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    山西省黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性檢測

    2010-08-10 02:22:46趙曉軍周建波
    中國蔬菜 2010年22期
    關(guān)鍵詞:抗藥性灰霉病保護(hù)地

    趙曉軍 張 鑫 周建波

    (山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所,山西太原 030031)

    灰霉病是保護(hù)地黃瓜的主要病害之一,給黃瓜生產(chǎn)造成了很大損失。黃瓜灰霉病主要為害黃瓜的幼瓜和葉片,病菌從雌花的花瓣侵入,花瓣腐壞,瓜蒂頂端開始發(fā)病,瓜蒂感病向內(nèi)擴(kuò)展,致使感病果實(shí)呈灰白色,軟腐,長出大量灰綠色霉菌層(孫茜一,2006)。目前控制該病害的主要手段仍為化學(xué)防治,二甲酰亞胺類殺菌劑腐霉利是國外20世紀(jì)70年代開發(fā)的對灰葡萄孢有高度活性的一類殺菌劑。20世紀(jì)80年代引入我國后,作為對灰葡萄孢的高效殺菌劑,二甲酰亞胺類殺菌劑取代了苯并咪唑類殺菌劑而得到廣泛應(yīng)用,曾有過較好的防效,但在我國很多地區(qū)已有灰霉菌對其產(chǎn)生抗藥性的報(bào)道(劉波和葉鐘音,1992;黃金寶和李明遠(yuǎn),1994;李林和徐作埏,1997;劉德榮和謝丙炎,2001)。

    山西省保護(hù)地蔬菜種植歷史長,面積廣,近年來呈逐年增長趨勢。黃瓜作為保護(hù)地蔬菜種植的重要品種,種植面積也快速增加,然而黃瓜灰霉病的普遍發(fā)生卻嚴(yán)重影響了黃瓜的產(chǎn)量。腐霉利作為當(dāng)?shù)氐某S盟巹盟帤v史較長,田間防治效果明顯下降,究其原因可能是灰霉病菌對此類藥劑產(chǎn)生了抗藥性,早在2003年韓巨才等(2003)對山西省蔬菜類灰霉病菌進(jìn)行了腐霉利的抗藥性監(jiān)測,本試驗(yàn)檢測了近年來山西省黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平,以期為黃瓜生產(chǎn)提供指導(dǎo)。

    1 材料與方法

    1.1 供試藥劑

    96 %腐霉利原藥,由浙江禾益農(nóng)化有限公司提供。

    1.2 供試菌株的采集、分離和鑒定

    從山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)采集黃瓜灰霉病病果和病葉,以大棚或溫室為單位采集病樣,一個(gè)大棚或溫室采集一個(gè)典型病果或病葉,菌樣以“采樣地點(diǎn)(縣或村)的大寫拼音(聲母)+序號”命名。

    將病樣帶回實(shí)驗(yàn)室,在無菌操作條件下純化保存菌種,以進(jìn)行病原菌抗藥性室內(nèi)生物測定。

    參照魏景超(1979)的方法鏡檢灰霉病菌株?;颐共【鷮侔胫鷣嗛T葡萄孢屬真菌,其分生孢子梗直或屈曲,褐色,光滑,分枝,分枝末端常明顯膨大,形成無色或淡色的瓶狀產(chǎn)孢細(xì)胞。產(chǎn)孢細(xì)胞多芽生,分生孢子圓形至橢圓形,單細(xì)胞,無色或灰色,大?。?.50~16.00)mm×(5.00~9.25)mm,聚集成灰色孢子堆(魏景超,1979;呂佩柯 等,1992)。

    1.3 供試藥劑的配制

    腐霉利原藥以丙酮為溶劑配成濃度為1 000 μg·mL-1的母液,后用無菌水分別稀釋為500、100、10、1、0.5、0.1 μg·mL-1的系列濃度溶液。

    1.4 含藥PDA培養(yǎng)基的制作

    馬鈴薯去皮切成小塊稱取定量,加水煮沸30 min后用雙層紗布過濾去渣,取上清液定容。再加入葡萄糖,煮沸直至完全融化后加入瓊脂粉,攪拌待完全融化后分裝到三角瓶中。分裝時(shí),三角瓶中培養(yǎng)基與藥液體積比為9∶1,對照以蒸餾水代替藥液,封口濕熱滅菌后即可使用。

