毛脈酸模果實(shí)不同部位中大黃素及白藜蘆醇的含量分析

金桂花，韓映晨，徐蓮花

（吉林省延邊食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 延吉 133000）

毛脈酸模是蓼科酸模屬多年生草本植物，主要分布于我國(guó)東北、華北等地區(qū)，其中黑龍江省又主要分布于大、小興安嶺地區(qū)。毛脈酸模在民間以根入藥，對(duì)淋病、上呼吸道感染、癬病和瘡毒有確切療效，但目前對(duì)毛脈酸模果實(shí)成分的含量研究報(bào)道極少。毛脈酸模中含有白藜蘆醇及其苷等二苯乙烯類(lèi)成分及大黃素等蒽醌類(lèi)成分。白藜蘆醇是植物界分布較廣的二苯乙烯類(lèi)化合物，具有多種藥理活性，包括抗腫瘤活性[1-3]、抗氧化性和抗血小板活性，以及保肝利肝作用[4]、鎮(zhèn)咳平喘作用、抗病原微生物作用[5]等。大黃素的生物活性表現(xiàn)在抑制胰酶作用[6]、抑菌、抗炎及免疫調(diào)節(jié)作用[7-10]、肝腎保護(hù)作用[11-12]及胃腸道雙向調(diào)節(jié)作用[13]，并且是很好的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑[14-15]。本試驗(yàn)利用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)毛脈酸模果實(shí)不同部位（包括3個(gè)等級(jí)種子、果皮及花被片）中大黃素及白藜蘆醇的含量進(jìn)行了分析，為毛脈酸模果實(shí)及種子的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

YoungLin高效液相色譜儀，YoungLin Autochro-2000型色譜工作站。大黃素對(duì)照品、白藜蘆醇對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)分別為 110756-200110，111535-200301）；甲醇、乙腈為色譜醇；水為超純水；其他試劑均為分析純。毛脈酸模種子為市售，采后室內(nèi)自然陰干。按毛脈酸模種子的性狀特征將其分為3個(gè)等級(jí)，并將3個(gè)等級(jí)的毛脈酸模種子、花被片及果皮分別粉碎成細(xì)粉（過(guò)80目篩），見(jiàn)表1。

表1 3個(gè)等級(jí)毛脈模種子清水浸酸種的發(fā)芽情況表

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

大黃素：流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水（25∶75），柱溫為40℃，流速為0.8 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm。

白藜蘆醇：流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸水（70∶30），柱溫為40℃，流速為0.8 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)為365 nm。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

分別精密稱(chēng)取毛脈酸模3個(gè)等級(jí)種子、花被片、果皮粉末（過(guò)80目篩）500 mg，加50%乙醇70 mL，索氏法提取4 h，過(guò)濾，蒸干。用甲醇溶解，并定容至25 mL，即為供試品溶液。精密稱(chēng)取在60℃減壓干燥至恒重的大黃素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.14 mg的大黃素對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)取在60℃減壓干燥至恒重的白藜蘆醇對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.36 mg的白藜蘆醇對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：精密吸取大黃素對(duì)照品溶液2，4，6，8，10 mL及白藜蘆醇對(duì)照品溶液 1，2，3，4，5 μL，分別注入高效液相色譜儀測(cè)定。以進(jìn)樣量 X（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積 Y為縱坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，白藜蘆醇回歸方程為 Y=8 106.06 X+62 574，r=0.999 8（n=5）；大黃素回歸方程為 Y=4 106.06X+102 416，r=0.999 7（n=5）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份一等種子供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時(shí)進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果大黃素的 RSD=1.3%（n=6），白藜蘆醇的 RSD=0.8%（n=6），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：精密稱(chēng)取毛脈酸模一等種子粉末5份，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果大黃素的 RSD=1.1% （n=5），白藜蘆醇的 RSD=1.8% （n=5），表明方法重現(xiàn)性良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取各對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。大黃素和白藜蘆醇峰面積的 RSD分別為1.6%和1.4%（n=6），表明儀器精密度良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱(chēng)取毛脈酸模一等種子粉末一定量，加入一定量混合對(duì)照品溶液，按供試品溶液方法制備溶液并測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4 樣品含量測(cè)定

取各樣品，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3?？梢?jiàn)，毛脈酸模種子中大黃素及白藜蘆醇的含量與種子的發(fā)育及次生代謝產(chǎn)物的積累有關(guān)，一等種子中大黃素的含量較二、三等種子含量較高，大黃素在花被片中的含量明顯高于種子及果皮；白藜蘆醇在一等種子中的含量頗高，而二、三等種子及花被片中未檢測(cè)到其特征峰，果皮中含量較低。

表2 大黃素和白藜蘆醇加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表3 毛脈酸模種子、花被片及果皮中大黃素、白藜蘆醇的含量（‰）

3 討論

種子中大黃素和白藜蘆醇含量與種子的成熟度正相關(guān)，種子發(fā)育較成熟的，其含量也相應(yīng)較高，即次生代謝產(chǎn)物的含量與種子的生長(zhǎng)及發(fā)育有關(guān)。由毛脈酸模果實(shí)不同部位中的大黃素和白藜蘆醇的含量測(cè)定可知，種子中大黃素和白藜蘆醇的含量與種子的飽滿(mǎn)度及發(fā)育程度有關(guān)，種子發(fā)育的好，子粒飽滿(mǎn)，則其含量也會(huì)相應(yīng)較高；相反，種子發(fā)育不成熟，子粒干癟，其含量會(huì)較低甚至檢測(cè)不到。

選擇種子入藥時(shí)，需盡量選擇飽滿(mǎn)的種子，以保證有效成分（活性成分）的含量及藥效。此外，花被片及果皮中含有較多的大黃素，尤其是花被片中的大黃素含量幾乎達(dá)到一等種子中大黃素含量的5倍，且花被片較種子易得，故當(dāng)以大黃素為有效成分（活性成分）入藥時(shí)，選用花被片較種子更佳。

二、三等種子及果皮中檢測(cè)不到白藜蘆醇成分的特征峰，分析其原因：一是種子中所含的白藜蘆醇成分原本較少，二、三等種子的發(fā)育及飽滿(mǎn)度均較一等種子差，故白藜蘆醇成分的蓄積量則更少；二是由于植物次生代謝途徑在植物體內(nèi)或細(xì)胞中并不全部開(kāi)放，而是定位于某一器官、組織、細(xì)胞或細(xì)胞器中并受到獨(dú)立的調(diào)控，推測(cè)果皮中不存在白藜蘆醇的次生代謝途徑。在操作中，分離果皮與種子頗為困難，因此，生產(chǎn)中選擇果實(shí)入藥較種子更經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便。

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