馬 /齒 /莧 /抗 /菌 /試 /驗(yàn)

黃修奇

(商丘職業(yè)技術(shù)學(xué)院畜牧獸醫(yī)系 ,河南商丘476005)

馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧的全草。屬一年生肉質(zhì)草本,全株光滑無(wú)毛,莖圓柱形,平臥或斜向上,由基部分枝四散,生于田間地頭、路旁及荒蕪地,在我區(qū)分布較廣,數(shù)量較大,在夏、秋兩季莖葉茂盛時(shí)采收、割取全草,洗凈泥沙,用沸水略燙后曬干備用。馬齒莧性寒味酸,入大腸、肝、脾經(jīng),具有清熱解毒、涼血止血、散血消腫作用[1]。在我區(qū)廣泛應(yīng)用于人或動(dòng)物的腸炎拉稀均有良好的療效。是民間常用的自采自用藥物之一。但馬齒莧對(duì)常見(jiàn)致病菌的抗菌作用在獸醫(yī)資料中尚未見(jiàn)報(bào)道。我們用馬齒莧水煎劑對(duì)常見(jiàn)致病菌進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn)及抗致病菌攻擊的體內(nèi)抗菌試驗(yàn)。報(bào)告如下。

1 材料

1.1 器材 冰箱,恒溫培養(yǎng)箱,接種箱,顯微鏡,90 mm培養(yǎng)皿,接種環(huán),不銹鋼小管(高,內(nèi)外徑分別為0.6、0.8 mm),試管,注射器等。

1.2 藥物來(lái)源 馬齒莧由本院中獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在當(dāng)?shù)刈圆蓚溆谩?/p>

1.3 菌種 金黃色葡萄球菌(編號(hào):26113)、表皮球菌(26101)、乙型溶血性鏈球菌(32210)、大腸桿菌(44103)、痢疾桿菌(51597)、綠膿桿菌(10102),由中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供。

1.4 培養(yǎng)基 肉湯,血清肉湯,營(yíng)養(yǎng)瓊脂,血瓊脂培養(yǎng)基,按規(guī)定方法配制,分裝滅菌備用。

1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 小鼠,雌雄各半,體重20～22 g,由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場(chǎng)提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 體外抑菌試驗(yàn)

2.1.1 供試藥液制備 馬齒莧12.5 g加適量蒸餾水浸泡20 min后煮沸30 min,過(guò)濾濃縮藥液至25 mL,制成0.5 g/mL生藥液。用蒸餾水等倍稀釋再制成0.25 g/mL,0.125 g/mL生藥液置冰箱待用。2.1.2 菌液制備 從斜面培養(yǎng)基上分別取一接種環(huán)以上菌種的菌苔,乙型溶血性鏈球菌接種于血清肉湯培養(yǎng)基中,其他菌種分別接種于肉湯培養(yǎng)基中,在37℃培養(yǎng)18 h,取出,分別用血清肉湯、肉湯培養(yǎng)基把原菌液作1∶500稀釋成各種細(xì)菌的菌液。

2.1.3 取已制備的乙型溶血性鏈球菌菌液0.3 mL置于血瓊脂平板表面;取其他菌液各0.3 mL各置于瓊脂平板表面;用無(wú)菌圓型小玻璃棒反復(fù)均勻涂布后置37℃恒溫箱中10 min,使表面干燥。取出,在每個(gè)平板上等距離平放打有標(biāo)記的不銹鋼小管3只,每只管內(nèi)分別加入等量的不同濃度的馬齒莧的藥液。于37℃培養(yǎng)18 h。取出3個(gè)濃度的馬齒莧藥液,每菌種做6個(gè)平板[2]。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 馬齒莧的抑菌環(huán)直徑m,±SD)n=6

表1 馬齒莧的抑菌環(huán)直徑m,±SD)n=6

?

2.2 體內(nèi)抗菌試驗(yàn)[3]

2.2.1 供試藥液制備 黃連(由商丘市醫(yī)藥供應(yīng)站提供)3.0 g加適量蒸餾水浸泡20 min后煮沸30 min,過(guò)濾濃縮30mL,即 0.1 g/mL藥液;馬齒莧9.0 g按上述方法制成0.2 g/mL、0.1 g/1mL藥液各30 mL,置冰箱供兩天用藥。

2.2.2 菌液制備 活化大腸桿菌菌種后,取典型菌落接種于肉湯培養(yǎng)基中,經(jīng)培養(yǎng)后作為原菌液。用無(wú)菌生理鹽水采用連續(xù)稀釋方法并同時(shí)做活菌計(jì)數(shù)配制菌液濃度(CFU/mL)分別為6.0×105、6.0×106、6.0×107、6.0×108、6.0×109的大腸桿菌菌液5份。

2.2.3 預(yù)試 小鼠30只,隨機(jī)分5組。各組小鼠分別腹腔注射不同菌濃度的大腸桿菌菌液0.5 mL/只,觀察48 h內(nèi)動(dòng)物死亡情況。結(jié)果為:使小鼠死亡率達(dá)90%的大腸桿菌濃度是6.0×107CFU/mL;劑量是0.5 mL/只。

2.2.4 攻擊試驗(yàn) 小鼠80只隨機(jī)機(jī)分4組,按表2的藥物及劑量分別灌胃給藥,每天3次連續(xù)3 d。第4天早晨每只小鼠腹腔注射6.0×107CFU/mlL腸桿菌菌液0.5 mL造成感染。感染后繼續(xù)灌胃給藥,每天3次,連續(xù)3 d。于感染后第7天統(tǒng)計(jì)各組小鼠死亡只數(shù)。做X2檢驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 馬齒莧抗大腸桿菌感染作用

根據(jù)表2可以看出,黃連和高劑量馬齒莧可顯著提高受大腸桿菌攻擊小鼠的存活率;低劑量馬齒莧亦可提高小鼠的存活率。

3 小結(jié)

使用體外抗菌試驗(yàn)的管碟法,取量精確,單位體積中藥物濃度、菌液濃度一致,實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為準(zhǔn)確及有規(guī)律。是研究有抑菌作用藥物的首選方法。藥物的體內(nèi)抗菌試驗(yàn)由于有機(jī)體因素參與,是藥物、致病菌、機(jī)體三者相互作用的結(jié)果,能更好地反映藥物的抗感染療效。本試驗(yàn)研究從體外、體內(nèi)抗菌作用兩個(gè)方面闡明馬齒莧水煎劑對(duì)6種常見(jiàn)致病菌有明顯抑菌作用;對(duì)受大腸桿菌攻擊的小鼠可提高存活率。為我們?cè)讷F醫(yī)臨床上使用馬齒莧治療某些感染性疾病提供一定的理論依據(jù)。馬齒莧全草含大量甲基腎上腺素、多量鉀鹽、二羥基苯乙胺、二羥基苯丙氨酸,尚含生物堿、香豆精類、黃酮類、強(qiáng)心甙和蒽醌甙等;故在體內(nèi)抗菌試驗(yàn)中用黃連、小檗堿[4]作陽(yáng)性對(duì)照藥。這又從另一個(gè)角度闡明馬齒莧與黃連的共性與差異性-均與抗致病菌作用。但馬齒莧的作用稍遜于黃連。

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院中藥大辭典(上冊(cè))[M].上海:上海人民出版社,1975:7:289.

[2]中國(guó)藥典委員會(huì).中國(guó)藥典1995年版二部附錄[S].

[3]陳琦.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993:278.

[4]于船.中獸醫(yī)學(xué)(上冊(cè))[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,1979:153.