    1.5 抗藥性室內(nèi)生物測定方法

    首先將冷凝的含藥培養(yǎng)基溶化,然后冷卻至 50~60 ℃后在無菌條件下將含藥培養(yǎng)基倒入直徑9 cm的培養(yǎng)皿中鋪平,每皿約10 ML,每處理設(shè)3次重復(fù)。

    測定灰霉病菌的抗性水平采用 FAO推薦的菌落生長速率法(周明國 等,1987),用直徑5 mm的打孔器沿灰霉菌菌落生長邊緣切取菌塊,分別放入系列濃度含藥培養(yǎng)基平板中心。23~25 ℃條件下培養(yǎng)3 d后用十字交叉法測量菌落直徑,計(jì)算各菌株對腐霉利的EC50值,分析其抗性水平。

    1.6 抗性頻率、抗性水平和抗性類型

    根據(jù)抗性水平將不同的黃瓜灰霉病菌株分為5個(gè)類型:敏感型(S),抗性水平<1倍;低抗型(LR),1倍≤抗性水平<10倍;中抗型(MR),10倍≤抗性水平<100倍;高抗型(HR),100倍≤抗性水平<1 000倍;特高抗型(SR),抗性水平≥1 000倍。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 菌株采集分離

    分別于山西省8個(gè)地區(qū)的黃瓜主要種植區(qū)進(jìn)行采樣,并分離得到177株黃瓜灰霉病菌株。其中太原市15株,晉中市25株,長治市24株,臨汾市19株,運(yùn)城市34株,晉城市26株,朔州市23株,大同市11株。

    2.2 黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

    根據(jù)周明國和葉鐘音(1991)的研究結(jié)果,將黃瓜灰霉病菌對腐霉利的敏感基線定為1 μg·mL-1。如表1、2所示,在檢測的177株菌株中有敏感菌株34株,低抗菌株76株,中抗菌株64株,高抗菌株3株,無特高抗菌株。所測灰霉病菌株對腐霉利的抗性水平最高 256.6倍,最低0.003倍,平均抗性水平13.9倍,其中太原市20.1倍、晉中市21.1倍、長治市26.5倍、臨汾市 12.3倍、運(yùn)城市 13.6倍、晉城市7.0倍、朔州市3.5倍、大同市3.5倍。

    表1 黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

    續(xù)表

    2.3 黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性頻率

    本試驗(yàn)所檢測的177株黃瓜灰霉病菌株中有34株敏感菌株,143株抗性菌株,對腐霉利的總體抗性頻率為 81.36 %。各地區(qū)黃瓜灰霉病菌株對腐霉利的抗性頻率分別為:太原市53.33 %、晉中市84.00 %、長治市100.00 %、臨汾市78.95 %、運(yùn)城市85.29 %、晉城市84.62 %、朔州市69.57 %、大同市81.82 %(圖1)。

    表2 山西省各地區(qū)黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平

    圖1 山西省各地區(qū)黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性頻率

    3 結(jié)論與討論

    由本試驗(yàn)結(jié)果可知:從抗性頻率來看,山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利普遍產(chǎn)生抗藥性,各調(diào)查地區(qū)黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性頻率均在50 %以上,其中長治市最高,運(yùn)城市次之,之后依次為晉城市、晉中市、大同市、臨汾市、朔州市、太原市;從抗性水平來看,山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利的總體抗性水平較低,各調(diào)查地區(qū)黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗性水平有所差異,其中長治市最高、晉中市次之,之后太原市、運(yùn)城市、臨汾市、晉城市,大同市及朔州市抗性水平依次降低。

