微小染色體維持蛋白5(MCM 5)在大腸癌中的表達(dá)及意義

胡 嘯，陳 東

（長(zhǎng)沙市第一醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙 410005）

大腸癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，肺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多因素共同參與的多階段復(fù)雜生物學(xué)過(guò)程，與細(xì)胞增殖和凋亡之間的動(dòng)態(tài)失衡相關(guān)。細(xì)胞周期中任何一個(gè)調(diào)控環(huán)節(jié)的失控都可導(dǎo)致細(xì)胞增殖的異常，細(xì)胞的惡性增殖失調(diào)導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。微小染色體維持蛋白(minichro-mosome maintenance proteins，MCM)參與了DNA復(fù)制起始的調(diào)控。MCM5是MCM家族成員之一，近年國(guó)外已有研究表明其可作為不典型增生和腫瘤的生物學(xué)標(biāo)記物[1]。本研究采用SP方法檢測(cè)MCM5蛋白在大腸癌組織中的表達(dá)，并分析其與臨床病理特征的關(guān)系，為大腸癌的治療策略選擇及預(yù)后評(píng)估提供初步資料。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本

全部60例大腸癌組織標(biāo)本均取自2003年1月～2006年6月長(zhǎng)沙市第一醫(yī)院外科手術(shù)切除的大腸癌組織，所有大腸癌標(biāo)本均經(jīng)過(guò)臨床和病理確診，取材前未經(jīng)過(guò)放化療治療。另同期收集臨床擬診腸易激綜合征，在內(nèi)窺鏡下取自患者大腸粘膜活檢組織標(biāo)本31例，31例均經(jīng)組織病理學(xué)確認(rèn)為正常組織或輕度炎癥。

1.2 試劑

MCM5小鼠抗人單克隆抗體及S-P組化試劑盒購(gòu)自于福州邁新生物技術(shù)公司。

1.3 方法

用S-P免疫組化染色，將石蠟切片脫蠟，梯度酒精脫水至水化。高溫高壓組織抗原修復(fù)DAB顯色，蘇木素復(fù)染，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封固。

1.4 結(jié)果判定

以PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性的組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。MCM5表達(dá)為胞核棕黃色染色。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)大于10%為陽(yáng)性病例，小于10%為陰性病例。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用χ2檢驗(yàn)，F(xiàn)isher確切概率法，數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 13.0軟件處理。

2 結(jié)果

2.1 MCM 5在組織中的表達(dá)情況

MCM5陽(yáng)性為胞核的棕黃性染色，大腸癌細(xì)胞中可以見(jiàn)到明顯的陽(yáng)性表達(dá)，占63.3%(38/60)，正常大腸組織僅發(fā)現(xiàn)1例MCM5表達(dá)，差異具有顯著性(P＜0.05)，結(jié)果見(jiàn)表 1。

表1 不同組織中MCM 5的表達(dá)情況

2.2 Dukes分期與MCM 5的關(guān)系

Dukes各期大腸癌的MCM5陽(yáng)性表達(dá)差異具有顯著性 (P＜0.05)，其中D期癌組織表達(dá)高達(dá)75.0%(11/16)，結(jié)果見(jiàn)表 2。

表2 Dukes分期與MCM 5的關(guān)系

2.3 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與MCM 5的關(guān)系

由表3可見(jiàn)，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌組織中有75.0%(21/28)顯示了MCM5陽(yáng)性，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的大腸癌組織中有53.1%(17/32)陽(yáng)性，差異具有顯著性(P＜0.05)。

表3 淋巴轉(zhuǎn)移與MCM 5的關(guān)系

2.4 組織學(xué)分型與MCM5的關(guān)系

低度惡性的大腸癌組織中有55.5%(25/45)顯示了MCM5陽(yáng)性，而高度惡性的癌組織中有86.7%(13/15)陽(yáng)性，差異具有顯著性(P＜0.05）(表 4)。

表4 組織學(xué)分型與MCM 5的關(guān)系

3 討論

細(xì)胞周期調(diào)控異常是腫瘤發(fā)生的內(nèi)在原因，在細(xì)胞周期中，G1/S的調(diào)控點(diǎn)是細(xì)胞內(nèi)外信號(hào)經(jīng)過(guò)傳遞、整合到細(xì)胞核，對(duì)細(xì)胞的增殖進(jìn)行調(diào)控的關(guān)鍵點(diǎn)，它的異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[2]。細(xì)胞增殖調(diào)控異常與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切,而腫瘤細(xì)胞增殖活性與腫瘤生物學(xué)行為更是密切相關(guān)，是用于反映腫瘤良惡性及惡性程度的重要指征。MCM蛋白與細(xì)胞周期密切相關(guān),是啟動(dòng)真核細(xì)胞DNA復(fù)制、調(diào)控細(xì)胞由G1期進(jìn)入S期的關(guān)鍵蛋白，其本質(zhì)是一種核蛋白復(fù)合物，目前發(fā)現(xiàn)MCM2～7等6種,它們是一組在序列上高度同源、功能上密切相關(guān)的蛋白，在靜止/分化細(xì)胞中MCM蛋白不表達(dá)，而在增殖/腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種較好地反映細(xì)胞增殖活性的新指標(biāo)。大量研究表明[3,4]，MCM蛋白能夠敏感而特異地反映細(xì)胞增殖的狀況，是較Ki-67更為可靠的細(xì)胞增殖指標(biāo),在判斷腫瘤的惡性度及評(píng)估預(yù)后方面有著較重要的意義。MCM5是MCM蛋白復(fù)合物之一，是一種與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的因子，它的檢測(cè)可直接反映MCM蛋白的表達(dá)水平[5]。Sirieix等[6]檢測(cè)食管標(biāo)本發(fā)現(xiàn)MCM5在食管癌中呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，而在大多數(shù)正常食管黏膜中為陰性，提示了MCM5能較好地反映腫瘤細(xì)胞的增殖特性，對(duì)腫瘤的診斷有一定意義。

本研究結(jié)果顯示，MCM5與大腸癌的Dukes分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織分型相關(guān)，且存在線性趨勢(shì)，即大腸癌組織中的MCM5表達(dá)水平隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度的惡化、Dukes分期增加也增加。提示檢測(cè)大腸癌組織MCM5可能是區(qū)分不同病理分級(jí)、分期的有價(jià)值的分子標(biāo)志物，對(duì)治療選擇及預(yù)后評(píng)估有參考意義。但有待于后繼更大樣本驗(yàn)證之。

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