EB病毒抗體檢測(cè)在兒童傳染性單核細(xì)胞增多癥診斷中的應(yīng)用

袁利群，葉劍榮

（湖南師范大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖南長沙410002）

1968年首次發(fā)現(xiàn)EB病毒是引起傳染性單核細(xì)胞增多癥(IM)的病原,后經(jīng)血清流行病學(xué)等研究得到證實(shí),EB病毒是一種嗜B淋巴細(xì)胞的人皰疹病毒,病毒顆粒核心為雙鏈線狀DNA,長約173KB,有多個(gè)DNA重復(fù)序列,衣殼由162個(gè)殼粒排列成二十面休構(gòu)成，直徑約100～110 nm,有包膜,在衣殼與包膜之間有被膜。人群中流行的EB病毒可分為兩個(gè)亞型，兩亞型間的區(qū)別在于個(gè)別基因的不同,存在亞型特異性基因，因此導(dǎo)致了兩個(gè)不同亞型病毒在遺傳特性上有差異[1]。目前尚不能用常規(guī)方法培養(yǎng)，一般用人臍血淋巴細(xì)胞或是用含EBV基因組的類cycler原淋巴細(xì)胞培養(yǎng)EBV[2]。

傳染性單核細(xì)胞增多癥是一種急性的全身淋巴細(xì)胞增生性疾病,亦是急性單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)增生性疾病。潛伏期約為40天,發(fā)病后典型的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咽炎、頸淋巴腺炎、脾腫大、肝功能紊亂和以異形淋巴細(xì)胞為特征的單核細(xì)胞明顯增多，合并癥有肝損害、支氣管肺炎、腦炎、血小板減少性紫癜等，最常見的并發(fā)癥為消化系統(tǒng)并發(fā)癥，表現(xiàn)為肝功能的改變。總膽紅素、間接膽紅素、直接膽紅素、總蛋白和白蛋白無明顯變化。主要表現(xiàn)為酶學(xué)改變，其中以ALT、AST、LDH升高最常見。肝酶升高的程度以輕中度為主，且具有恢復(fù)快、預(yù)后良好的特點(diǎn)；呼吸系統(tǒng)的癥狀表現(xiàn)為支氣管炎和支氣管肺炎，尤其部分無咳嗽或咳嗽已明顯改善的患兒，胸片仍可顯示炎癥滲出。因此，對(duì)發(fā)熱時(shí)間長、抗生素治療無效的支氣管肺炎，應(yīng)警惕EBV感染的可能。傳染性單核細(xì)胞增多證感染偶可并發(fā)眼瞼水腫，但一般認(rèn)為IM眼瞼水腫系頸部腫大淋巴結(jié)壓迫，使靜脈淋巴回流障礙所致，而非真正的腎臟損害[3]。

IM患兒繼發(fā)淋巴細(xì)胞白血病和惡性組織增生癥明顯增加，應(yīng)對(duì)其長期追蹤病情變化[4]。EB病毒感染伴有嚴(yán)重免疫缺陷的兒童、AIDS患者、器官移植接受者病死率較高,多死于重要器官的損傷[5]。

臨床實(shí)驗(yàn)診斷IM的方法較多。如嗜異性凝集試驗(yàn),本試驗(yàn)用于檢測(cè)受檢者血清中綿羊紅細(xì)胞凝集滴定度,正常人為1:100,本病診斷標(biāo)準(zhǔn)為≥1:224，但兒童IM患者陽性率較低,且其陽性結(jié)果不僅見于IM,淋巴瘤、單核細(xì)胞性白血病等也可呈陽性反應(yīng),目前PCR檢測(cè)EBV-DNA有較高的特異性[6]，但需要特殊設(shè)備、費(fèi)用昂貴,不易于基層醫(yī)院推廣。目前雖有直接找EB病毒包涵體的方法，它的結(jié)果可靠性、特異性強(qiáng)，但因受主觀判斷的影響及時(shí)間限制，對(duì)急性期IM診斷沿待完善，因此目前代之以快速簡便的抗體測(cè)定方法。感染EB病毒后,B細(xì)胞激活并轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞產(chǎn)生各種病毒抗體,主要包括VCA-IgM、抗早期抗原抗體、抗核心抗原抗體。研究發(fā)現(xiàn)EB病毒特異性抗體是診斷IM的可靠依據(jù),對(duì)血清嗜異凝集反應(yīng)陰性者意義更大。其中抗衣殼抗原IgM抗體出現(xiàn)在本病的急性期,文獻(xiàn)報(bào)告[7],IM急性期時(shí)就出現(xiàn)較高的EBV-VCA-IgM抗體,如測(cè)定時(shí)間得當(dāng),所有IM都有VCA-IgM,此時(shí)檢測(cè)結(jié)果表明IM組陽性率高,是臨床診斷IM敏感而又特異的指標(biāo)。

