• 
    

    
    

      99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

      以CD203c分子為標(biāo)記判斷慢性蕁麻疹血清對(duì)嗜堿粒細(xì)胞的活化*

      2010-08-14 01:16:06孫仁山隋建峰唐書(shū)謙吳先林趙莉蓉伍津津李文維冉新澤鄭曉莉楊桂紅周金鈴
      重慶醫(yī)學(xué) 2010年23期
      關(guān)鍵詞:組胺蕁麻疹粒細(xì)胞

      孫仁山,隋建峰,李 鳳,唐書(shū)謙,吳先林,楊 濤,趙莉蓉,伍津津,李文維,雷 霞,冉新澤,鄭曉莉,楊桂紅,周金鈴

      (第三軍醫(yī)大學(xué):1.大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所皮膚科,重慶 400042;2.基礎(chǔ)部醫(yī)學(xué)試驗(yàn)中心 400038;3.預(yù)防醫(yī)學(xué)院復(fù)合傷研究所,重慶 400038)

      大部分慢性蕁麻疹患者找不到明確的過(guò)敏原及病因。部分患者血清存在組胺釋放活性,這種組胺釋放活性是由自身抗體所致,大部分為抗高親和力 Ig E受體(FcεR1)自身抗體,少部分為抗Ig E或其他抗體[1-9]。自身血清皮膚試驗(yàn)(autologous serum skin test,ASST)、嗜堿粒細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)和嗜堿粒細(xì)胞活化試驗(yàn)(Basophilactivation test,BAT)可以對(duì)上述的自身抗體進(jìn)行檢測(cè)。嗜堿粒細(xì)胞活化后,CD63分子表達(dá)增強(qiáng),并從細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)移至細(xì)胞表面,很多文獻(xiàn)以CD63分子的表達(dá)為BAT檢測(cè)指標(biāo),但CD63除在肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞表達(dá)外,在血小板及單核細(xì)胞等均可表達(dá)[10]。CD203c分子特異性地表達(dá)在肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞表面,本研究探討以CD203c分子為BAT的觀察指標(biāo),判斷慢性蕁麻疹外周血清對(duì)嗜堿粒細(xì)胞的活化情況,并以求判斷慢性蕁麻疹的自身免疫性質(zhì)。

      1 資料與方法

      1.1 病例與分組 按文獻(xiàn)[11-12]選擇本科室(2010年1月至2010年6月)來(lái)就診的慢性蕁麻疹患者,隨機(jī)選取ASST陽(yáng)性患者血清26例(A組)、ASST陰性患者血清24例(B組)和健康對(duì)照血清20例(C組)。

      1.2 試劑與儀器 抗人 CD203cPE、CRTH 2-FITC及CD3Per-CP為美國(guó)eBioscience公司產(chǎn)品,其他試劑均為進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)分析純,流式細(xì)胞儀為美國(guó)BD公司產(chǎn)品,激光共聚焦顯微鏡為德國(guó)LEICA公司產(chǎn)品;光學(xué)顯微鏡為日本Nikon產(chǎn)品。

      1.3 實(shí)驗(yàn)方法

      1.3.1 標(biāo)本處理及嗜堿粒細(xì)胞懸液制備 從1個(gè)健康自愿者肘靜脈采血30 m L,肝素抗凝備用。每批標(biāo)本均設(shè)陰性和陽(yáng)性對(duì)照,在陽(yáng)性對(duì)照管中加入經(jīng)磷酸鹽緩沖液(PBS)1∶10稀釋的0.4 mmol FMLP 100μL,陰性對(duì)照管中以PBS 100μL替代FM LP,在檢測(cè)管中加入100μL待檢測(cè)血清,各管中加入肝素抗凝全血100μL,37℃水浴15 min,隨后用含依地酸(EDTA,0.02 mol/L)的PBS 2 m L終止反應(yīng),離心棄上清液,加入CRTH 2-FITC/CD203c-PE/CD3Per-CP預(yù)混合的單克隆抗體15μL,置室溫10 min后用溶血素處理10 min,以溶解紅細(xì)胞,繼用含0.1%牛人血清蛋白的PBS 2 m L洗滌2次,加PBS 700 μL重懸待用。

