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      青藤堿對實(shí)驗(yàn)性多柔比星腎病大鼠尿蛋白、IL-6影響的研究

      2010-06-22 06:30:54王麗敏王麗娜趙志新鄒艷紅
      黑龍江醫(yī)藥科學(xué) 2010年4期
      關(guān)鍵詞:比星青藤系膜

      王麗敏,王麗娜,趙志新,鄒艷紅,聶 磊

      (佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院兒科,黑龍江 佳木斯 154007)

      微小病變型腎病綜合征(MCNS)是腎病綜合征常見的病理組織類型,但其病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全明了。白細(xì)胞介素6(IL-6)是參與免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)的重要細(xì)胞因子之一[1]?,F(xiàn)已證實(shí) ,腎臟系膜細(xì)胞、上皮細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞都可分泌 IL-6,IL-6能通過旁分泌或自分泌形式與腎小球系膜細(xì)胞上的 IL-6受體結(jié)合,能促進(jìn)腎臟系膜細(xì)胞增多和基質(zhì)增生,使腎小球?yàn)V過膜增厚,最終導(dǎo)致腎小球硬化[2]。青藤堿(SIN)作為一種免疫抑制劑主要用于治療風(fēng)濕性疾病,本研究通過制備大鼠多柔比星腎病模型,模擬人類 MCNS檢測 IL-6在 MCN S大鼠中的異常表達(dá)和分布及青藤堿對其影響,探討 IL-6在 MCNS特別是蛋白尿發(fā)生中的可能作用。

      1 材料與方法

      1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

      雄性 Wistar大鼠50只,由佳木斯大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,體重 100~ 130g。隨 機(jī) 分為正常 組 (n= 10)、腎病組(n=40)。參照王崢等[3]方法給予腎病組一次性尾靜脈注射多柔比星5mg/kg,正常組一次性尾靜脈注射0.9%生理鹽水5mg/kg。收集所有大鼠24h尿液,進(jìn)行24h尿蛋白定量檢測,尿蛋白>30mg/24h為模型成功。將模型成功的腎病大鼠隨機(jī)分成2組:腎病對照組、治療組。治療組給予青藤堿36mg/kg˙d灌胃。腎病對照組及正常組給予等量生理鹽水灌胃。于注射多柔比星后7、14、28、42d分別留取大鼠尿液進(jìn)行24h尿蛋白檢測,收集一部分尿液離心取上清液凍存以備做 IL-6的檢測,第42天處死所有大鼠。留取左腎,進(jìn)行組織學(xué)病理觀察。

      1.2 方法

      1.2.124 h尿蛋白測定

      分別于第6,13,27,41天將大鼠置于代謝籠收集24h尿液,采用考馬斯亮藍(lán)法檢測其24h尿蛋白定量。

      表1 各組大鼠不同時(shí)期尿蛋白定量比較(±s,mg/24h)

      表1 各組大鼠不同時(shí)期尿蛋白定量比較(±s,mg/24h)

      *與正常組比較 P<0.01;△與腎病對照組比較 P<0.01。

      1.2.2 腎組織及尿液中 IL-6檢測

      IL-6檢測采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)。試劑盒購于武漢博士德生物公司,嚴(yán)格按說明書操作,冷凍尿液及腎組織勻漿標(biāo)本均于常溫下再次以2000r/min離心10min后使用,選取 7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔,另加空白對照和質(zhì)控,在 450nm波長用空白對照管校零讀取吸光值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算尿及腎組織中 IL-6的濃度,結(jié)果以 pg/mL˙cr表示。

      1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

      2 結(jié)果

      2.1 各組大鼠24h尿蛋白定量

      腎病組大鼠尿蛋白排泄量逐漸增加,較正常組及治療組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01),見表1。

      2.2 各組大鼠不同時(shí)期尿液中 IL-6含量

      腎病組大鼠尿 IL-6的表達(dá)與正常組及治療組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.01),見表2。