本文采用ELISA方法檢測(cè)50例IM患兒血清標(biāo)本及同期50例健康兒童血清標(biāo)本中的VCAIgM、VCA-IgA、VCA-IgG抗體,并將所得結(jié)果進(jìn)行回顧性分析及比較,得出結(jié)論。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源

2008年4月~009年6月在湖南省人民醫(yī)院臨床診斷為IM患兒的血清標(biāo)本50例(男：25例；女：25例),年齡:2個(gè)月~13歲;同期收集本院體檢同齡階段健康兒童血清標(biāo)本約50例 (男：35例；女：15例)為觀察對(duì)照組。

1.2 試劑

各抗體檢測(cè)采用深圳市賽爾生物技術(shù)有限公司提供的EB病毒VCA抗體診斷試劑盒。

1.3 方法

1.3.1 測(cè)定方法 嚴(yán)格按操作說明書進(jìn)行。結(jié)果判斷：①P/N=標(biāo)本OD值/陰性對(duì)照OD值，P/N≥2.1為陽性，②1.5≤P/N＜2.1為可疑標(biāo)本;P/N＜1.5為陰性，③陰性對(duì)照(NC)小于0.10時(shí)以0.10計(jì),大于0.1小于0.21時(shí)以實(shí)際OD值計(jì)算;若大于0.21時(shí),實(shí)驗(yàn)可能出現(xiàn)了較大誤差,需重復(fù)實(shí)驗(yàn)。④陽性對(duì)照(PC)值通?！?.4,實(shí)驗(yàn)成立,否則重做。

1.3.2 檢測(cè)評(píng)價(jià)指標(biāo)計(jì)算

表1 計(jì)算模版表

敏感度:a/(a+b),真陽性率,即真正有病的人且按此此方法被正確診斷為有病的概率。

特異度:d/(d+C),真陰性率,即真正無病的人且按此方法被正確判斷為無病的概率。

陽性預(yù)測(cè)值:a/(a+c)即檢測(cè)出陽性人數(shù)中真正有病的人所占比例。

陰性預(yù)測(cè)值:d/(d+b)即檢測(cè)出陰性人數(shù)中真正無病的人所占比例。

1.3.3 傳染性單核細(xì)胞增多癥診斷標(biāo)準(zhǔn)

⑴臨床可有發(fā)熱,咽峽炎,淋巴結(jié)腫大,肝脾腫大等臨床表現(xiàn)；

⑵血象:白細(xì)胞總數(shù)變化不定,淋巴細(xì)胞比例增高,異形淋巴細(xì)胞超過10%；

⑶嗜異性凝集試驗(yàn):陽性(P-B試驗(yàn)≥1:224)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

VCA-IgM、VCA-IgA、VCA-IgG 抗體檢測(cè)結(jié)果的比較采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 EBV-VCA-IgM抗體檢測(cè)結(jié)果

比較IM組與對(duì)照組中EBV-VCA-IgM陽性檢出率:50例IM患兒中46例患者的VCA-IgM陽性(92%),50例對(duì)照組中2例陽性 (4%)。結(jié)果表明:VCA-IgM在IM患兒標(biāo)本中的檢出率明顯高于在對(duì)照組標(biāo)本中的檢出率(P＜0.05結(jié)果表2)。