      1.3.2 檢測(cè)分析 每次檢測(cè)前均用Flow Check熒光微球Beckman Coulter校準(zhǔn)儀器,標(biāo)本上機(jī)后,先以前向角散射光(FSC)和側(cè)向角散射光(SSC)參數(shù)大致觀察細(xì)胞形態(tài)。然后在CD3和SSC雙參數(shù)點(diǎn)圖上選取排除了CD3陽(yáng)性的有核細(xì)胞,排除細(xì)胞碎片和雜質(zhì)。在CD203c和C RTH-2雙參數(shù)點(diǎn)圖上選取有核細(xì)胞中CD 203c陽(yáng)性的細(xì)胞。將純的嗜堿粒細(xì)胞用CD203c參數(shù)圖進(jìn)行分析,以未激活陰性為對(duì)照,觀察CD203c抗原表達(dá)上調(diào)比例和幅度。以CD 203c表達(dá)上調(diào)細(xì)胞數(shù)的比例達(dá)到10%作為嗜堿粒細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)陽(yáng)性的判斷標(biāo)準(zhǔn)。染色細(xì)胞樣品在流式細(xì)胞儀上用Cellquest軟件進(jìn)行檢測(cè),經(jīng)Cellquest或Win MDI2.8軟件分析,獲取直方圖,以平均免疫熒光強(qiáng)度(MFI)表示表達(dá)強(qiáng)度。

      1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用S PSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料以表示,采用方差分析和 Anova檢驗(yàn)。以 P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié) 果 見(jiàn)表1。

      表1 慢性蕁麻疹患者血細(xì)胞CD203c表達(dá)結(jié)果()

      表1 慢性蕁麻疹患者血細(xì)胞CD203c表達(dá)結(jié)果()

      *:P<0.01,與 B、C 組比較。

      組別 n CD203c表達(dá)百分率(%) C D203c表達(dá)強(qiáng)度(MFI)A 組 26 91.24±6.22* 58.2±12.55*B組 24 3.33±1.24 3.70±1.32 C組 20 3.05±1.07 3.20±1.29

      3 討 論

      慢性特發(fā)性蕁麻疹患者血清中能發(fā)現(xiàn)功能性抗FcεRI或抗Ig E自身抗體,這些患者HLA-DR等位基因頻次增多,這種現(xiàn)象是自身免疫性疾病的特征。有研究表明,在具有自身抗體的慢性蕁麻疹組,有充分的證據(jù)證明它們具有致病性,自身抗體的血漿水平與疾病活動(dòng)性有密切的聯(lián)系;清除自身抗體可以緩解癥狀。對(duì)該抗體進(jìn)行部分純化,可以在Ig G1和IgG 3的成分中發(fā)現(xiàn)抗體。另外一個(gè)自身免疫現(xiàn)象也出現(xiàn)在該組中,包括出現(xiàn)抗甲狀腺抗體、呈斑點(diǎn)圖案的抗核抗體等,但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡[1,13]。定義自身免疫性疾病的標(biāo)準(zhǔn)除上述情況外,還要求在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上能夠復(fù)制疾病,盡管目前還沒(méi)有用抗FcεRI自身抗體來(lái)進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn),但檢測(cè)出慢性蕁麻疹外周血中的自身抗體,可以避免過(guò)多的過(guò)敏原檢測(cè)費(fèi)用,并為醫(yī)師使用免疫調(diào)節(jié)劑治療該類(lèi)疾病提供依據(jù)。

      抗FcεRI自身抗體主要有自身血清皮膚試驗(yàn)、嗜堿粒細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)、免疫印跡方法和基于重組蛋白sFcεRIα的ELISA試驗(yàn)等檢測(cè)方法。本課題組應(yīng)用這幾種檢測(cè)方法并對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)比較研究,認(rèn)為免疫印跡方法穩(wěn)定性好,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠;嗜堿粒細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)可以檢測(cè)出功能性的抗FcεRI自身抗體,但操作步驟繁瑣;ASS T方法雖較簡(jiǎn)單,但無(wú)菌要求嚴(yán)格,測(cè)試前需要患者停用抗組胺藥物[11,14-15]。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn),3種方法可相互借鑒和彌補(bǔ),供臨床診斷自身免疫性蕁麻疹時(shí)使用。

      嗜堿粒細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)要求純化嗜堿粒細(xì)胞,BAT使用全血標(biāo)本,通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定表面分子的變化判斷靶細(xì)胞的活化,因此試驗(yàn)周期短。由于嗜堿粒細(xì)胞活化后,針對(duì)CD63分子變化檢測(cè)的信號(hào)敏感性強(qiáng),大多數(shù)文獻(xiàn)采用CD63分子判斷嗜堿粒細(xì)胞的活化,在本研究中使用了特異性強(qiáng)的CD203c分子,通過(guò)3次設(shè)門(mén),排除淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞等,檢測(cè)蕁麻疹血清對(duì)嗜堿粒細(xì)胞的活化信號(hào)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,使用的3種抗體標(biāo)記白細(xì)胞,3次設(shè)門(mén)可以有效判斷嗜堿粒細(xì)胞的活化情況。本實(shí)驗(yàn)中有2例ASS T陽(yáng)性血清呈現(xiàn)陰性反應(yīng),可能為凝血因子導(dǎo)致的ASST陽(yáng)性反應(yīng),而非抗FcεRI抗體所致。由于熒光標(biāo)記抗體的價(jià)格因素可能會(huì)限制該方法的臨床推廣應(yīng)用。

      [1]Philpott H ,Kette F ,Hissaria P ,et al.Smith W.Chronic urticaria:the autoimmune paradigm[J].Intern Med J,2008,38(11):852.

