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    排毒雙調(diào)綜合療法對腎切除 CRF大鼠血漿 AngⅡ和 ALD影響的實驗研究

    2010-04-25 10:45:44董正華李小會趙天才曾福海陜西中醫(yī)學(xué)院咸陽712046
    陜西中醫(yī) 2010年6期
    關(guān)鍵詞:雙調(diào)灌胃灌腸

    董正華 張 楠 李小會 趙天才 曾福海 陜西中醫(yī)學(xué)院 (咸陽 712046)

    慢性腎功能衰竭(chronic renal failure,CRF)是由多種慢性腎臟疾病或累及腎臟的全身性疾病引起的慢性進(jìn)行性腎實質(zhì)損害。我們根據(jù)多年研究,提出并“排毒雙調(diào)綜合療法”治療CRF的思路,并取得較好臨床效果[1]。為進(jìn)一步從實驗學(xué)角度證實該療法的作用并且從血管活性因子及鹽皮質(zhì)激素角度探討其作用機制,特設(shè)計本實驗。

    1 實驗材料與方法 1.1 實驗材料 1.1.1 實驗動物:SD系健康雄性大鼠,體重 200±20g,共 72只。

    1.1.2 實驗用藥:①灌胃方:西洋參、制附片、白術(shù)、茯苓、黃連、蘇葉等;②灌腸方:酒大黃、制附子、煅龍骨、蒲公英等。藥物經(jīng)常規(guī)煎煮、過濾、水浴蒸發(fā)分別至每毫升含生藥材 1.3g、2.6g,置 4℃冰箱備用;大鼠用量按文獻(xiàn)方法[2]折算。

    1.1.3 主要實驗試劑:血清 BUN、Scr試劑盒,南京建成生物工程研究所出品;血漿 AngⅡ、ADL試劑盒,購自北京科美東雅生物技術(shù)有限公司。

    1.2 實驗方法 1.2.1 實驗分組及造模:大鼠購回后,適應(yīng)性喂養(yǎng) 1周,稱體重,經(jīng)尿蛋白定性檢查為陰性后,隨機抽取 8只作為正常對照組(A組),其余 64只造模成功后隨機分為 5組。參照文獻(xiàn)方法[2],對 64只大鼠行兩期手術(shù)法造成 5/6腎切除 CRF模型,8只對照組大鼠同步進(jìn)行兩期假手術(shù)。

    1.2.2 喂養(yǎng)及給藥方式:第Ⅱ期手術(shù)后,經(jīng)過 3周模型成型期,共死亡大鼠 9只。將剩余 55只模型大鼠隨機分為病理組(B組),灌胃組(C組),灌腸組(D組 ),針刺組(E組),綜合治療組即灌胃+灌腸+針刺組(F組)。各組大鼠分別給予如下處理:A、B兩組分別給予生理鹽水 2mL灌胃,1mL灌腸,四處非穴位針柄按壓。 C組予灌胃方 2mL灌胃,生理鹽水 1mL灌腸,四處非穴位針柄按壓。D組予生理鹽水 2mL灌胃,灌腸方 1mL灌腸,四處非穴位針柄按壓。E組分別給予生理鹽水 2mL灌胃,1mL灌腸 ,針刺脾俞、腎俞、足三里、三陰交。 F組予灌胃方2mL灌胃,灌腸方 1mL灌腸,針刺脾俞、腎俞、足三里、三陰交。

    上述治療共持續(xù) 4周,灌胃、灌腸、針刺每日各 1次,針刺穴位按文獻(xiàn)方法[3]定位。

    1.2.3 標(biāo)本采集及觀測指標(biāo):觀察各組大鼠精神狀態(tài)、反應(yīng)性、活動度、攝食情況、毛色、體重變化、二便情況及存活數(shù)等。治療結(jié)束后,停藥禁食 24h,禁水 8h,稱取大鼠體重;頸總動脈采血 2mL,用毛細(xì)吸管吸取 50μl血液測 Hb,離心后取血清檢測 BUN、Scr;頸靜脈采血 3mL,離心后取血漿測 AngⅡ、ALD含量。剝離殘腎 ,10%的甲醛溶液固定,石蠟包埋,病理切片。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 使用 SPSS12.0for windows統(tǒng)計軟件,所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差±s表示,采用單因素方差分析法對實驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

