尿白蛋白測定及其定量的臨床分析

余紅亞,鐘厚強,羅天敏

近年來,尿白蛋白正逐漸取代尿總蛋白,成為尿液蛋白化學(xué)的主要檢測項目,2002年美國臨床生化學(xué)會 (NACB)發(fā)布的糖尿病診斷及治療的實驗室檢測應(yīng)用指南中,將尿白蛋白檢測作為糖尿病并發(fā)病癥診斷及篩查的主要指標(biāo),美國腎病協(xié)會的腎臟病教育計劃 (NEKDP)更是將尿白蛋白與腎小球濾過率一起列為重要的腎臟疾病的早期篩查及診斷指標(biāo),尿中的蛋白定量是很重要的檢測項目,尿白蛋白超標(biāo)是各種原因引起的腎損傷的早期標(biāo)志,近年來“尿微量白蛋白”檢驗,對早期發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病尤有價值,且與心血管疾病,及其嚴(yán)重程度,高血壓,代謝綜合征,妊娠子癇以及某些腫瘤和血液病有密切關(guān)系[1-2],其臨床重要性日益增加。

我國目前尚無統(tǒng)一的指南規(guī)范尿白蛋白的檢測,定量及報告要求,尿白蛋白檢測及定量,報告中存在著諸多問題,影響其更好的臨床應(yīng)用。其中標(biāo)本留取及其判斷閾值,尿白蛋白定量測定及標(biāo)準(zhǔn)化是幾個主要問題。

1 尿白蛋白標(biāo)本的留取

1.1 尿白蛋白排泌受多鐘因素影響,如飲水量,排尿量,運動情況,飲食及體位等。不同個體的尿白蛋白濃度變異較大,規(guī)范尿液標(biāo)本的留取及其報告形式的主要目的是降低個體內(nèi)的變異。

1.2 目前被公認(rèn)為參考標(biāo)準(zhǔn)的留取 24h尿液,并報告 24h內(nèi)尿白蛋白總量 (mg/24h)、然而 24h尿液的留取方式較為不便、患者依從性差、不易得到準(zhǔn)確結(jié)果,導(dǎo)致檢驗結(jié)果不準(zhǔn)。

1.3 如從標(biāo)本留取方式的角度考慮,隨機尿無疑是最具便利性,但由于隨機尿尿量和內(nèi)含物質(zhì)的變異極大,因而必須校正其檢測結(jié)果和報告形式,而 24h尿白蛋白總量其本身依然存在一定變異,而郭瑋等報道[3]糖尿病患者中 24h尿白蛋白白晝之間 CV高達(dá) 42%。僅有少數(shù)將留取 24h尿液并報告尿白蛋白總量作為首選方式,而其他指南則明確無需留取 24h尿液標(biāo)本。

2 判斷閾值

2002年美國糖尿病協(xié)會發(fā)布的導(dǎo)則中將 24h尿白蛋白 ＞30mg/24h,隨機尿白蛋白 ＞30ug/ml尿 Cr定義為微量白蛋白,這一判斷簡單易記,各個導(dǎo)則紛紛沿用。

2.1 尿白蛋白 (UA)定量通常以單位時間 (多用 24h)內(nèi)UA的排泄量 (AER)表示;為盡量減少在不同時間內(nèi)排泄量的差異,而提倡同時定量檢測尿中肌酐,以兩者的比值(ACR)來表示。由于定量方法尚不完善,對超標(biāo)的標(biāo)本還建議及時復(fù)查來決定臨床干預(yù)。UA的定量方法雖從化學(xué)法進步到免疫法,以至高效液相法。質(zhì)譜法以及尿液蛋白質(zhì)組學(xué)等[4],但仍然存在許多問題而影響測定的準(zhǔn)確性和測定結(jié)果的一致性和互通性。

2.2 對分析前各種因素對測定結(jié)果的影響重視不足 如個體間的生物變異、標(biāo)本采集和儲存期間 UA的變化、體力活動、發(fā)熱、菌尿、以及女性月經(jīng)期的影響等。

2.3 分析后的臨床解釋不同

2.4 UA存在多種不同的分子形式 經(jīng)腎小球濾過與腎小管重吸收、氧自由基的作用、尿 PH值低于 4或高于 8時會引起白蛋白構(gòu)型改變、內(nèi)源性物質(zhì)如鈣、氯、銅等以及甲狀腺素、脂肪酸。膽紅素等可與白蛋白結(jié)合、藥物可與之形成共價修飾、二硫鍵可使之共價結(jié)合為二聚體。糖尿病患者尿中出現(xiàn)糖化的白蛋白均對測定有重要影響。目前 UA定量尚無決定性方法、標(biāo)準(zhǔn)化工作組提出改進測定只是建議。實驗名稱提倡用“尿白蛋白”測定一詞來代替尿“微量白蛋白”。提倡采集第一次晨尿、要比隨機尿測定結(jié)果的變異要小。第二次的晨尿也可接受,但尚無依據(jù)證明其優(yōu)于第一次晨尿。尿標(biāo)本不能經(jīng)過冰凍。UA在 2～8℃可穩(wěn)定7d。但在冷藏前應(yīng)離心去除沉淀物和組織成分。沉淀前需要冷凍,應(yīng)凍存于-70℃。先將沉淀物離心去除。解凍的尿液應(yīng)恢復(fù)至室溫并充分混勻。冷凍和復(fù)溶對沉淀結(jié)果的影響尚未充分確定。測定結(jié)果要以白蛋白/肌酐比值方式報告。所用單位最好用該國或該地區(qū)所采用的國際單位制。否則臨床上難以解釋和評價。

3 結(jié)論

綜上敘述、尿白蛋白參考物和參考檢測程序尚無公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)、而臨床檢測究竟采用哪種方法,已待研究。任何一個常規(guī)項目中都存在著尚待解決的眾多難題。日常的檢驗項目要實現(xiàn)準(zhǔn)確沉淀并不容易。常規(guī)檢驗項目的研究與改進不容忽視。

1 李曉紅,楊明.微量白蛋白尿與心血管疾病 [J].中華現(xiàn)代內(nèi)科學(xué)雜志,2007,4(8):710-712.

2 王燕,李勇.尿微量白蛋白與冠狀動脈病變的關(guān)系 [J].中華內(nèi)科雜志,2007,46(12):981-983.

3 郭瑋,吳炯,唐文佳,等.不同時段尿白蛋白在診斷早期糖尿病腎病損傷中的應(yīng)用 [J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2009,32:1091-1095.

4 嚴(yán)靜霞,裴華毅,子連英,等.尿蛋白定量沉淀方法及有關(guān)問題[J].國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊,2005,26:806-808.