康胰湯對(duì)大鼠慢性胰腺炎的防治作用

么國(guó)旺，張淑坤，崔乃強(qiáng),李東華

康胰湯對(duì)大鼠慢性胰腺炎的防治作用

么國(guó)旺1，張淑坤2，崔乃強(qiáng)1,李東華2

目的：探討康胰湯對(duì)大鼠慢性胰腺炎模型的防治作用。方法：體重180～200 g雄性Wistar大鼠30只，隨機(jī)分為3組,模型組大鼠尾靜脈注射DBTC溶液(7 mg/Kg)，對(duì)照組尾靜脈注射相同體積的DBTC的溶解液，中藥治療組尾靜脈注射DBTC溶液(7 mg/Kg)，自第2 d起給予康胰湯灌胃（生藥量14 g/Kg）,對(duì)照組、模型組給予同等體積生理鹽水。3組連續(xù)灌胃28 d,常規(guī)飼養(yǎng)，28 d后取材。行尿BT-PABA試驗(yàn)，經(jīng)下腔靜脈取血，用于血清淀粉酶、脂肪酶檢測(cè)；完整切取大鼠胰腺組織，用于組織學(xué)觀察。結(jié)果:與模型組比，中藥治療組纖維組織的含量明顯減少（P＜0.05）；胰腺外分泌功能明顯改善（P＜0.05）。結(jié)論:康胰湯對(duì)大鼠慢性胰腺炎纖維組織生成及改善胰腺外分泌有明顯防治作用。

康胰湯；慢性胰腺炎；防治

慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)是指多種原因所致的胰腺局部、節(jié)段性或彌漫性的慢性炎癥,伴臨床上表現(xiàn)有胰腺內(nèi)、外分泌功能的進(jìn)行性減退等多種臨床特征，病理上以胰腺腺泡萎縮、小葉周纖維化和最終全小葉瘢痕及鈣化為特征[1]。中醫(yī)認(rèn)為[2-10]：CP病機(jī)是本虛標(biāo)實(shí)，本虛主要為脾虛，標(biāo)實(shí)主要表現(xiàn)為氣滯血瘀、濕熱、食積、痰濕等。其中，脾虛是形成氣滯血瘀的主要原因，而肝失疏泄、氣機(jī)郁滯、血瘀不行，又可加重臟腑功能失調(diào)，加快脾虛進(jìn)程。我們?cè)诖嘶A(chǔ)上以“健脾活血、理氣止痛”立法，以法立方“康胰湯”，探討本方對(duì)大鼠CP模型的防治作用及機(jī)理。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重180～200 g的健康雄性Wistar大鼠30只（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SCXK津2005-0001）。

1.2 主要試劑和儀器二氯二丁基酯(Dibutyltin dichloride，DBTC，Sigma公司)；N-本甲酰-L-酪氨酰-對(duì)氨基苯甲酸(N-Benzoyl-L-tyrosyl-Paminobenzoic Acid,BT-PABA，Sigma公司)；Masson三色染色試劑盒(上海新奧生物有限公司)；722分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)。中藥“康胰湯”:柴胡、陳皮、黃芩、丹參、元胡等各6 g，購(gòu)于南開(kāi)醫(yī)院中藥房。加8倍量水浸泡4 h，加熱煎煮l h，藥渣再加6倍水，煎煮l h，過(guò)濾，兩次濾液合并，濃縮成濃度為1∶1(即l mL水煎劑含1 g生藥)的水煎劑。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物模型制備[11]

1.3.1.1分組30只體重180～200 g雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為3組,每組10只，分別為模型組、對(duì)照組、中藥組。

1.3.1.2給藥方式模型組大鼠尾靜脈注射DBTC溶液(7 mg/kg)，對(duì)照組尾靜脈注射相同體積的DBTC溶解劑（乙醇、甘油、二甲亞砜(比例1∶2∶2)），中藥治療組尾靜脈注射DBTC溶液(7 mg/kg)，自第2 d起給予“康胰湯”灌胃（14 mL/（kg·d））；對(duì)照組、模型組給予同等比例的生理鹽水，3組連續(xù)灌胃28 d。

