MEKC比較牡丹皮配方顆粒制備中的兩種提取方法

戴淑娟，謝曉梅

（1.安徽醫(yī)學高等專科學校，安徽 合肥 230061；2.安徽中醫(yī)學院 藥學院，安徽 合肥230038）

中藥配方顆粒是以單味中藥飲片為原料，采用現(xiàn)代技術(shù)提取、濃縮、干燥、制粒而成的、供中醫(yī)臨床靈活加減使用的“免煎飲片”［1］，具有劑量準確、質(zhì)量可控、攜帶和服用方便等優(yōu)點［2］。本文采用兩種提取方法（水煎煮法、水蒸汽蒸餾併煎煮法）研制牡丹皮配方顆粒，選用膠束電動毛細管色譜法（MEKC）比較丹皮酚、芍藥苷含量及提取物組成的異同，旨在探討不同提取方式對提取物化學組成的影響，為牡丹皮配方顆粒的制備工藝提供科學依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 CL1030型高效毛細管電泳儀（北京彩陸科學儀器有限公司）；紫外檢測器；未涂層石英毛細管柱（內(nèi)徑50μm，有效長度42 cm；河北永年光導纖維廠）；pHS-3CT型 pH計（上海大普儀器有限公司）；CP225D電子天平（德國Sartorious公司）；KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；石英亞沸高純水提取器（江蘇金城教學儀器廠）。

1.2 試藥 丹皮酚、芍藥苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所（批號：110708-200505、110736-200525）；牡丹皮飲片購自亳州藥材市場，經(jīng)安徽中醫(yī)學院周建理教授鑒定為Paeon ia S uff ru ticosa Andr的干燥根皮；十二烷基硫酸鈉（SDS）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）均為分析純；甲醇為色譜純，水為亞沸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 測定條件 運行緩沖液為20 mmol／L磷酸鹽-40 mmol／L SDS 溶液（pH ＝ 6.4），檢測波長 254 nm，運行電壓15 kV，虹吸進樣（5 s）；柱溫為室溫；運行緩沖液和樣品溶液均用0.45μm微孔濾膜濾過；每次進樣前依次用0.1 mol／L NaOH和H2O沖洗5 min，再用運行緩沖液沖洗10 min。

2.2 對照品溶液的配制 精密稱取芍藥苷對照品適量至10 mL量瓶中，用20%甲醇溶解，并定容至刻度，制得濃度為1.03 mg／mL的芍藥苷對照品溶液。同法配制濃度為0.75 mg／mL丹皮酚對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 供試品1（水煎煮法） 取牡丹皮飲片20 g，精密稱重，加水200 mL，浸泡120 min后煎煮2次，每次20 min，合并煎液，濃縮成稠膏狀；取浸膏 0.2 g，精密稱重，加20%甲醇100 mL，稱重，超聲處理（40 KHz，250 W）30 min，放冷，用20%甲醇補足減失的重量，濾過；取續(xù)濾液過0.45μm微孔濾膜，即得供試品溶液1。

2.3.2 供試品2（水蒸汽蒸餾併煎煮法） 取牡丹皮飲片20 g，精密稱重，加水適量，浸泡120 min后水蒸氣蒸餾，餾出液另器收集；藥渣煎煮 2次，每次20 min。餾出液置冰箱冷藏24 h，待有結(jié)晶析出后取出，倒出上清液，分離出丹皮酚結(jié)晶；上清液與水煎液合并，濃縮成稠膏狀，加入丹皮酚結(jié)晶并攪拌均勻；取浸膏0.2 g，精密稱重，加20%甲醇100 mL，稱重，超聲處理30 min，放冷，用20%甲醇補足減失的重量，濾過；取續(xù)濾液過0.45μm微孔濾膜，即得供試品溶液2。

2.3.3 供試品3 取牡丹皮飲片0.1 g，精密稱重，加20%甲醇 100 mL，稱重，超聲處理 30 min，放冷，用20%甲醇補足減失的重量，濾過；取續(xù)濾液過0.45μm微孔濾膜，得供試品溶液3。

