二參湯對大鼠心肌缺血抗脂質過氧化損傷的保護作用

王亞平，周麗雅（.德惠市中醫(yī)院，吉林德惠；.長春中醫(yī)藥大學，吉林長春307）

二參湯對大鼠心肌缺血抗脂質過氧化損傷的保護作用

王亞平1，周麗雅2
（1.德惠市中醫(yī)院，吉林德惠；2.長春中醫(yī)藥大學，吉林長春130117）

目的利用垂體后葉素腹腔注射制造大鼠心肌缺血模型，觀察二參湯對大鼠心肌缺血的保護作用。方法將60只Wistar大鼠分為正常對照組、模型組、二參湯低、中、高劑量組、腸溶阿斯匹林組，觀察二參湯對各組大鼠心電圖、血清及心肌組織丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）活力的影響。結果二參湯可以對抗垂體后葉素腹腔注射造成大鼠心肌缺血損傷的心電圖ST段異常升高數減少，血清及心肌組織MDA、NO、NOS的含量明顯下降，SOD活力顯著升高。結論二參湯對大鼠心肌缺血有保護作用，其機制可能與抗脂質過氧化反映有關。

二參湯；心肌缺血；抗脂質過氧化；大鼠

本實驗通過中藥二參湯對大鼠心肌缺血抗脂質過氧化損傷的保護作用的研究，觀察二參湯對各組大鼠心電圖、血清及心肌組織丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）和一氧化氮合酶（NOS）活力的影響，以驗證二參湯對大鼠心肌缺血的保護作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與藥物Wistar大白鼠60只，體重250～300 g，8～10周齡，雄性，購自長春開發(fā)區(qū)實驗動物中心。二參湯（黃芪、黨參、丹參、川芎、降香、麥冬、五味子、木香、薤白、三七、水蛭、甘草），本院制劑。垂體后葉素、ATP酶測試盒、MDA、SOD、NO、NOS測試盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 實驗方法將大鼠隨機分為6組，每組10只：正常對照組，用10mL／kg蒸餾水灌胃；模型組，用10 mL／kg蒸餾水灌胃；二參湯低、中、高劑量組，用濃度分別為50，200，400 g／L的二參湯10mL／kg灌胃；腸溶阿斯匹林組，用濃度為3.33 g／L的腸溶阿斯匹林10mL／kg灌胃。連續(xù)灌胃14 d后，除正常對照組外，其余5組大鼠用垂體后葉素20 U／kg腹腔注射造成心肌缺血模型。各組在給與垂體后葉素前后均描記心電圖。24 h后全部大鼠用20%烏拉坦10 mL／kg腹腔注射麻醉，進行指標測定。

1.3 指標測定（1）麻醉后，將大鼠仰臥位固定，四肢皮下插入針狀電極及胸前電極，每只大鼠先做心電圖。各組動物均記錄正常Ⅱ導聯，測定用垂體后葉素ST段異常偏移總毫伏數（∑ST）、每組出現ST段異常的動物數及ST偏移的平均值，作為判斷心肌缺血程度和藥物療效的指標。（2）造模成功后，剖腹，自腹主動脈無菌取血，在4℃下3 000 r／min離心10 min，分離血清置于－70℃冰箱待測。（3）模型成功后，大鼠于腹主動脈取血后立即冰面上快速取心肌組織，平行于冠狀溝均勻地將心室部分橫斷成5份，取其2份放入2 mL預冷4℃的生理鹽水中，用玻璃勻漿器制備心肌組織勻漿鏡下觀察到細胞磨破，取10%勻漿上清加生理鹽水，按1∶9制成10%勻漿液，3 500 r／min離心15min，取上清液，－70℃凍存作相關檢測。（4）大鼠處死后，取其余心肌組織進行病理學檢查。

1.4 統計學分析所有數據經SPSS 11.0軟件包處理，數據以均數±標準差（±s）表示，所得數據作方差齊性試驗后作配對t檢驗。

2 實驗結果

2.1 二參湯對心肌缺血大鼠的心電圖ST段偏移的影響見表1。

表1 二參湯對心肌缺血大鼠Ⅱ導聯ST偏移的影響（ˉx ±s，n＝10）

2.2 二參湯對心肌缺血大鼠血清SOD、MDA、NO、NOS的影響見表2。

2.3 二參湯對心肌缺血大鼠心肌組織SOD、MDA、NO、NOS的影響見表3。

表2 二參湯對心肌缺血大鼠血清的影響（ˉx±s，n＝10）

表3 二參湯對心肌缺血大鼠心肌組織的影響（ˉx±s，n＝10）

3 討論

垂體后葉素誘發(fā)的心肌缺血動物模型廣泛應用于篩選抗心肌缺血藥物的研究。垂體后葉素能收縮冠狀動脈，引起心肌缺血，同時能收縮全身小血管，使心肌耗氧增加，心電圖表現為ST－T改變和心律失常等。同時心肌缺血導致細胞損傷時，心肌可釋放或反射性引起腎上腺素釋放大量兒茶酚胺，其釋放與梗死嚴重性及過程相關，進一步加重心肌缺血損傷。

MDA是氧自由基引發(fā)的生物膜不飽和脂肪酸過氧化反應的代謝產物，對組織有損傷作用［1］。而MDA為脂質過氧化物的代謝產物，其含量在一定程度上反映組織細胞損傷的程度。超氧化物歧化酶（SOD）作為一種抗氧化酶，有助于清除氧自由基，阻斷脂質過氧化連鎖反應，但在清除自由基的過程中SOD活性卻顯著下降。因此，通過自由基的生成和清除兩方面的檢測，可以推斷出缺血的損害程度。一氧化氮（NO）作為一種重要的神經介質、分子信使和細胞功能調節(jié)因子，廣泛參與了體內血管功能調節(jié)、神經傳遞、炎癥免疫反應等機體眾多生理活動和病理過程［2］。NOS作為NO合成的限速酶，是調節(jié)NO含量的最重要環(huán)節(jié)。NO過多可直接影響鐵蛋白的功能、能量代謝，并對基因產生毒性作用，抑制DNA和蛋白質的合成，從而表現出強烈的細胞毒性作用，與缺血損傷的發(fā)生、發(fā)展密切相關。

從本實驗看，二參湯低、中、高劑量組均可顯著升高心肌缺血大鼠血中SOD含量，降低MDA含量，表明二參湯可通過提高機體抗氧化能力，抑制脂質過氧化產物形成，達到保護心臟缺血再灌注損傷的作用。二參湯組大鼠血清及心肌組織NO、NOS含量均明顯低于正常對照組。證明本藥可有效的阻止大鼠心肌缺血后血清及心肌組織NO、NOS含量的升高，該方可能通過其抗氧自由基作用，改善線粒體功能而改善心肌組織的能量代謝，使蛋白激酶活性升高，從而使NOS磷酸化，活性降低，使NO的合成減少，起到保護心肌組織的作用。

［1］Schmidley JW.Free radical incentral nervous system，Ischemia Stroke.1990，21（7）：10-86.

［2］AlessandriB，Bullock R.Glutamate and its receptors in the path ophusiology of brain and spinal cord injuries，Progr Brain Res.1998，116：303.

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