1.3.1.3方法28 d之后行尿BT-PABA試驗(yàn)，后各組大鼠腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg）麻醉,開(kāi)腹經(jīng)下腔靜脈取血，用于血清淀粉酶、脂肪酶檢測(cè)；完整切取大鼠胰腺組織，10%的福爾馬林溶液固定,用于組織學(xué)觀察。

1.3.2 尿BT-PABA試驗(yàn)參照Smith改良Bratton-marshallf法。PABA在酸性介質(zhì)中經(jīng)重氮化后與N-1-萘乙二胺鹽酸鹽產(chǎn)生偶聯(lián)反應(yīng)，生成的偶氮染料，與標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可求出尿中PABA含量。

1.3.3 血清淀粉酶、脂肪酶檢測(cè)由天津南開(kāi)醫(yī)院檢驗(yàn)科全自動(dòng)生化儀測(cè)定。

1.3.4 病理學(xué)檢查10%的福爾馬林溶液固定，常規(guī)石蠟切片,HE染色,觀察組織病理學(xué)變化。

1.3.5 胰腺組織膠原纖維染色采用Masson三色染色法，纖維化程度及評(píng)價(jià)方法按試劑盒說(shuō)明標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s)表示,組間比較采用方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 一般觀察大鼠尾靜脈注射DBTC溶液后，第2 d開(kāi)始出現(xiàn)倦臥、少動(dòng)、食量減少、背毛蓬松失去光澤等，部分大鼠出現(xiàn)便稀、肛周污染，有時(shí)出現(xiàn)煩躁不安，體重增加緩慢；中藥組在灌胃后10 d左右，前面所述癥狀有所減輕，體重增加加快(見(jiàn)表1)。

表1 3組大鼠不同時(shí)期體重±s，g，n=10)

表1 3組大鼠不同時(shí)期體重±s，g，n=10)

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.01；與模型組比較,▲P＜0.01

組別對(duì)照組模型組中藥治療組實(shí)驗(yàn)前192.8±7.6 192.0±7.1 193.5±7.3實(shí)驗(yàn)后290.7±20.0 211.5±20.1*292.4±16.2▲

2.2 大體觀察模型組：胰腺組織出現(xiàn)不同程度萎縮,表面不規(guī)則、粗糙，呈淡紅色或灰白色，膽總管出現(xiàn)不同程度的擴(kuò)張；對(duì)照組：胰腺呈白色、飽滿、表面光滑，膽總管及胰管分布均勻；中藥組：與對(duì)照組胰腺組織比較無(wú)明顯改變。

2.3 病理組織學(xué)觀察

2.3.1HE染色對(duì)照組：胰腺腺泡呈嗜堿性，腺細(xì)胞呈錐體形，胞漿豐滿細(xì)胞核呈圓形位于基底部，細(xì)胞大小一致，排列整齊，胰腺小葉輪廓清晰，分布均勻，小葉間結(jié)締組織中可見(jiàn)胰導(dǎo)管及血管等；模型組：纖維組織增生明顯，腺泡萎縮變形，有的形成炎性包裹，部分腺泡萎縮壞死，形成炎性肉芽腫。小葉結(jié)構(gòu)不清，部分消失；中藥組：未見(jiàn)明顯的纖維組織增生，炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少(見(jiàn)圖1)。每個(gè)切片隨機(jī)選取一個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)病變組織情況(見(jiàn)表2)。

表2 3組大鼠胰腺組織HE染色結(jié)果陽(yáng)性率對(duì)照表(n=10，%)

2.3.2Masson三色染色法染色對(duì)照組：未見(jiàn)纖維組織，胰腺組織良好；模型組：胰腺小葉輪廓消失，大量纖維組織增生，其內(nèi)散在較多炎細(xì)胞浸潤(rùn)；中藥治療組：胰腺小葉內(nèi)及血管周圍見(jiàn)少量纖維組織（見(jiàn)圖2）。每個(gè)切片隨機(jī)選取一個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)病變組織情況(見(jiàn)表3)。

表3 3組大鼠胰腺組織Masson染色結(jié)果陽(yáng)性率（n=10，%）

3.4 尿BT-PABA試驗(yàn)血清淀粉酶、脂肪酶測(cè)定模型組PABA排除率明顯下降，中藥組排除率下降不明顯；模型組、中藥組血清淀粉酶測(cè)試結(jié)果無(wú)明顯差異，中藥治療組較模型組PABA排除率升高、血清脂肪酶水平亦升高（表4）。