表3.1 EBV-VCA-IgM抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 EBV-VCA-IgA抗體檢測(cè)結(jié)果

比較IM組與對(duì)照組中EBV-VCA-IgA陽性檢出率:50例IM患兒中3例患者的VCA-IgA陽性(6%),50例對(duì)照組中1例陽性(2%)。結(jié)果表明:VCA-IgA在IM患者標(biāo)本中的檢出率與在對(duì)照組標(biāo)本中的檢出率區(qū)別并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),結(jié)果見表3。

表3 EBV-VCA-IgA抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 EBV-VCA-IgG抗體檢測(cè)結(jié)果

比較IM組與對(duì)照組中EBV-VCA-IgG 陽性檢出率:50例IM患兒中29例患者的VCA-IgG陽性(58%),50例對(duì)照組中11例陽性 (22%)。結(jié)果表明:VCA-IgG在IM組患者標(biāo)本中的檢出率明顯高于在對(duì)照組標(biāo)本中的檢出率，(P＜0.05)結(jié)果見表4。

表4 EBV-VCA-IgG抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

EBV是一種普遍存在、主要侵犯人類B淋巴細(xì)胞的皰疹病毒群,是IM的病原,且與淋巴細(xì)胞增殖性疾病如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌密切相關(guān)[8]。在兒童,EBV感染除典型的IM癥狀外,尚有部分表現(xiàn)為無癥狀或不典型重癥,如侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)和肝臟病變等,現(xiàn)已引起人們的廣泛關(guān)注。另外,其它病毒如巨細(xì)胞病毒、肝炎病毒、HIV病毒等也可導(dǎo)致類似于IM的臨床表現(xiàn)，故IM需有病原學(xué)診斷方可確定。

既往診斷IM主要依靠嗜異性凝集試驗(yàn),但在成人中有10%～20%患者呈假陰性,在兒童中則更高[9]，需要有更特異及靈敏的檢測(cè)方法。

近年研究發(fā)現(xiàn),病毒特異性抗體是診斷IM的可靠依據(jù)。EB病毒感染B淋巴細(xì)胞后出現(xiàn)多種抗原,并可使機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。通常測(cè)定的EB病毒抗體主要是VCA-IgM、IgG、IgA抗體,人群中EB病毒感染主要以VCA-IgG最為一致。IM急性期時(shí)較早期就出較高滴度的抗EB-IgM,健康人及小兒中抗EB-IgM的陽性率很低,由于IgM反應(yīng)時(shí)間不長,故取血時(shí)間可影響陽性結(jié)果。抗EB-IgM的存在表示初次感染。

本研究在觀察了50例患兒標(biāo)本中,檢出VCAIgM陽性者46例(92%);對(duì)照組中檢出陽性者2例(4%),結(jié)果表明VCA-IgM在IM患者標(biāo)本中的檢出率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。VCA-IgM抗體陽性與傳染性單核細(xì)胞增多證之間有良好的相關(guān)性。它一般出現(xiàn)在IM的急性期2周內(nèi),但患者檢測(cè)一般在病程的4～10天內(nèi)進(jìn)行,如果在發(fā)病期的第4～5天內(nèi)采血,可能出現(xiàn)假陰性,故應(yīng)根據(jù)病程適時(shí)復(fù)檢。臨床癥狀似IM的病例中雖有90%以上是EB病毒感染所致，但另有5%～10%可能由CMV、腺病毒、HIV等其它病毒感染引起。

