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    白附子急性毒性作用研究*

    2010-05-07 02:27:28熊靜悅牟道華唐大軒譚正懷
    四川生理科學(xué)雜志 2010年3期
    關(guān)鍵詞:白附子提物藥量

    熊靜悅 牟道華 唐大軒 譚正懷

    (四川省中醫(yī)藥科學(xué)院?國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥質(zhì)量生物評(píng)價(jià)重點(diǎn)研究室,四川 成都 610041)

    白附子始載于漢代《名醫(yī)別錄》,植物來源有毛茛科植物黃花烏頭Aconitum coreanum(Levl)Rap.的塊根及天南星科植物獨(dú)角蓮Typhonium giganteum Engl.的干燥塊莖,后者為《中國(guó)藥典》2005年版收載,即本研究采用品種。白附子為中醫(yī)臨床常用藥,具有祛風(fēng)濕、定驚搐、解毒散結(jié)止痛等功效,主要用于中風(fēng)痰壅,口眼?斜,破傷風(fēng)等癥的治療,由于歷代本草記載白附子為毒性中藥,故本品一般經(jīng)炮制后使用(如礬制、姜制、黑豆制、甘草制、皂角制等),生品多為外用。為了明確白附子的毒性作用及其物質(zhì)基礎(chǔ),使其毒性能夠定性、定量、定位地表達(dá),本研究通過小鼠急性毒性試驗(yàn),初步探討了生、制白附子70%乙醇提取物及制白附子水提物的毒性范圍,以期為其臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品 制白附子水提取物,乳白色膏體,1ml浸膏相當(dāng)于1.43g原生藥;制白附子70%乙醇提取物,深棕色膏體,1ml浸膏相當(dāng)于13.33g原生藥;生白附子70%乙醇浸膏,棕色膏體,1ml浸膏相當(dāng)于9.09g原生藥。制白附子(姜礬法,按 2005版藥典方法進(jìn)行炮制)和生白附子飲片購(gòu)自四川新荷花飲片公司,提取物由中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所提供,給藥時(shí)以蒸餾水配制,給藥劑量以原生藥g?kg-1表示。

    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠,SPF級(jí),♀♂各半,由四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào)SCXK(川)2008-19。小鼠飼養(yǎng)于SPF屏障系統(tǒng)中,光照條件為12h/12h明暗交替,溫度20℃-26℃,相對(duì)濕度40%-70%,以鼠全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)。

    1.3 方法

    1.3.1 制白附子水提取物最大給藥量試驗(yàn) 40只小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機(jī)分為對(duì)照組和制白附子組,20只?組-1,以最大濃度(1.43g原生藥?ml-1)、最大給藥體積(0.4ml?10g-1)灌胃小鼠2次,間隔6h;給藥當(dāng)天密切觀察小鼠體征(1次?h-1,共 4次),此后每天觀察1次,連續(xù) 14d;于給藥前、第7d及第14d稱體重,第 14d處死小鼠取心、肝、脾、肺、腎計(jì)算臟器指數(shù)。

    1.3.2 制白附子70%乙醇提取物L(fēng)D50試驗(yàn) 50只小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機(jī)分為5組,分組及給藥見表2,給藥體積0.3ml?10g-1,灌胃給予小鼠1次;給藥當(dāng)天密切觀察小鼠體征(1次?h-1,共4次),此后每天觀察1次,連續(xù)觀察14d并記錄小鼠出現(xiàn)的中毒及死亡情況。

    1.3.3 生白附子70%乙醇提取物最大給藥量試驗(yàn) 40只小鼠禁食不禁水16h后按體重隨機(jī)分為對(duì)照組和生白附子組,20只?組-1;以最大濃度(9.09g原生藥?ml-1)、最大給藥體積灌胃小鼠1次。給藥當(dāng)天及此后14天同1.3.1方法觀察。

    2 結(jié)果

    2.1 制白附子水提取物最大給藥量試驗(yàn)

    未發(fā)現(xiàn)小鼠死亡或行為學(xué)、排泄物、分泌物等出現(xiàn)異常。小鼠灌胃給予制白附子水提取物或蒸餾水后,給藥組體重與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,見表1。肉眼檢查各組小鼠主要臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯異常;臟器系數(shù)見表1。制白附子水提取物的最大給藥量為114.4g?kg-1。

    表1 制白附子水提取物對(duì)小鼠體重的影響(,n=20)

    表1 制白附子水提取物對(duì)小鼠體重的影響(,n=20)

    組別 劑量(g?kg-1)體重(g)臟器系數(shù)(g?10g-1)給藥前 7d 14d 心 肝 脾 腎 肺對(duì)照組 -- 18.33±1.44 30.73±3.21 34.04±3.19 0.05±0.01 0.61±0.06 0.04±0.01 0.14±0.03 0.06±0.01制白附子水提物組 114.4 17.89±1.41 30.41±2.91 34.84±4.48 0.05±0.01 0.57±0.07 0.04±0.01 0.13±0.02 0.06±0.01