    2 結(jié)果與分析 2.1 一般狀況 從造模到分組開始時,共死亡大鼠 9只,其中第Ⅰ期手術(shù)后死亡 4只,第Ⅱ期手術(shù)后死亡 5只。從給藥開始到實驗結(jié)束,B組死亡 3只,存活 8只;C組死亡 2只,存活 9只;D組死亡 3只,存活 8只;E組死亡 3只,存活 8只;F組死亡 2只,存活 9只。 A組全部存活,精神狀況、反應(yīng)性、活動度良好,皮毛光澤、進(jìn)食及二便正常,體重增加明顯;B組精神萎靡,活動遲緩,攝食減少 ,皮毛蓬松無光澤 ,明顯消瘦、體重下降 ,耳廓、尾巴蒼白,小便量少、大便稀溏;各治療組大鼠精神均較好,較活潑,攝食一般,耳廓、尾巴較紅潤,皮毛較有光澤,大便尚成形,小便量輕度增多,以 F組一般狀況的改善最佳。

    2.2 治療前后大鼠體重變化 見表 1。

    表1 治療前后各組大鼠體重變化比較(±s)

    表1 治療前后各組大鼠體重變化比較(±s)

    注:△表示與 A組比較 P<0.01▲表示與 B組比較 P<0.01◇表示與 C組比較 P<0.01□表示與 D組比較 P<0.01■表示與 E組比較 P<0.01◆表示與 F組比較 P<0.01。表 2相同

    組 別n(只) 5周末體重(g) n(只 ) 治療后體重(g)A(空白 ) 8 258.70± 5.96 8 322.32± 9.35 B(病模 )11 215.63± 9.32△ 8 199.94± 8.45△C(灌胃 ) 11 218.54± 10.08△ 9 223.67± 9.53△▲◆D(灌腸 )11 220.61± 7.01△ 8 225.21± 9.47△▲◆E(針刺 ) 11 220.22± 6.03△ 8 214.20± 8.92△▲◆F(綜合 ) 11 215.76± 5.05△ 9 247.16± 9.91△▲◇□■

    2.3 治療后各組大鼠腎功、血紅蛋白(Hb)含量 見表 2。

    表2 治療結(jié)束后各組大鼠腎功、血紅蛋白值比較(±s)

    表2 治療結(jié)束后各組大鼠腎功、血紅蛋白值比較(±s)

    組 別 n BUN(mmol/L) Scr(μmol/L) Hb(g/L)A(空白 )8 4.76± 0.89 73.50± 17.25 147.98± 8.18 B(病模 )8 14.71±1.18△ 150.11± 8.86△ 46.42± 9.94△C(灌胃 )9 9.11± 1.33△▲◆□ 129.93± 7.10△▲◆ 69.65± 10.21△▲◆D(灌腸 )8 8.00±0.77△▲◆ 131.26± 6.44△▲◆◇ 58.42± 7.76△▲◇◆E(針刺 )8 12.52±1.45△▲◆□ 140.50± 5.40△▲◆□ 55.51± 4.70△▲◇◆F(綜合 )9 6.79±0.95△▲◇ 112.85±5.48△▲ 88.44±8.11△▲

    2.4 治療后各組大鼠血漿血管緊張素Ⅱ (AngⅡ )、醛固酮(ALD)含量 見表 3。

    表3 治療結(jié)束后檢測各組大鼠血漿AngⅡ、ALD值比較(±s)

    表3 治療結(jié)束后檢測各組大鼠血漿AngⅡ、ALD值比較(±s)

    注:△表示與 A組比較 P<0.01◇表示與 F組比較 P<0.05▲表示與 B組比較 P<0.01或 P<0.05

    組 別 n(只 ) AngⅡ (pg/mL) ALD(ng/mL)A(空白 ) 8 174± 24.60 0.27± 0.06 B(病模 ) 8 616± 90.80△ 0.40± 0.11△C(灌胃 ) 9 489± 58.50△▲◇ 0.33± 0.06▲D(灌腸 ) 8 514± 85.50△▲◇ 0.38± 0.09△◇E(針刺 ) 8 550± 75.70△◇ 0.38± 0.09△◇F(綜合 ) 9 401± 50.66△▲ 0.30± 0.07▲

