6甲醇9ml即成。每片含藥量10μg。新霉素、新生霉素、慶大霉素、多粘菌素、呋喃西林：稱取原藥10mg，加無菌生理鹽水1ml，再加甲醇9ml混勻即成。氯霉素、合霉素、紅霉素：稱取原藥10mg，加甲醇10ml即成。每片含藥量10μg。卡那霉素：稱取原藥10g加無菌生理鹽水1ml混勻再加50%的甲醇9ml混勻即成。每片含藥量10μg。粘菌素：用無菌生理鹽水稀釋成1000000IU/ml取1ml加甲醇9ml混勻即成。每片含藥量10IU?；前奉愃幬铮悍Q取原藥10mg加甲醇10ml混勻。每片要含量100μg。

2 藥敏試驗(yàn)操作步驟

2.1 涂菌 用滅菌棉花棒蘸取試驗(yàn)菌涂布于培養(yǎng)基表面，倒置37℃溫箱中20min，使培養(yǎng)基表面干燥。

2.2 放紙片 將各種抗菌素紙片放置于培養(yǎng)基表面，用滅菌小鑷子輕壓，使其緊貼于培養(yǎng)基上，置4℃冰箱中放置2～4h，再取出置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)16～24h。

2.3 測(cè)抑菌圈直徑 取出培養(yǎng)皿，測(cè)量各紙片周圍的抑菌圈直徑，準(zhǔn)確到0.1mm。

3 影響藥敏結(jié)果的因素

3.1 培養(yǎng)基 應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)菌的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行配制。傾注平板時(shí)，厚度合適(約5～6mm)，不可太薄，一般90mm直徑的培養(yǎng)皿，傾注培養(yǎng)基18～20ml為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應(yīng)盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質(zhì)，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對(duì)氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺藥和TMP的活性。

3.2 細(xì)菌接種量 細(xì)菌接種量應(yīng)恒定，如太多，抑菌圈變小，能產(chǎn)酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。

3.3 藥物濃度 藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗(yàn)的結(jié)果，需精確配制。商品藥應(yīng)嚴(yán)格按照其推薦治療量配制。

3.4 培養(yǎng)時(shí)間 一般培養(yǎng)溫度和時(shí)間為37℃ 8～18h，有些抗菌藥擴(kuò)散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養(yǎng)基，先置4℃冰箱內(nèi)2～4h，使抗菌藥預(yù)擴(kuò)散，然后再放37℃溫箱中培養(yǎng)，可以推遲細(xì)菌的生長(zhǎng)，而得到較大的抑菌圈。

4 應(yīng)用

藥物敏感試驗(yàn)后，應(yīng)選擇高敏藥物進(jìn)行治療，也可選用兩種藥物協(xié)助使用，以減少耐藥菌株。在選擇高敏藥物時(shí)應(yīng)考慮藥物的吸收途徑，因?yàn)樗幟粼囼?yàn)是藥液直接和細(xì)菌接觸，而在給禽用藥的時(shí)候，必須通過機(jī)體的吸收才能使藥物達(dá)到一定的效果，所以在給禽用藥時(shí)，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，這樣才會(huì)達(dá)到好的治療效果。