      [2]孫仁山,劉榮卿.自身免疫性慢性蕁麻疹的檢測(cè)方法及治療進(jìn)展[J].臨床皮膚科雜志,2000,29(3):187.

      [3]朱清,徐怡波,謝忠誠(chéng).慢性蕁麻疹的病因機(jī)制及治療進(jìn)展[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2009,6(4):284.

      [4]朱清,謝忠誠(chéng),魯靜.中藥口服聯(lián)合鹽酸司他斯汀片治療慢性蕁麻疹89例療效觀察[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2009,6(4):301.

      [5]袁皓琛,劉燕茹,王琴.慢性蕁麻疹患者血清過(guò)敏原特異性IgE抗體檢測(cè)分析[J].海南醫(yī)學(xué),2003,14(3):60.

      [6]許海衛(wèi).左西替利嗪治療慢性蕁麻疹38例療效觀察[J].海南醫(yī)學(xué),2008,19(7):33.

      [7]葉輝勝,蔡潔瑩,高金蓮.咪唑斯汀(皿治林)治療45例慢性蕁麻疹臨床觀察[J].海南醫(yī)學(xué),2008,19(9):57.

      [8]曹廣金,吳春蘭.江西地區(qū)慢性蕁麻疹皮內(nèi)試驗(yàn)變應(yīng)原檢測(cè)及分析[J].海南醫(yī)學(xué),2007,18(1):134.

      [9]祝林,龍力,段永建.依巴斯汀治療慢性蕁麻疹臨床療效觀察[J].海南醫(yī)學(xué),2008,19(9):3.

      [10]Abuaf N ,Rostane H,Rajoely B,et al.Comparison of two basophilactivation markers CD63 and CD203c in the diagnosis of amoxicillin allergy[J].Clin Exp Allergy,2008,38(6):921.

      [11]孫仁山,劉榮卿,葉慶佾,等.慢性特發(fā)性蕁麻疹患者血清組胺釋放活性的檢測(cè)[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2000,22(4):349.

      [12]劉榮卿,孫仁山.嗜堿粒細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)檢測(cè)抗高親和力Ig E抗體及其受體[J].重慶醫(yī)學(xué),2001,30(1):27.

      [13]孫仁山,劉榮卿.慢性蕁麻疹的某些致病因子研究[J].重慶醫(yī)學(xué),2000,29(5):468.

      [14]Sun RS,Chen XH ,Sui JF,etal.Detecting anti-F cepsilon-RI autoantibodies in patients with asthma by flow cytometry[J].J Int Med Res,2008,36(6):1214.

      [15]孫仁山,劉榮卿,胡川閩,等.高親和力Ig E受體α鏈蛋白及其自身抗體在慢性蕁麻疹患者中的表達(dá)[J].中華皮膚科雜志,2001,34(6):444.

      猜你喜歡
      組胺蕁麻疹粒細(xì)胞
      經(jīng)方治療粒細(xì)胞集落刺激因子引起發(fā)熱案1則
      兒童醫(yī)院門(mén)診口服抗組胺藥應(yīng)用情況分析
      評(píng)價(jià)3種抗組胺藥治療慢性特發(fā)性蕁麻疹的療效
      嗜酸性粒細(xì)胞增多綜合征的治療進(jìn)展
      誤診為嗜酸粒細(xì)胞增多癥1例分析
      經(jīng)方辨證治療慢性蕁麻疹經(jīng)驗(yàn)
      中西醫(yī)結(jié)合治療慢性蕁麻疹39例
      中西醫(yī)結(jié)合治療慢性蕁麻疹42例
      柱前衍生-高效液相色譜法測(cè)定魚(yú)粉中組胺的含量
      蕁麻疹253例病因探討
      河南省| 宁都县| 酉阳| 汤原县| 紫阳县| 昌吉市| 清水河县| 隆尧县| 平阳县| 鲁山县| 集贤县| 绥化市| 徐水县| 唐海县| 石景山区| 隆化县| 扎赉特旗| 永春县| 涡阳县| 奉化市| 项城市| 澄江县| 茂名市| 钟山县| 苍溪县| 咸丰县| 盐亭县| 安阳市| 八宿县| 威海市| 绵竹市| 鄂托克旗| 寻乌县| 德保县| 苗栗县| 辰溪县| 平湖市| 娄底市| 漳浦县| 安塞县| 吴旗县|