殺菌劑對(duì)劍麻莖腐病病原菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

鄭金龍 ，高建明 ，張世清 ，陳河龍 ，劉巧蓮 ，易克賢 ，2*

（1.中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所，農(nóng)業(yè)部熱帶作物生物技術(shù)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?571101；2.中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所，海南 儋州 571737）

劍麻莖腐病是除劍麻斑馬紋病外，對(duì)劍麻危害最大的真菌性病害。20世紀(jì)50年代初，坦桑尼亞[1，2]和肯尼亞[3]最早報(bào)道發(fā)生此病。我國(guó)于1987年在廣東省的一些國(guó)營(yíng)農(nóng)場(chǎng)發(fā)現(xiàn)此病，給當(dāng)?shù)貏β樯a(chǎn)造成重大經(jīng)濟(jì)損失[4]。近年來(lái)，該病又相繼在我國(guó)各劍麻主產(chǎn)區(qū)發(fā)生危害，并且有不斷加重之勢(shì)，特別是對(duì)廣西植麻區(qū)危害尤為嚴(yán)重。為了篩選出對(duì)劍麻莖腐病菌毒力大、抑菌效果好、成本低的殺菌劑供生產(chǎn)上使用，本研究選用了14種殺菌劑作為供試藥劑，采用菌絲體生長(zhǎng)速率法對(duì)劍麻莖腐病菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，以期篩選出對(duì)劍麻莖腐病菌毒力強(qiáng)的殺菌劑，為防治劍麻莖腐病提供參考。

1 試驗(yàn)材料

1.1 供試菌株

采自廣西和廣東的病樣，通過(guò)科赫法則分離、純化并鑒定病原菌，進(jìn)行致病性測(cè)定后，選擇致病性強(qiáng)的三個(gè)菌株CH0002、CH0003和CH0027作為供試菌株保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 供試殺菌劑

供試殺菌劑14種：50%咪酰胺錳鹽WP（德國(guó)拜耳作物科學(xué)公司），40%五硝基多菌靈WP（湯普森生物科技），3%甲基多抗霉素WP（日本生化科研株式公社菌種生產(chǎn)），72%霜脲·錳鋅WP（美國(guó)杜邦公司），10%苯醚甲環(huán)唑WG（江蘇豐登農(nóng)藥有限公司），70%甲基硫菌靈WP（美國(guó)默賽技術(shù)公司制造），75%百菌清WP（蘇州先正達(dá)作物保護(hù)有限公司），25%三唑酮WP（美國(guó)默賽技術(shù)公司制造），70%甲基托布津WP（江蘇龍燈化工有限公司），50%洽益發(fā)WP（江蘇洽益農(nóng)化有限公司臺(tái)資），真菌凈ME（河北省徐水縣農(nóng)藥廠），50%烯酰嗎啉WP（青島瀚生生物科技股份有限公司），50%撲海因WP（德國(guó)拜耳作物科學(xué)公司），50%多菌靈WP（上海升聯(lián)化工有限公司）。

1.3 供試培養(yǎng)基

PDA（馬鈴薯）培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖15 g，瓊脂20 g，以去離子水定容至1L，121℃滅菌15min，用于黑曲霉菌的分離純化培養(yǎng)、菌株保存及藥劑篩選等。

1.4 主要儀器

SW-CJ-IFD單人單面潔凈工作臺(tái)；SHP-450生化培養(yǎng)箱；滅菌鍋。

2 試驗(yàn)方法

2.1 14種殺菌劑對(duì)劍麻莖腐病的毒力測(cè)定

采用生長(zhǎng)速率法。先將不同殺菌劑制成含量分別為0、0.1、1、100mg/L的PDA培養(yǎng)基平板，然后將培養(yǎng)120h后的各菌株菌落邊緣取單菌點(diǎn)移至含藥平板上，置于（28±0.5）℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)120h后，觀察供試菌株在各殺菌劑的不同濃度下的生長(zhǎng)情況，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，求平均值，按以下公式計(jì)算抑菌率：

根據(jù)不同菌株在0、0.1、1、100mg/L含藥培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況和抑菌率大小，設(shè)置不同殺菌劑的毒力測(cè)定濃度梯度，每種殺菌劑設(shè)5～7個(gè)濃度梯度，每濃度3皿，置于（28±0.5）℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)120h后，觀察供試菌株在各殺菌劑的不同質(zhì)量濃度下的生長(zhǎng)情況，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑，求平均值，計(jì)算抑菌率。試驗(yàn)重復(fù)3次求平均抑菌率，并以濃度的對(duì)數(shù)值（x）和平均抑菌率的機(jī)率值（y）求各種殺菌劑對(duì)參試菌株的毒力回歸方程Y=a+bX，并計(jì)算出抑制菌體生長(zhǎng)的有效中濃度 EC50以及 EC75和相關(guān)系數(shù)（r）值[5]。

2.2 藥劑成本計(jì)算

配制15 kg的藥液按以下公式計(jì)算藥劑的成本：藥劑所需量=盛水量（15kg）×1000/稀釋倍數(shù)；藥劑成本=藥劑所需量（g）×單價(jià)（元/g）。