    山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利普遍產(chǎn)生了抗藥性,但抗性水平較低,分析原因:山西省保護(hù)地黃瓜種植歷史較長,種植戶普遍使用主要成分為乙霉威和腐霉利的藥劑防治黃瓜灰霉病,且出現(xiàn)了用藥過量和過頻的現(xiàn)象,導(dǎo)致了保護(hù)地黃瓜灰霉病菌普遍對腐霉利產(chǎn)生抗藥性;山西省北部地區(qū)相對南部地區(qū)抗性水平較低,分析原因:北部地區(qū)氣溫偏低,往年僅在夏季大田種植蔬菜,蔬菜生長季間隔期長,灰霉病發(fā)生較少。近幾年,隨著保護(hù)地蔬菜種植面積不斷擴(kuò)大,為灰霉病菌的發(fā)生和流行提供了有利條件,蔬菜灰霉病發(fā)生日趨嚴(yán)重,農(nóng)藥使用頻率也不斷提高,經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn),北部地區(qū)的蔬菜種植戶過頻地使用腐霉利進(jìn)行煙熏或噴霧,從而導(dǎo)致灰霉病菌對其普遍產(chǎn)生了抗藥性,但相對南部和中部地區(qū)發(fā)病較輕,用藥相對較少,用藥歷史較短,所以灰霉病菌的抗性水平相對較低。中部地區(qū)如太原市從抗性水平上看和南部地區(qū)差不多,因?yàn)橛幸粋€(gè)樣本抗性水平極高,造成平均數(shù)上揚(yáng),但抗性頻率較南部地區(qū)低,總體上相對于南部地區(qū)較低。所以山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利抗藥性呈由南到北逐漸降低的趨勢。

    盡管山西省保護(hù)地黃瓜主要種植區(qū)的灰霉病菌對腐霉利的總體抗性水平較低,但已普遍產(chǎn)生了抗藥性,因此黃瓜灰霉病菌對腐霉利的抗藥性已成為山西省保護(hù)地黃瓜生產(chǎn)上的一個(gè)重要問題,開展保護(hù)地黃瓜灰霉病菌對二甲酰亞胺類殺菌劑的抗藥性治理勢在必行。病原菌抗藥性治理一般采用的治理策略有:① 加強(qiáng)田間抗藥性監(jiān)測;② 科學(xué)使用農(nóng)藥,減少甚至停用已產(chǎn)生抗藥性的同類型藥劑,尋求新的替代類型,以及合理進(jìn)行殺菌劑的輪換和混配;③ 開展綜合防治。該項(xiàng)工作是一項(xiàng)長期而艱巨的任務(wù),主要表現(xiàn)在周期長、見效慢、需地區(qū)間統(tǒng)籌規(guī)劃,值得進(jìn)一步深入探討。

    韓巨才,閆秀琴,閻秀琴,張永杰.2003.灰霉病原菌對速克靈的抗性監(jiān)測.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,23(4):299-303.

    黃金寶,李明遠(yuǎn).1994.不同地區(qū)灰霉病菌對速克靈的抗性及對策.中國植病學(xué)會華北分會論文集:54.

    李林,徐作埏.1997.山東省灰霉菌對速克靈、多菌靈田間抗性檢測研究初報(bào).山東農(nóng)業(yè)科學(xué),(3):32-35.

    劉波,葉鐘音.1992.速克靈抗性灰霉病菌菌株性質(zhì)的研究.植物保護(hù)學(xué)報(bào),19(4):29-30.

    劉德榮,謝丙炎.2001.應(yīng)用特異等位PCR快速鑒定灰霉病菌抗苯來特與乙霉威菌株.菌物系統(tǒng),20(2):238-243.

    呂佩柯,李明遠(yuǎn),吳鋸文,易齊,張寶棣,姜克英,文奇,李明周,王潤初.1992.中國蔬菜病蟲原色圖譜.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社:6-13.

    孫茜一.2006.黃瓜疑難雜癥圖片對照診斷與處方.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社:14-15.

    魏景超.1979.真菌鑒定手冊.上海:上??茖W(xué)技術(shù)出版社:259-516.

    周明國,葉鐘音,劉經(jīng)芬.1987.南京市郊灰霉菌對苯并咪唑類殺菌劑田間抗性的檢測.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),(2):53-57.

    周明國,葉鐘音.1991.交鏈孢霉對速克靈的抗藥性研究.植物保護(hù),17(2):6-7.

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