對(duì)照組中出現(xiàn)VCA-IgM陽性2例（4%）,可能為EBV感染者但不一定引起咽峽炎,淋巴結(jié)及肝脾腫大等典型臨床表現(xiàn)。

本結(jié)果顯示，在50例IM患者標(biāo)本中,檢出VCA-IgA陽性者3例(6%),50例對(duì)照組中給出陽性者1例(2%)。結(jié)果表明VCA-IgA抗體陽性與傳染性單核細(xì)胞增多證之間并無統(tǒng)計(jì)學(xué)相關(guān)性 (P＞0.05)。有資料顯示,VCA-IgA只在一部分當(dāng)前原發(fā)感染患者中出現(xiàn),在近期原發(fā)感染、既往感染中均不出現(xiàn),故對(duì)傳染性單核細(xì)胞增多證診斷價(jià)值意義并不高。但大量文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo),VCA-IgA滴度≥1:20或滴度持續(xù)升高者,對(duì)鼻咽癌有重要輔助診斷意義,應(yīng)于密切關(guān)注。

結(jié)果顯示，50例IM患者標(biāo)本,檢出VCA-IgG陽性者29例,50例對(duì)照組中陽性者11例，經(jīng)統(tǒng)計(jì)其敏感度 (58.0%),特異度 (78.0%),陽性預(yù)測(cè)值(72.5%),陰性預(yù)測(cè)值(65.0%),二者雖在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異，但其陰性預(yù)測(cè)值有待商榷。故EBVVCA-IgG抗體在由EBV感染引起的傳染性單核細(xì)胞增多癥診斷中價(jià)值不大。它的出現(xiàn)可為當(dāng)前原發(fā)感染,近期原發(fā)感染,既往感染或復(fù)發(fā)等,其雖不能作為近期感染指標(biāo),但可用于流行病學(xué)調(diào)查研究等[10]。

EBV-VCA-IgM出現(xiàn)早,陽性率高,敏感度(92.0%),特異度(96.0%),陽性預(yù)測(cè)值(95.8%),陰性預(yù)測(cè)值(92.3%)均較佳,恢復(fù)期消失,其存在示EBV初次感染,是IM急性期的重要指標(biāo),有助于臨床診斷及指導(dǎo)臨床治療,由于方法快速,簡便易行,在基層醫(yī)院可以推廣應(yīng)用。EBV-VCA-IgA滴度升高在鼻咽癌中有重要診斷意義，對(duì)傳染性單核細(xì)胞增多癥診斷意義不大。EBV-VCA-IgG在特異度、陽性預(yù)測(cè)值都有較滿意結(jié)果。但陰性預(yù)測(cè)值較低，易造成假陽性。

[1]周正任，主編.醫(yī)學(xué)微生物學(xué)[M].第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2005,317-320.

[2]張卓然,主編.臨床微生物學(xué)和微生物學(xué)檢驗(yàn)[M].第6版,北京:人民衛(wèi)生出版社,2006.442-445.

[3]朱易萍,高舉,杜惠容,等.196例傳染性單核細(xì)胞增多癥的并發(fā)癥和實(shí)驗(yàn)室檢查[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2003,18(11):902.

[4]張雅歐,羅春華,馬廉.傳染性單核細(xì)胞增多癥與白血病、惡性組織增生癥及機(jī)體免疫狀況的關(guān)系[J].實(shí)用兒科臨床雜志,1995,10(5):265.

[5]趙林清,錢淵.EB病毒感染及其相關(guān)性疾病[J].中華兒科雜志,2003,41(10):797-799.

[6]Stevens S J,Verluijlen S A,Brule A J,et al.Comparison of quancitatice competive PCR with Lightcycler-based PCR for measuring Epstein-Barr virus DNA load in clinical specimens[J].J Clin Microbiol,2002,40(11):3986-3992.

[7]Behrman RE.Tecxbook of pediatries,12.72 Infections mononucleosis[M].14 edition.WB saunders company.1992.805-808.

[8]郭迪,劉湘云,齊家儀.兒科基礎(chǔ)與臨床[M].上海:上?？萍汲霭嫔?1988,1042.

[9]Momso PG,Pou FJ,Infectious Mononucleasis in childhood[J].An Esp Pediarr,1992,36(3):219.

[10]Lang D,Vomhangen R,Rothe M,et al.cross-reactivity of Epstein-Barr virus-specific immumog;obulin antibodies with cytomeg alovirus antigens containing glycine homoplymers[J].Clin Diagh Labimmunol,2001,8(4):747-756.