3 結(jié)果與分析

3.1 供試藥劑EC50值比較分析

各藥劑濃度對(duì)數(shù)與生長(zhǎng)抑制率幾率值之間表現(xiàn)為直線相關(guān)，各藥劑的毒力回歸方程與其EC50值見表1。由表1可知，同一種藥劑對(duì)不同菌株的生長(zhǎng)抑制率不同，不同藥劑對(duì)相同菌株的生長(zhǎng)抑制率也不相同。14種藥劑可分為5個(gè)類群，其中對(duì)病原菌抑制效果最好的是咪酰胺錳鹽，其平均EC50值為0.1608μg/mL；其次是五硝基多菌靈和甲基多抗霉素，其平均EC50值分別為4.9392 μg/mL和8.4160μg/mL；第三是霜脲錳鋅、苯醚甲環(huán)唑和百菌清，其平均EC50值在21.5538～79.4119μg/mL之間；第四是三唑酮、甲基硫菌靈、撲海因、多菌靈和烯酰碼啉，其平均EC50值在110.4216～969.0672μg/mL之間；對(duì)病原菌抑制效果最差的是洽益發(fā)、真菌凈和甲基托布津，其平均EC50值在4624.9062～14114.5152μg/mL之間。

表1 不同殺菌劑測(cè)試效果的回歸方程、相關(guān)系數(shù)、EC50、平均EC50和EC75Table.1 Toxicitytest result ofdifferent fungicides

3.2 成本分析比較

各藥劑的使用成本見表2。從表2可見，配制15kg藥液，成本較低的是多菌靈、苯醚甲環(huán)唑和咪酰胺錳鹽，僅分別為0.34、0.6和0.75元；其次是五硝基多菌靈、甲基多抗霉素、三唑酮、烯酰碼啉和甲基托布津，成本價(jià)介于1.00～1.50元之間；最后是霜脲錳鋅、甲基硫菌靈、百菌清、撲海因、洽益發(fā)和真菌凈，成本價(jià)介于1.50～4.00元之間，其中成本最高的是撲海因和洽益發(fā)，其成本均為3.75元。

表2 配制15kg藥液使用殺菌劑的成本核算Table.2 Cost analysis ofused fungicides

4 討論和建議

4.1 討論

（1）供試的14種藥劑中，咪酰胺錳鹽的抑菌效果最好，其EC50值在0.1262～0.1897μg/mL之間；其次是五硝基多菌靈，其EC50值在3.7362～5.8540μg/mL之間；這兩種藥劑對(duì)三個(gè)菌株的EC50都比較小，但也存在差異，存在差異的主要原因是三個(gè)參試菌株之間的致病力不同所致；抑菌效果最差的是甲基托布津，其EC50值高達(dá)37396.0607μg/mL；其中多菌靈的平均EC50值為897.3968 μg/mL，抑菌效果較差，這與國(guó)內(nèi)學(xué)者黃標(biāo)[6]、趙艷龍[7]等報(bào)道25%多菌靈可濕性粉劑對(duì)劍麻莖腐病具有較好的防治效果有差異，其原因可能是我國(guó)劍麻主產(chǎn)區(qū)長(zhǎng)期使用多菌靈，使病原產(chǎn)生抗性所致。

（2）毒力回歸曲線的斜率與病原菌對(duì)殺菌劑的敏感性成正比，因此可以和EC50值配合來(lái)比較分析藥劑的抑菌效果，殺菌劑的EC50值越小，毒力回歸曲線的斜率值越高，說(shuō)明隨著藥劑濃度的增加，對(duì)病原菌生長(zhǎng)的抑制作用提高越快。綜上所述，14種藥劑的抑菌效果排序依次為：咪酰胺錳鹽＞五硝基多菌靈＞甲基多抗霉素＞霜脲錳鋅＞苯醚甲環(huán)唑＞甲基硫菌靈＞三唑酮＞百菌清＞撲海因＞多菌靈＞洽益發(fā)＞真菌凈＞烯酰碼啉＞甲基托布津。

4.2 建議

通過(guò)對(duì)14種藥劑抑菌效果的測(cè)定以及藥劑成本核算，認(rèn)為目前我國(guó)防治劍麻莖腐病的最佳藥劑為咪酰胺錳鹽和五硝基多菌靈，用這兩種藥劑防治劍麻莖腐病在國(guó)內(nèi)尚未見報(bào)道，若在大田實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證，有望在我國(guó)劍麻主產(chǎn)區(qū)進(jìn)行推廣。

劍麻莖腐病發(fā)病迅速，傳染性強(qiáng)，因此光靠藥劑防治是不夠的，應(yīng)該貫徹“預(yù)防為主，綜合防治”的原則，應(yīng)以提高抗病性為主，輔以避病措施、化學(xué)防治和其它農(nóng)業(yè)措施等進(jìn)行劍麻莖腐病的防治。

[1]Mand.M.Wallance，E.C.Diekmahns：Bole rot ofsisal，The East African Agricultural Journal，18（1）1952：24-29.

[2] R.Cifferri：Red rot ofsisal in Venezuela，Phytopathology.41（8）1951：766.

[3] J.F.Wienk：Planter dan-bole rot，Kenya Sisal Bd.Bull.，1964（50）：33.

[4] 黃標(biāo)，符清華.H.11648麻莖腐病發(fā)生規(guī)律及防治研究[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，1990（3）：38-45.

[5] 孫廣宇，宗兆鋒.植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社.2002，142-144.

[6] 趙艷龍，何衍彪，詹儒林.我國(guó)劍麻主要病蟲害的發(fā)生與防治[J].中國(guó)麻業(yè)科學(xué)，2007，29（6）：334-338.

[7] 黃標(biāo)，符清華.H.11648麻莖腐病發(fā)生規(guī)律及防治研究[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，1990（3）：38-45.