玉竹提取物A對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和IL-2產(chǎn)生的影響

關(guān)玲敏 潘興瑜*

玉竹（polygonatum odoratum var plurif l orum ohwi）為百合科黃精屬植物藥，具有扶正固本、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、養(yǎng)陰潤(rùn)燥和生津止渴的功效，中醫(yī)認(rèn)為有延年益壽和抗衰老作用，并常用于治療糖尿病和結(jié)核等疾病。現(xiàn)代藥理研究其主要成分有多糖、生物堿和菸酸等成分，證明有強(qiáng)心、擴(kuò)張血管、降血壓、降血脂和降血糖等作用[1]。有關(guān)玉竹對(duì)免疫功能的作用各家報(bào)道不一，有人認(rèn)為玉竹具有增強(qiáng)免疫作用[1]。也有資料表明玉竹具有類似腎上腺皮質(zhì)激素樣作用[2]。本文對(duì)東北遼西山區(qū)所產(chǎn)玉竹的根莖進(jìn)行提取，以玉竹提取物A為研究對(duì)象，探討其對(duì)免疫功能的影響和作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

BALB/C小鼠，6～8W，由本校動(dòng)物室提供；Con-A（Sigma，美國(guó)）；MTT（Fluka，瑞士）；玉竹提取物A（干品，由本室研究人員采集和提?。籖PMI1640（Gibco，美國(guó)）。

1.2 小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞密度為1×106/mL，加Con-A6μg/mL刺激和不加Con-A刺激兩種形式。5%CO2條件下培養(yǎng)72h，于前4h加MTT，采用本室改進(jìn)的MTT比色法[6]測(cè)定OD值。IP=（1-實(shí)驗(yàn)組OD值/對(duì)照組OD值）×100%。

1.3 小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2的產(chǎn)生

按文獻(xiàn)[4,5]的方法，細(xì)胞密度為4×106/mL，采用5μg/mL的Con-A做為誘導(dǎo)劑，實(shí)驗(yàn)組添加不同劑量的玉竹提取物A，培養(yǎng)48h后收獲上清凍存待測(cè)。

1.4 小鼠脾淋巴細(xì)胞去除Con-A和玉竹提取物的IL-2產(chǎn)生

按文獻(xiàn)[6]的方法，Con-A濃度為7μg/mL，細(xì)胞密度為1×107/mL，實(shí)驗(yàn)組添加不同劑量的玉竹提取物A，培養(yǎng)6h后洗二次，去除Con-A和玉竹提取物A，重懸細(xì)胞密度為4×106/mL，繼續(xù)培養(yǎng)42h后收獲上清凍存待測(cè)。

1.5 小鼠IL-2的測(cè)定

小鼠IL-2靶細(xì)胞按文獻(xiàn)[7]的方法誘導(dǎo)；小鼠IL-2的活性測(cè)定采用文獻(xiàn)[3]的方法測(cè)定。IP=（1-實(shí)驗(yàn)組OD/對(duì)照組OD）×100%。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法

采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

玉竹提取物A對(duì)Con-A誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化具有較強(qiáng)的抑制作用，其中以1μg/mL的劑量抑制作用相對(duì)為強(qiáng)，見表1；對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞自然轉(zhuǎn)化也有一定的抑制作用，但是抑制作用是有限的，低劑量沒有作用，見表2；玉竹提取物A對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞經(jīng)Con-A誘導(dǎo)的IL-2產(chǎn)生也有顯著的抑制作用，6h后去除Con-A和玉竹提取物A，其抑制作用不能解除，二者最有效的抑制劑量均在10μg/mL，見表3和4。

3 討 論

玉竹提取物A對(duì)小鼠體外免疫功能具有顯著的抑制作用，用Con-A最小劑量誘導(dǎo)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明0.1μg/mL的玉竹提取物A便可產(chǎn)生較強(qiáng)的抑制作用，對(duì)非Con-A誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞自然轉(zhuǎn)化也有一定的抑制作用，但抑制作用較弱，低劑量并無(wú)此作用，二者均呈量效關(guān)系。以上結(jié)果提示玉竹提取物A對(duì)免疫功能的抑制作用是有限度的，只抑制增值的淋巴細(xì)胞，對(duì)靜止的淋巴細(xì)胞未發(fā)現(xiàn)有任何明顯的抑制作用，有實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，玉竹提取物A沒有直接的細(xì)胞毒作用，也沒有反映出對(duì)細(xì)胞的毒副作用，這區(qū)別于現(xiàn)在臨床所應(yīng)用的免疫抑制劑，是以損傷免疫系統(tǒng)而實(shí)現(xiàn)免疫抑制作用的。玉竹提取物A對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞經(jīng)Con-A誘導(dǎo)的產(chǎn)生也有顯著的抑制作用，即使作用6h以后去除Con-A和玉竹提取物A，這種抑制作用仍不能解除，二者最低最有效的劑量都在10μg/mL。該結(jié)果提示玉竹提取物A對(duì)免疫功能抑制的機(jī)制之一就是抑制小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2的產(chǎn)生，且作用于早期階段，但不能解釋0.1μg/mL的玉竹提取物A對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化所產(chǎn)生的較強(qiáng)的抑制作用，因?yàn)榈蛣┝坑裰裉崛∥顰對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2產(chǎn)生幾乎沒有影響，提示尚有另外的抑制環(huán)節(jié)。其明確的抑制作用尚在探討之中。

表1 玉竹提取物A對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響

表2 玉竹提取物A對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞自然轉(zhuǎn)化的影響

表3 玉竹提取物A對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2產(chǎn)生的影響

表4 去除Con-A和玉竹提取物A對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞IL-2產(chǎn)生的影響

有關(guān)玉竹對(duì)免疫功能的影響有彼此相反的報(bào)道，為了驗(yàn)證有些地區(qū)玉竹對(duì)免疫功能的影響，我們所用的玉竹根莖系我室研究人員親自上山采集，排除了易混雜在玉竹根莖內(nèi)的七筒黃精，多花黃精和小黃精。通過上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明遼寧產(chǎn)生玉竹對(duì)小鼠免疫功能具有較強(qiáng)的抑制作用，其研究結(jié)果可信。

玉竹對(duì)糖尿病和結(jié)核治療有效的機(jī)制可能是抑制CD4淋巴細(xì)胞對(duì)胰腺β細(xì)胞的破壞作用和結(jié)核菌感染所帶來(lái)的免疫損傷。本文對(duì)遼寧所產(chǎn)生玉竹對(duì)免疫功能的作用和機(jī)制已有了初步的揭示，對(duì)開發(fā)中藥免疫抑制劑將具有意義。

[1]林厚文,韓公羽,謬時(shí)萱.中藥玉竹有效成分研究[J].藥理學(xué)報(bào),1997,29(3):215～222.

[2]廣西醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室主編.英漢免學(xué)辭典[M].南寧:廣西人民出版社,2005:382.

[3]潘興瑜,付京晶.MTT比色法改進(jìn)研究[J].中國(guó)免疫學(xué)雜志,1999,15(10):42.

[4]吳易元.人類T細(xì)胞生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生和測(cè)定[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2008,4(2):69.

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