泰興市雞大腸桿菌菌株的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

肖云萍 （江蘇省泰興市河失獸醫(yī)站 225461） 顧元兵 （江蘇省泰興市農(nóng)業(yè)局）

雞大腸桿菌是由雞致病性大腸桿菌引起的一種嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的傳染病，除引起雞死亡造成的直接損失外，還能導(dǎo)致飼料利用率、生產(chǎn)能力及幼雛成活率明顯下降。雞大腸桿菌病以幼雛和中雛發(fā)生較多，發(fā)病較早的為4日齡，通常以1月齡前后的幼雞發(fā)病為多。隨著養(yǎng)雞業(yè)集約化的不斷發(fā)展，疾病也越來越普遍。致病菌對(duì)抗菌素耐藥性越來越強(qiáng)。大腸桿菌極易產(chǎn)生耐藥性，臨床用量后不規(guī)范加劇了其耐藥性的發(fā)展，為取得較好的治療效果，需要選擇細(xì)菌比較敏感的藥物來進(jìn)行預(yù)防和治療，達(dá)到有效控制該病的目的。本試驗(yàn)從病雞中分離出致病菌，并對(duì)其主要大腸桿菌進(jìn)行生化鑒定，通過藥敏試驗(yàn)，指導(dǎo)臨床用藥，從而降低經(jīng)濟(jì)損失，迅速控制疾病。

1 材料

1.1 病料 采自泰興市周邊市(區(qū))鄉(xiāng)鎮(zhèn)的20多個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)和養(yǎng)殖戶送檢至泰興市獸醫(yī)站門診部的具有典型氣囊炎、敗血癥的病死蛋雞(150～200日齡)的肝臟、脾臟、心血等。病料送檢時(shí)間2005年2月～8月。

1.2 試劑 MR、V-P、靛基質(zhì)、明膠液化、氧化酶、過氧化氫酶、尿素酶試驗(yàn)培養(yǎng)基及本市獸醫(yī)站門診部提供的反應(yīng)試劑。

1.3 普通瓊脂平板 按常規(guī)由獸醫(yī)站門診部自制。麥康凱瓊脂、伊紅美蘭瓊脂、三糖鐵瓊脂均購自泰興市衛(wèi)生防疫站。

1.4 藥敏試紙 部分購于北京天壇生物技術(shù)有限公司，部分由本市獸醫(yī)站門診部自制。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)菌株(O2) 由泰興市獸醫(yī)衛(wèi)生監(jiān)督所微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

2 方法

2.1 培養(yǎng) 取病料無菌操作劃線接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上，置37℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。

2.2 分離培養(yǎng) 共分離出16株細(xì)菌，在普通營養(yǎng)瓊脂平板上，選取具有圓形、光滑、隆起、濕潤、半透明的近無色的菌落，分別劃線接種于麥康凱瓊脂和伊紅美蘭瓊脂上，置37℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。

2.3 生化試驗(yàn) 選取麥康凱瓊脂上長的紅色菌落或伊紅美蘭瓊脂上生長出的黑色帶有金屬光澤的菌落，作MR、V-P、靛基質(zhì)、三糖鐵、明膠液化、氧化酶、過氧化氫酶、尿素酶試驗(yàn)。

2.4 藥敏試驗(yàn) 選取麥康凱瓊脂上長出的紅色菌落或伊紅美蘭瓊脂上生長出的黑色帶有金屬光澤的菌落，取各菌株做藥敏試驗(yàn)。取O2標(biāo)準(zhǔn)株做對(duì)照，均置37℃培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。

3 結(jié)果

3.1 鑒別分離培養(yǎng) 在麥康凱瓊脂上長出圓形、光滑、濕潤的粉紅色菌落，并向培養(yǎng)基內(nèi)凹陷生長者為疑似大腸桿菌或在伊紅美蘭瓊脂平板上生長的黑色帶有金屬光澤的單個(gè)菌落。