    2.2 制白附子70%乙醇提取物L(fēng)D50試驗(yàn) 由Bliss法計(jì)算得LD50為250.04g?kg-1,LD5為183.04g?kg-1,LD95為341.56g?kg-1。制白附子70%乙醇提取物對(duì)小鼠毒性癥狀多見呼吸急促,俯臥、自發(fā)活動(dòng)減少,解剖死亡小鼠見呼吸先于心臟搏動(dòng)停止。

    表2 制白附子70%乙醇提取物對(duì)小鼠LD50

    2.3 生白附子70%乙醇提取物最大給藥量試驗(yàn)

    藥物組小鼠給藥后自發(fā)活動(dòng)較對(duì)照組減少,給藥后24h內(nèi)雄性小鼠死亡2只,雌性小鼠死亡3只,呼吸先于心臟搏動(dòng)停止。小鼠灌胃給予生白附子70%乙醇提取物或蒸餾水后,給藥組體重與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,見表3。肉眼檢查各組小鼠主要臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯異常,給藥組心、肝、脾、肺、腎臟器系數(shù)與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組初始小鼠數(shù)均為20只,給藥后生白附子70%醇提物組小鼠死亡5只,測(cè)得生白附子70%乙醇提物的 LD50大于364.0g?kg-1。

    表3 生白附子70%醇提物對(duì)小鼠體重的影響(,n=20)

    表3 生白附子70%醇提物對(duì)小鼠體重的影響(,n=20)

    組別 劑量(g?kg-1)體重(g)臟器系數(shù)(g?10g-1)給藥前 7d 14d 心 肝 脾 腎 肺對(duì)照組 -- 20.45±1.27 35.06±4.16 42.39±5.43 0.05±0.01 0.58±0.09 0.03±0.01 0.13±0.02 0.06±0.01生白附子70%醇提物組 364.0 20.78±0.95 34.47±3.80 39.96±5.67 0.05±0.01 0.53±0.07 0.03±0.01 0.12±0.02 0.06±0.01

    3 討論

    白附子為中醫(yī)臨床常用的有毒中藥之一,歷代本草除《日華子本草》外,均記載其為毒性藥材[1],1988年國(guó)務(wù)院發(fā)布的《醫(yī)療用毒性藥品管理辦法》也將白附子列入毒性藥品管理范圍,故除外用和少數(shù)配方外,其均以炮制品入藥。一般認(rèn)為,白附子經(jīng)白礬(KAl(SO4)2?12H2O)及生姜炮制后,其毒性成分被Al(OH)3凝膠吸附或中和從而解毒[2],但此法在炮制過程中又引入了數(shù)百倍以上的Al3+[3],極易對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)造成影響。有報(bào)道一名女性患者服用制白附子(約20g)煎液,20min后出現(xiàn)口舌及四肢麻木、頭暈、心慌、言語(yǔ)不清,惡心、嘔吐數(shù)次后意識(shí)喪失,呼之不應(yīng)[4];40%制白附子水混懸液可造成家兔結(jié)膜水腫(0.12g?只-1),制白附子冷水浸液20.0g?kg-1腹腔注射,小鼠72h內(nèi)死亡率為40%,大鼠連續(xù)21d灌胃制白附子混懸液6.0g?kg-1,其體重增加減慢[5];制白附子水提液靜注小鼠的LD50為 29.6±2.7g?kg-1,生白附子的 LD50為 32.6±2.7g?kg-1,制白附子溫水浸液180.0g?kg-1分3次灌胃小鼠,見豎毛俯臥,制白附子煎劑120.0g?kg-1分4次灌胃小鼠,出現(xiàn)呼吸困難、活動(dòng)減少,并有動(dòng)物死亡[6],由此可見,制白附子尚存在潛在的毒性作用。

    本研究測(cè)得制白附子水提物的最大給藥量和70%乙醇提取物的 LD50分別為 114.4g?kg-1和 250.04g?kg-1,生白附子70%乙醇提取物的 LD50>364.0g?kg-1,以期為中醫(yī)臨床應(yīng)用提供劑量設(shè)計(jì)的參考。

    1 楊振翔,張振凌.禹白附炮制及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J].醫(yī)藥世界,2006,7:175-177.

    2 周玉朱.有毒中藥重用摭拾[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2000,7(1):64-65.

    3 王毅,張靜修.制白附子飲片中鋁含量的研究[J].中成藥,1992,14(5):19-21.

    4 周曉霞,汪弘.白附子中毒1例報(bào)告[J].浙江實(shí)用醫(yī)學(xué),2003,8(1):49-49.

    5 吳連英,仝燕,程麗萍,等.白附子不同炮制品毒性比較研究[J].中國(guó)醫(yī)藥學(xué)報(bào),1992,7(1):13-15.

    6 常東明,李慶華,朱明,等.白附子炮制前后藥理作用的初步觀察[J].中藥通報(bào),1981,4:23-25.

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