2.4 測定 將對照品溶液、供試品溶液1，2，3依序定量進樣，照2.1項下毛細管電泳條件測定峰面積，外標法計算含量。

圖1 水煎煮制備牡丹皮配方顆粒的MEKC圖

圖2 水蒸汽蒸餾并煎煮制備牡丹皮配方顆粒的MEKC圖

圖3 牡丹皮飲片的MEKC圖

2.5 結(jié)果 2種提取方法制備牡丹皮配方顆粒的供試品溶液及飲片供試品溶液的膠束電動毛細管電泳圖見圖1，圖2，圖3；供試品中丹皮酚和芍藥苷含量見表1。

3 討論

牡丹皮主要活性成分是丹皮酚類、芍藥苷等化合物［3］，其中丹皮酚是現(xiàn)行版中國藥典含量測定的指標成分［4］。由于丹皮酚易揮發(fā)，在水中溶解度差，因此用傳統(tǒng)的水煎煮提取損失量較大。研究結(jié)果表明，采用水蒸氣蒸餾併煎煮法制備牡丹皮配方顆粒，其提取物除了有效提高丹皮酚的含量，在芍藥苷的含量測定結(jié)果和圖譜上還顯示出與水煎煮法提取物的組成基本一致；與牡丹皮飲片MEKC譜圖比較可知，兩種提取方法基本保持了牡丹皮飲片水溶性成分的組成；兩法比較，芍藥苷提取率基本一致，丹皮酚提取率以水蒸氣蒸餾併煎煮法高；后一結(jié)果與文獻［5］一致；本文采用MEKC，克服了芍藥苷等非揮發(fā)、水溶性成分的在氣相色譜法中無法直接分析的局限，使水不溶、揮發(fā)性成分和水溶性、非揮發(fā)性成分同時被檢測。

本文在文獻［6-7］的基礎(chǔ)上考察了同時測量丹皮酚和芍藥苷含量的條件，對緩沖液的濃度、pH范圍進行了優(yōu)化試驗。條件試驗發(fā)現(xiàn)，當pH＜7時，芍藥苷和丹皮酚與相鄰峰有較高的分離度和較好的峰形；當pH＞7時，隨著堿性增加，遷移時間明顯縮短，各組分峰重疊。綜合考慮分離效果和遷移時間等因素，確定緩沖液最佳pH值為6.4。磷酸鹽濃度在10～40 mmol／L的范圍變化時，隨著濃度增加，分離度增加，但同時電流增加，使基線不穩(wěn)，兼顧兩者關(guān)系，將磷酸鹽濃度定為20 mmol／L。

本文建立的MEKC較好地反映了兩種方法制備牡丹皮配方顆粒的差異，表明水蒸氣蒸餾併煎煮法制備牡丹皮配方顆粒既能保留煎煮法對水溶性成分的提取，又能獲得對揮發(fā)性成分的較高收率，是制備含有揮發(fā)性藥效成分的較佳提取方法。

表1 丹皮酚和芍藥苷含量測定結(jié)果（n＝2）

［1］涂瑤生，畢曉黎.中藥配方顆粒國際化有關(guān)問題的思考［J］.世界科學技術(shù)—中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2007，9（2）：77-81.

［2］仇法新，高福君.中藥配方顆粒的發(fā)展現(xiàn)狀及應用前景［J］.中國藥房，2007，18（3）：163.

［3］嚴永清.中藥辭海［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，1996：282-5.

［4］中華人民共和國藥典委員會.中國藥典［S］.北京：化學工業(yè)出版社，2005：119.

［5］王立，侯世祥，胡平，等.牡丹皮藥材的最適提取工藝研究［J］.中國中藥雜志，2005，30（8）：569-571.

［6］戴淑娟，謝曉梅，張勇，等.兩種方法制備牡丹皮顆粒的毛細管氣相色譜比較［J］.安徽中醫(yī)學院學報，2007，26（2）：43.

［7］李利軍，馮軍，黃文藝，等.高效毛細管電泳同時分離測定梔子苷、芍藥苷及丹皮酚的研究［J］.分析實驗室，2007，26（5）：38-41.