魯米諾在現(xiàn)場(chǎng)潛血發(fā)現(xiàn)中的應(yīng)用研究

侯常永 劉海東 李 學(xué) 王金祥 邢立學(xué) 李國(guó)宏

魯米諾(luminol),又名發(fā)光氨。化學(xué)名稱(chēng)為3-氨基鄰苯二甲酰肼?；瘜W(xué)式為C8H7N3O2,溶液顯強(qiáng)酸性,對(duì)眼睛、皮膚、呼吸道有一定刺激作用。通常所說(shuō)的魯米諾試劑是魯米諾與過(guò)氧化氫(雙氧水的主要成分)的混合物,主要用于犯罪現(xiàn)場(chǎng)潛血的發(fā)現(xiàn)。血液中含有血紅蛋白,血紅蛋白含有鐵,而鐵能催化過(guò)氧化氫的分解,讓過(guò)氧化氫變成水和單氧,單氧再氧化魯米諾讓它發(fā)光。。作為催化劑,鐵、錳、鈷等金屬起到非常重要的作用,催化劑的含量越高,魯米諾發(fā)生氧化反應(yīng)就越強(qiáng)烈,其熒光就越明亮。因?yàn)檠菏且环N略呈堿性的混合液體,血液里的血紅素含有鐵,可以作為催化劑使魯米諾發(fā)生氧化反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)綠色的熒光。

一、實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)室模擬的犯罪現(xiàn)場(chǎng)血跡和有微量血痕的衣物。

二、主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器

(一)主要試劑

1.魯米諾(C8H7N3O2)0.1g﹑無(wú)水碳酸鈉(Na2CO3)5g﹑蒸餾水100m﹑30%雙氧水(H2O2)6ml;2.去離子水;3.Identifiler試劑盒包括10譩uffer(含Mg2)﹑TapDNA聚合酶﹑PrimerSet;4.蛋白酶K(5mg/mL);5.毛細(xì)管電泳上樣所需試劑:GS-500分子量?jī)?nèi)標(biāo)﹑95%去離子甲酰胺﹑POP-4液態(tài)膠。

(二)主要儀器

1.塑料噴壺;2.超凈工作臺(tái);3.9700型熱循環(huán)儀;4.ABI3130遺傳分析儀;5.渦漩震蕩器;6.Biofuge臺(tái)式離心機(jī)。

三﹑實(shí)驗(yàn)方法

(一)血液的發(fā)現(xiàn)

在命案等犯罪現(xiàn)場(chǎng)勘查中,可以用魯米諾配制成堿性溶液,盛裝于噴罐內(nèi),在黑暗的室內(nèi)噴灑在疑有血跡的位置或物品上。

第一,溶液的配置魯米諾溶液可以參考以下方案配制:魯米諾(C8H7N3O2)0.1g﹑無(wú)水碳酸鈉(Na2CO3)5g﹑蒸餾水100ml﹑30%雙氧水(H2O2)6ml,可以將溶液注入定制的噴罐密封。

第二,使用步驟。在使用魯米諾搜尋血跡時(shí),首先要確定勘查人員戴好口罩等防護(hù)措施,其次須將門(mén)窗緊閉,關(guān)閉所有光源,確認(rèn)房間處于完全的黑暗狀態(tài)。將噴罐內(nèi)的溶液噴灑于待顯現(xiàn)的客體上,與客體保持距離在30～45cm,噴出的液體形成細(xì)小均勻的噴霧。用相同的方式反復(fù)噴灑兩次,并確保噴灑出的試劑霧不要太濃,以防止它擴(kuò)散。

第三,將顯示熒光的部分標(biāo)出,然后再進(jìn)行提取,檢測(cè)。

(二)血液的提取、擴(kuò)增和檢測(cè)

將顯示熒光處剪碎或者用棉簽擦拭,置于500ul的管中,用200ul無(wú)菌去離子水浸泡,室溫放置并振蕩,13000r/min離心3min,棄上清。沉淀用5%的Chelex-10050ul充分懸浮,50℃溫浴30min,充分振蕩。13000r/min離心3min,上清用于PCR擴(kuò)增。

將提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),經(jīng)過(guò)變性、退火、延伸,將擴(kuò)增產(chǎn)物使用ABI3130遺傳分析儀電泳,并經(jīng)GeneMapperIDv3.2軟件分析。

四、結(jié)果分析和討論

魯米諾與血液發(fā)生熒光反應(yīng)非常敏感,主要用于現(xiàn)場(chǎng)潛血的發(fā)現(xiàn),即使若干年前被清洗過(guò)的血跡,都可以通過(guò)魯米諾顯現(xiàn)出來(lái)。更為重要的是魯米諾的使用對(duì)后續(xù)DNA的檢驗(yàn)沒(méi)有影響,完全是無(wú)損的。另外魯米諾溶液的配置方法簡(jiǎn)單,溶液穩(wěn)定,易于保存。最后魯米諾和它的溶液對(duì)人體的危害很小。

但是,魯米諾若產(chǎn)生熒光反應(yīng),只是說(shuō)明該位置存在有血跡的可能,并不能完全肯定引起發(fā)光反應(yīng)的物質(zhì)就是血跡。因?yàn)轸斆字Z在鈷、鎳等金屬的催化下也能發(fā)生熒光反應(yīng)。