3.2 生化試驗(yàn) 對(duì)16株進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：大多數(shù)菌株能發(fā)酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麥芽糖、蕈糖、木糖、衛(wèi)矛醇，產(chǎn)酸產(chǎn)氣或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。所有菌株都不利用肌醇，多數(shù)菌株不利用蔗糖，少數(shù)為遲緩發(fā)酵，所有菌株均不產(chǎn)生H2S。V-P試驗(yàn)和枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)均為陰性，M.R試驗(yàn)均為陽性，吲哚試驗(yàn)絕大多數(shù)菌株為陽性，極少數(shù)為陰性，尿素酶試驗(yàn)絕大多數(shù)為陰性，極少數(shù)為陽性。綜觀說明：試驗(yàn)各菌均對(duì)大多數(shù)糖類(葡萄糖、乳糖、麥芽糖、果糖、甘露糖)產(chǎn)酸產(chǎn)氣，MR試驗(yàn)陽性，V-P試驗(yàn)陰性，產(chǎn)生靛基質(zhì)，三糖鐵底層產(chǎn)酸，明膠液化試驗(yàn)陰性，氧化酶試驗(yàn)陰性，過氧化氫酶試驗(yàn)陽性，尿素酶試驗(yàn)陰性。以上試驗(yàn)證明此菌是大腸桿菌

3.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 見表1。敏感度根據(jù)《抗菌藥物敏感試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行判定。結(jié)果見表2。

表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 （mm）

表2 藥敏試驗(yàn)效果比較

4 小結(jié)與討論

由結(jié)果可以看出，和標(biāo)準(zhǔn)菌株(O2)對(duì)照，臨床上的大腸桿菌的藥敏譜發(fā)生了一定的變化，特別是對(duì)喹諾酮類藥物的敏感性。標(biāo)準(zhǔn)毒株對(duì)環(huán)丙沙星、恩諾沙星都很敏感，而臨床上的大腸桿菌敏感率：環(huán)丙沙星為43.75%，高敏率僅為6.25%；恩諾沙星為25%，高敏率僅為6.25%。這表明大腸桿菌分離菌株對(duì)喹諾酮類藥物產(chǎn)生了較高的耐藥性。大腸桿菌對(duì)這類藥物產(chǎn)生耐藥性的原因，可能與近年來獸醫(yī)臨床上大劑量應(yīng)用這類藥物有密切的關(guān)系。因此，臨床或在飼料中添加藥物時(shí)要注意，不要長期大量用一種藥物，應(yīng)選用幾種敏感藥物交替使用。

藥敏試驗(yàn)結(jié)果可看出，臨床上對(duì)大腸桿菌敏感率超過60%的常規(guī)藥物主要有氯霉素、慶大霉素、卡那霉素等，特別對(duì)卡那霉素、新霉素的敏感率可達(dá)81.25%，對(duì)有效防治大腸桿菌病有一定的參考價(jià)值。在臨床上選擇上述一種或幾種藥物進(jìn)行防治，會(huì)有較為理想的結(jié)果。

通過本次試驗(yàn)和臨床應(yīng)用效果表明：若要有效地控制大腸桿菌病，發(fā)病后先應(yīng)用上述試驗(yàn)提供的敏感藥物，另外還應(yīng)采取綜合防治措施，加強(qiáng)飼料管理，投藥與應(yīng)用大腸桿菌多價(jià)蜂膠疫苗相結(jié)合，能起到事半功倍的效果。

[1]吳信法. 獸醫(yī)細(xì)菌學(xué)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社. 1996. 18-66.

[2]曹樹澤, 陳德威, 張中直等. 獸醫(yī)細(xì)菌檢驗(yàn)手冊(cè)[M]. 北京: 農(nóng)業(yè)出版社. 1984.29-56.

[3]中國人民解放軍獸醫(yī)大學(xué)[M].獸醫(yī)檢驗(yàn). 北京: 農(nóng)業(yè)出版社. 1977.345-501.

[4]中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所[M].家畜傳染病學(xué). 北京: 農(nóng)業(yè)出版社.1986.

[5]馮淇輝. 獸用抗菌藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究[M]. 北京:科學(xué)出版社.1989.