      2.3 腎組織中 IL-6含量

      腎病組與正常組及治療組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.01),見表3。

      表3 各組大鼠42d腎組織中 IL-6表達(dá)(±s,pg/mL˙cr)

      表3 各組大鼠42d腎組織中 IL-6表達(dá)(±s,pg/mL˙cr)

      *與正常組比較 P<0.01;△與腎病對照組比較 P<0.01。

      表2 各組大鼠不同時(shí)期尿 IL-6含量(± s,pg/mL˙cr)

      表2 各組大鼠不同時(shí)期尿 IL-6含量(± s,pg/mL˙cr)

      *與正常組比較 P<0.01;△與腎病對照組比較 P<0.01。

      2.4 相關(guān)分析

      腎病組尿蛋白排泄量與尿中 IL-6的表達(dá)呈正相關(guān)(r= 0.795,P <0.01)。尿蛋白排泄量與腎組織中 IL-6的表達(dá)呈正相關(guān) (r= 0.761,P<0.01)。腎組織及尿中 IL-6的表達(dá)呈正相關(guān) (r= 0.813,P<0.01)。

      3 討論

      IL-6是具有多種生物學(xué)活性的刺激因子,其作為機(jī)體復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的重要成員,在一些疾病的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示腎病組在注射多柔比星7d后尿液中 IL-6的表達(dá)逐漸升高 ,42d達(dá)高峰 ,24h蛋白尿量在各時(shí)期表達(dá)與正常組相比均有顯著性差異 (P<0.01),尿液中及腎組織中 IL-6的濃度與24h蛋白尿量均呈正相關(guān)(P <0.01),且尿液中 IL-6的表達(dá)與腎組織中 IL-6的表達(dá)也呈正相關(guān) (P <0.01)。治療組尿液、腎組織中 IL-6及尿蛋白也不同程度的增加,但較腎病組為低。已有研究證實(shí),腎臟系膜細(xì)胞、腎小球上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞等均可產(chǎn)生IL-6,且 IL-6在腎臟局部又能刺激系膜細(xì)胞增殖并分泌其他細(xì)胞因子和膠原等并進(jìn)而影響疾病進(jìn)展[4]。在病理情況下,這些細(xì)胞 IL-6產(chǎn)生增多 ,參與腎臟病理生理過程,并從尿中排出。這也解釋了在尿 IL-6增高的 MCNS患者中,大量蛋白尿的發(fā)生率較高,腎臟病理改變程度較重的原因。這與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果相一致。本實(shí)驗(yàn)較好模擬了人類 MCNS,并發(fā)現(xiàn) IL-6表達(dá)的變化規(guī)律及其與蛋白尿的關(guān)系,為進(jìn)一步研究 IL-6在人類腎臟疾病中的作用提供了理論依據(jù)。綜上所述,我們認(rèn)為腎臟局部 IL-6的變化與腎小球及小管-間質(zhì)病變的發(fā)生及發(fā)展有密切的聯(lián)系。而青藤堿能有效抑制腎組織及尿液中 IL-6的表達(dá) ,減輕 MCNS大鼠尿蛋白、保護(hù)腎功能,促進(jìn)腎臟病理損害的修復(fù)。

      [1] 田彬,范伏元.健脾益腎顆粒劑對脾腎陽虛型慢性腎炎患者尿 IL-6水平的影響 [J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,28(4):50-52

      [2] Mora C,Navarro JF.Inflammation and diabetic nephropathy[J].Curr Diab Rep,2006,6(6):463-468

      [3] 王崢,王增貴,劉震,等.多柔比星誘發(fā)大鼠腎病模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1990,21(4):430-432

      [4] 楊森,陳雙峰,劉偉,等.T細(xì)胞亞群、IL-6在 IgA腎病患者扁桃體摘除術(shù)后的應(yīng)用價(jià)值 [J].醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床,2007,18(2):53-54

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