表4 3組大鼠PABA排除率、血清淀粉酶、脂肪酶（n=10,±s）

表4 3組大鼠PABA排除率、血清淀粉酶、脂肪酶（n=10,±s）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P＜0.01；與對(duì)照組比較，＃P＜0.05

組別對(duì)照組模型組中藥治療組n 10 10 10排除率（%）85.49±6.51 46.52±8.06＃78.21±10.21**血清淀粉酶（u/L）190 1.4±208.0 190 1.4±209.6 190 0.3±214.0血清脂肪酶（u/L）24.2±19.6 2.1±3.0＃24.6±21.0*

圖1 3組HE染色圖片

圖2 3組Masson染色圖片

3 討論

CP屬于中醫(yī)“胃脘痛”、“腹痛”、“泄瀉”、“痞證”、“癥瘕積聚”等范疇。中醫(yī)學(xué)的臟腑理論中對(duì)“胰”的概念沒(méi)有明確的記載，所以在中醫(yī)文獻(xiàn)中沒(méi)有CP相關(guān)中醫(yī)病名及專門(mén)論述，故CP的中醫(yī)證候?qū)傩圆o(wú)定論。而與該病相關(guān)的臨床表現(xiàn)及證治的論述散見(jiàn)于脾心痛、肝脾郁熱、腹痛、脅痛、結(jié)胸、內(nèi)癰、痰凝血癖、癥瘕積聚等篇章論述之中。

中醫(yī)所提到的“脾”與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的“脾”不是等同的關(guān)系，中醫(yī)認(rèn)為[12]，脾為水谷之海，氣血生化之源，臟腑經(jīng)絡(luò)之樞，疾病發(fā)生之由，故稱脾為后天之本。按現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的解釋，中醫(yī)學(xué)的脾臟是一個(gè)包括現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的消化系統(tǒng)及相關(guān)多臟器協(xié)同完成以消化吸收為主的生理功能單位?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)的胰腺是消化系的重要器官之一，是兼有內(nèi)分泌和外分泌功能的腺體。胰腺外分泌部分由腺泡和導(dǎo)管組成，其分泌液有很強(qiáng)的消化能力，是所有消化液中消化食物最全面、消化力最強(qiáng)的一種消化液。胰腺內(nèi)分泌即胰島，在調(diào)節(jié)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝方面起著積極的作用。從胰腺的內(nèi)外分泌功能來(lái)看，主要是對(duì)食物的消化及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝有著重要作用，而這正是脾主運(yùn)化功能的一部分。由此可見(jiàn)，胰腺的功能蘊(yùn)涵于中醫(yī)的脾的生理功能之中。

大鼠尾靜脈注射DBTC后，大鼠出現(xiàn)倦臥、少動(dòng)、食量減少、被毛蓬松失去光澤等，部分大鼠腹部出現(xiàn)包塊、便稀、肛門(mén)污染等一系列類似脾虛證癥狀的表現(xiàn)。HE和Masson染色顯示，胰腺的腺泡萎縮明顯，大量纖維增生及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，證實(shí)了胰腺的外分泌破壞嚴(yán)重，導(dǎo)致其外分泌功能的下降。同時(shí)PABA排除率明顯下降，更加進(jìn)一步證實(shí)胰腺外分泌功能下降。而這正符合了CP診斷標(biāo)準(zhǔn)。從該模型的癥狀、體征來(lái)看，符合脾虛證的判斷標(biāo)準(zhǔn)；從組織形態(tài)學(xué)角度來(lái)看，與CP病理改變基本相符。尿中PABA排除率明顯下降，證實(shí)胰腺外分泌功能下降。把三者結(jié)合起來(lái)就證明大鼠尾靜脈注射DBTC建立的大鼠脾虛型CP動(dòng)物模型是成立的。

