HPLC法測(cè)定乙肝解毒膠囊中黃芩苷的含量

宮淑枝 貢慶欣

1 吉林省通化市人民醫(yī)院（134000）

2 吉林省通化市食品藥品檢驗(yàn)所（134000）

乙肝解毒膠囊[1]是由黃柏、拳參、黃芩、大黃、胡黃連、土茯苓、綿馬貫眾、黑礬等8味中藥組成的復(fù)方制劑，用于乙型肝炎，辨證屬于肝膽濕熱內(nèi)蘊(yùn)等癥[1]。該品種為中復(fù)方制劑，已在衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第一冊(cè)收載，但原標(biāo)準(zhǔn)中無定量指標(biāo)。本文采用HPLC法對(duì)該品種黃芩中的黃芩苷進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果操作簡便、方法準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

日本島津LC-2010AHT型高效液相色譜儀；日本島津UV-1700型紫外分光光度計(jì)。黃芩苷對(duì)照品（由中國藥品生物制品檢驗(yàn)所提供）批號(hào)：110715-200514，規(guī)格：供含量測(cè)定用；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：大連依利特C18（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-0.5%磷酸溶液（47∶53）為流動(dòng)相[2]；檢測(cè)波長為280nm；流速：0.8mL/min；柱溫：室溫。理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量，加稀乙醇制成每1mL含55μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，稱定重量，加熱回流3h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 陰性對(duì)照試驗(yàn)

為進(jìn)一步考察試驗(yàn)的合理性，取不含黃芩的陰性對(duì)照樣品。依正文所述方法進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果，陰性樣品色譜在與黃芩苷峰相應(yīng)的保留時(shí)間附近無干擾峰檢出，從而證明本方法是合理可行的。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量，加稀乙醇溶解并稀釋，制得濃度為54.0μg/mL的對(duì)照品溶液，分別精密吸取2、6、10、14、18μL測(cè)定（平行兩次），以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果黃芩苷在0.1080～0.9720μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系，回歸方程：Y=4054030.556 x＋8000.700 (r=1.0000) 。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，黃芩苷峰面積的平均值為2226028，其RSD=0.45%。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取同一供試品溶液10μL，于0、2、4、8、12h注入液相色譜儀，黃芩苷峰面積的平均值為2227671，其RSD=0.39%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一供試品（040603）6份，按2.2.2的方法制備成供試品溶液，分別測(cè)定，結(jié)果黃芩苷的平均含量為0.59mg/粒，其RSD=0.46%。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品（長春晨光，批號(hào)：040603，含量為0.59mg/粒）6份，分別精密加入對(duì)照品1.431mg，依法測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2.2.2方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定含量，結(jié)果見表2。

3 討 論

3.1 測(cè)定波長的選擇

表2 樣品中黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果（n=4）

取黃芩苷對(duì)照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-260紫外分光光度計(jì)200～400nm范圍內(nèi)測(cè)定黃芩苷在278.5nm波長處，有最大吸收，參照《中國藥典》2005年版一部“黃芩”含量測(cè)定項(xiàng)下測(cè)定黃芩苷所采用的波長，故選擇280nm為本實(shí)驗(yàn)的測(cè)試波長。

3.2 提取方法的考察

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取兩份，每份約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50mL，稱定重量，一份超聲處理30min，另一份加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，按正文測(cè)定法測(cè)定，結(jié)果見表3。

表3 提取方法考察表

根據(jù)上表中黃芩苷含量的檢測(cè)結(jié)果，確定樣品的提取方法為加熱回流。

3.3 提取時(shí)間的考察

取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取4份，每份約1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，稱定重量，分別加熱回流1、2、3、4h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，按正文的方法測(cè)定，結(jié)果見表5。

表4 提取時(shí)間考察表

根據(jù)上表中黃芩苷含量的檢測(cè)結(jié)果，確定樣品的提取時(shí)間為3h。

[1]衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn).中藥成方制劑[S].第一冊(cè),1989.

[2]國家藥典委員會(huì).中國藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:211-212.