連翹-阿莫西林的急性亞急性毒性試驗

邊 棟,崔 陽,崔 琳,李明雁,李艷華

(東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院,黑龍江哈爾濱150030)

細菌耐藥性一直是全球關注的問題,由于阿莫西林的廣泛應用及不合理使用,導致臨床常見的病原菌產(chǎn)生嚴重的耐藥性,給動物的健康帶來極大的威脅。為此,國外研究人員已經(jīng)開始研究耐藥性抑制劑,如利血平、氰氯苯腙等,雖然對耐藥性均有一定的抑制作用,但它們本身的毒性也較大。因此,研究低毒、有效的耐藥性抑制劑具有廣泛的應用價值和良好的前景,在國際上越來越受到重視。中藥是我國特有的天然資源,在治療感染、逆轉腫瘤細胞耐藥性等方面顯示了獨特的作用,這提示我們可以在中藥[1]中尋找既有對耐藥菌株有效又無毒副作用或毒副作用較低的藥物。連翹屬金絲桃屬藤黃科多年生草本植物,全草可入藥。連翹具有清熱解毒、收斂止血、利濕之功效。

基于尚未見到連翹-阿莫西林復方藥物安全性評價的報道,故按照農(nóng)業(yè)部新獸藥一般毒性試驗技術要求[2]進行了其急性毒性試驗和亞急性毒性試驗研究,為開發(fā)新藥提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 清潔級昆明系小鼠80只,體重20±2 g,雌雄各半,購自中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.2 試驗藥物 阿莫西林原粉購自武漢凱通精細化工有限責任公司,連翹原粉購自四川省什邡市宏升植物原料有限公司。

1.3 化學試劑 用于測定 GPT、GOT、AKP、肌酐和尿素氮的試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 試驗儀器 BT224S型電子天平,WD-9403C型紫外分光光度計,DH6000A型恒溫箱。

1.5 試驗方法

1.5.1 急性毒性試驗預試驗 每次分別取兩只小鼠,根據(jù)上下法[2],首次給予2 000 mg/kg藥物,如果全死則降低劑量,如果全活則增加劑量,觀察出現(xiàn)的癥狀并記錄死亡數(shù),找出引起0%及100%死亡率的劑量。因給予4 000 mg/kg濃度藥物時,死亡率仍為0%,只能測得最大耐受量。

1.5.2 亞急性毒性試驗 將小鼠80只隨機分為4組(高劑量組、中劑量組、低劑量組及對照組)[3],每組20只,雌雄各半,前3組分別給予濃度為40 g/kg、13.33 g/kg和4 g/kg的藥物,對照組不加藥物。各組均自由采食。分別在給藥第7天和第14天時,對各組小鼠進行器官系數(shù)[4]、器官含水量、血常規(guī)檢驗、肝功與腎功能檢查。

2 試驗結果與分析

2.1 性毒性試驗結果 小鼠未出現(xiàn)因藥物作用而導致的死亡。測得最大耐受量為40 g/kg。

2.2 亞急性試驗結果

2.2.1 連翹-阿莫西林復方藥物對體重的影響 試驗中各組小鼠給藥后的表現(xiàn)與急性試驗基本一致,給藥期間小鼠未出現(xiàn)因藥物作用而導致的死亡情況。各組小鼠均有不同幅度的體重增加,各劑量組和對照組小鼠體重進行統(tǒng)計學分析(t檢驗),結果表明給藥后3個劑量組的小鼠體重變化幅度與對照組間差異不顯著(P＞0.05)。

2.2.2 小鼠的器官系數(shù)與器官含水量 給藥后第7天和第14天,各劑量組小鼠的各器官系數(shù)差異均不顯著(P＞0.05);給藥第7天,各劑量組小鼠器官的含水量差異均不顯著(P＞0.05);給藥第14天,中劑量組的心臟含水量差異顯著,其余均不顯著。

2.2.3 連翹-阿莫西林復方藥物對小鼠血液生理指標的影響 連翹-阿莫西林復方藥物對小鼠血液生理指標的影響結果見表1。通過對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析(t檢驗)表明,3個劑量組小鼠的血紅蛋白(Hb)、紅細胞數(shù)(RBC)、中性粒細胞百分比(wlcr)、淋巴細胞百分比(w-scr)與對照組間差異均不顯著(P＞0.05)。

2.2.4 連翹-阿莫西林復方制劑對小鼠血液生化指標的影響 連翹-阿莫西林復方藥物對小鼠血液生化指標的影響結果見表2。對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計表明:第14天,高劑量組谷草轉氨酶(GOT)差異顯著(P＜0.05),其他生化指標未見各劑量組與對照組之間差異有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.2.5 小鼠的病理組織學變化 分別在第7天和第14天對各組小鼠進行病理組織學檢查,病理切片結果顯示,病理組織變化和數(shù)據(jù)反應的基本吻合,有少數(shù)切片出現(xiàn)淤血現(xiàn)象,無明顯的病理變化。

表1 連翹-阿莫西林混合藥物對小鼠血液生理指標的影響

表1 連翹-阿莫西林混合藥物對小鼠血液生理指標的影響

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表2 連翹-阿莫西林混合藥物對小鼠血液生化指標的影響

3 討論

從連翹-阿莫西林急性毒性試驗結果可知,小鼠沒有因藥物致死現(xiàn)象,未測出半數(shù)致死量(LD50),測定最大耐受量,故短期給藥安全性很高。

從亞急性毒性試驗結果可知,各劑量組體重均增加,但劑量組的體重變化幅度與對照組相比較差異不顯著,表明藥物對小鼠的食欲及健康狀況的影響并不顯著。與對照組比較,血紅蛋白、紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)、中性粒細胞百分數(shù)和淋巴細胞百分數(shù)同對照組的上述指標比較差異均不顯著,因血液成分的檢測是檢驗藥物毒性的一個重要指標,故判斷藥物的毒性比較低。血液生化指標中,除了第14天的谷草轉氨酶測定項的高劑量組出現(xiàn)了差異顯著(P＜0.05)外,其他各劑量組的血液生化指標均無明顯差異,因轉氨酶是反映肝臟功能的重要指標,且只有肝臟受到嚴重傷害時谷草轉氨酶才會出現(xiàn)偏高,這表明高劑量長期給藥對肝臟的毒性較大,低、中劑量組比較安全。劑量組與對照組的器官系數(shù)分析差異不顯著,對各劑量組小鼠的臟器,如心、肝、脾、肺、腎、腦的組織切片進行觀察,切片顯示與上表數(shù)據(jù)反映相吻合,出現(xiàn)的部分臟器的淤血現(xiàn)象是由于采集時所致,進一步證實了該藥物的安全性很高。綜上所述,連翹-阿莫西林復方藥物的毒性很低,臨床用藥安全性很高。

[1]江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典[M].上海:上海人民出版社,1997.

[2]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.新獸藥一般毒性試驗技術要求[S].1991.

[3]李江珍.降脂膠囊急性毒性及致突變性研究[J].湖北中醫(yī)雜志,2000,22(6):48.

[4]GB151931.食品安全性毒理學評價程序和方法[S].2003.