我們認(rèn)為，脾虛始終貫穿CP全過(guò)程，CP病機(jī)是本虛標(biāo)實(shí)，本虛主要為脾虛，標(biāo)實(shí)主要表現(xiàn)為血癖氣滯。具體而言，脾虛則中氣失于健運(yùn)，影響肝的疏泄功能，導(dǎo)致氣機(jī)郁滯，氣滯則血行不暢，不通則痛。脾為后天之本，氣血生化之源；氣為血之帥，氣行則血行，氣滯則血瘀，故脾虛肝郁氣滯日久會(huì)導(dǎo)致血瘀，血瘀則痛。因此，提出“健脾活血理氣止痛”法，作為治療本病的基本法則，以法立方“康胰湯”。

方中[13]陳皮性苦，味辛、溫，歸肺、脾經(jīng)，理氣健脾，燥濕化痰；現(xiàn)代藥理學(xué)研究，陳皮具有陳皮揮發(fā)油，能促進(jìn)大鼠正常胃液的分泌,有助于消化；可增加膽汁及膽汁內(nèi)固體物的排泄量，抗炎作用。黃芩性寒，味苦，歸肺、膽、脾、大腸、小腸經(jīng)，有清熱燥濕之功；現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)，有抗炎作用，對(duì)免疫、消化等系統(tǒng)均有保護(hù)作用。元胡辛、苦，溫，歸肝、脾經(jīng)，活血，理氣止痛；現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)，其有降低胃酸、胃蛋白酶的量及止痛作用。丹參苦，微寒，歸心、肝經(jīng)，祛瘀止痛，活血通經(jīng)；現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)，丹參能夠促進(jìn)血液循環(huán)，增加血流量，防止血小板凝結(jié)作用?？v觀本方，陳皮、黃芩燥濕健脾為君，丹參等藥活血祛瘀為臣，佐以元胡共同發(fā)揮理氣活血止痛作用，相互配合起到健脾活血理氣止痛功效。

模型組血清淀粉酶未發(fā)生變化及血清脂肪酶下降，與有些文獻(xiàn)報(bào)道不一致，可能是由于本模型表現(xiàn)出的慢性胰腺炎對(duì)碳水化合物的消化與吸收尚有一定功能，而血脂肪酶下降則是CP的主要病理特征，考慮和胰腺外分泌功能受損有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，康胰湯對(duì)改善CP大鼠胰腺外分泌功能恢復(fù)有良好的作用，其機(jī)制可能是康胰湯能減輕胰腺腺泡的萎縮、纖維組織的增生及炎性浸潤(rùn)。

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（收稿：2009-09-02修回：2010-05-20）

（責(zé)任編輯劉洪斌田在善）

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Preventive and Therapeutic Effects of Kangyi(康胰)Decoction on Chronic Pancreatitis in Rats

Yao

Guowang,Zhang Shukun,Cui Naiqiang,et al.The Biliopancreatic Center,Tianjin Nankai Hospital,Tianjin (300100),China

ObjectiveTo prove the preventive and therapeutic effect of Kangyi（康胰）decoction in rat models of chronic pancreatitis.MethodsThirty male Wistar rats weighing 180～200 g were randomly divided into three groups.Dibutyltin dichloride(DBTC)solution was injected into the caudal vein of the model rats at a dose of 7 mg/kg body weight.The control group was injected into the caudal vein with DBTC lytic agent at the same volume.In addition to being injected like model group,the medicinal herbal group has been lavaged with JianYi decoction at a dose of 14 mL/kg body weight for 28 days,these rats were bred with routine method for 28 days and weighted.Urine BT-PABA was tested to evaluate exocrine of the pancreas.Blood was collected through the inferior vena cava to detect serum amylase and lipase.Complete pancreas tissue was taken for histologic observation.ResultsJianyi decoction could reduce the content of fibrous tissue much less than the model group.(P<0.05);and improve the exocrine function of pancreas(P<0.05).ConclusionJianyi decoction is valuable in the prevention and treatment of rat model of chronic pancreatitis.

Kangyi decoction,chronic pancreatitis

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期刊：[序號(hào)]作者名.文題[J].刊名，年，卷(期)：起頁(yè).

1.天津市南開(kāi)醫(yī)院膽胰中心（天津300100）

2.天津市中西醫(yī)結(jié)合急腹癥研究所（天津300100）

崔乃強(qiáng)，Tel：022-27435292；E-mail:nctsui@126.com

R657.5+1;Q95-33

A

1007-6948(2010)05-0565-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2010.05.016

的