    2.5 腎臟病理學(xué)觀察 A組腎臟外觀及光鏡下腎小球、腎小管及腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常。 B組殘腎體積明顯增大,混濁無光澤,表面凹凸不平,呈結(jié)節(jié)狀,質(zhì)地堅硬。光鏡下腎小球系膜區(qū)明顯增寬,系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增多,毛細(xì)血管變窄,腎小囊輕度增厚,部分腎小管上皮細(xì)胞腫脹、變性,管腔變小 ,腎小管腔內(nèi)可見蛋白管型,腎間質(zhì)有局灶性纖維組織增生,有大量散在炎癥細(xì)胞浸潤。 C組殘腎體積增大,顏色黯淡,質(zhì)地較硬,與 B組比較程度較輕。部分腎小球系膜區(qū)輕度增寬,系膜細(xì)胞及系膜基質(zhì)增多,部分腎小球毛細(xì)血管變窄,可見部分腎小管腔內(nèi)有蛋白管型,腎小管上皮細(xì)胞變性,部分腎間質(zhì)纖維組織增生及少量散在炎癥細(xì)胞浸潤。D、E、F組外觀及光鏡下大體上同 C組。惟 F組個別腎小球系膜區(qū)輕度增寬,個別腎小球毛細(xì)血管變窄,腎小管腔內(nèi)可見少量蛋白管型,部分腎間質(zhì)輕度纖維化,偶見少量炎癥細(xì)胞浸潤。

    3 討 論 3.1 排毒雙調(diào)綜合療法的提出 CRF是慢性腎臟疾病發(fā)展到晚期,臟腑衰敗、正氣虛竭,水飲、濕熱、瘀血等濁毒蓄積體內(nèi)的疑難重癥。臨床實踐認(rèn)為其病理特點是本虛標(biāo)實,本虛以氣血陰陽虧損、臟腑功能虛衰為主;標(biāo)實以水濕、瘀濁等毒邪為患。由于病情復(fù)雜,任何單一療法都難以奏效。針對 CRF的病機特點,以提高臨床療效為目的,我們提出“排毒雙調(diào)綜合療法”治療 CRF的思路?!芭哦尽敝竿ㄟ^汗液、二便等多種途徑祛除體內(nèi)蓄積之水濕、瘀濁等毒邪;“雙調(diào)”是調(diào)補氣血陰陽之虛衰,調(diào)理臟腑功能之紊亂。“排毒雙調(diào)綜合療法”,即綜合應(yīng)用內(nèi)服、外敷、灌腸、針灸等多種治療措施,從不同途徑排出蓄積于體內(nèi)的毒邪,調(diào)補氣血陰陽,調(diào)理臟腑功能,充分發(fā)揮各種療法的優(yōu)勢,最大限度地提高臨床療效。

    3.2 排毒雙調(diào)綜合療法治療 CRF的療效分析 本課題以往臨床研究證實,該療法對 CRF患者具有改善臨床癥狀 ,保護(hù)殘余腎功能,延緩腎衰進(jìn)展的功效[1]。實驗研究亦證實,該療法能明顯抑制 TNF-α、TGF-β在腎組織中的過度表達(dá),能有效改善細(xì)胞凋亡的調(diào)控;調(diào)整腎組織內(nèi) SOD、MDA及 ET的活性,升高腎組織 PA蛋白的表達(dá),降低腎組織 PAI蛋白的表達(dá),有效維持纖溶系統(tǒng)平衡狀態(tài),減輕 CRF腎組織纖維化程度 ,延緩 CRF病程進(jìn)展,并較單一療法為佳[4~7]。

    本實驗結(jié)果顯示,單純中藥湯劑灌胃、灌腸、針刺及綜合療法對 CRF都有一定的治療效果。在改善模型大鼠的一般狀況,阻抑體重下降,升高 Hb、糾正貧血,降低血 BUN、Scr、改善腎功,延緩 CRF大鼠腎臟病理改變等方面 ,綜合療法明顯優(yōu)于單一療法。

    3.3 排毒雙調(diào)綜合療法對 5/6腎切除 CRF模型大鼠血漿 AngⅡ、ALD的影響 腎小球硬化 (GS)、腎小管及間質(zhì)纖維化是 CRF的主要病理變化。血漿中 AngⅡ和 ALD在該過程中具有重要意義。顧氏檢測 36例腎間質(zhì)纖維化患者血漿中的AngⅡ和 ALD,顯示患者血漿中的 AngⅡ和 ALD含量均升高,且呈正相關(guān)關(guān)系[8]。AngⅡ不僅是一種血管活性因子,影響腎臟血流動力學(xué),而且還是一種生長因子和促纖維化因子,影響腎臟固有細(xì)胞的生物學(xué)功能,促進(jìn)其纖維化形成。 AngⅡ在慢性腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用,它直接通過影響血流動力學(xué)和間接影響細(xì)胞生長因子的作用,最終導(dǎo)致 GS,腎小管萎縮及腎間質(zhì)纖維化直至腎功能衰竭。

    ALD是體內(nèi)的鹽皮質(zhì)激素,主要參與電介質(zhì)和水液代謝,AngⅡ與之關(guān)系密切。 AngⅡ通過促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)球狀帶細(xì)胞合成和分泌 ALD,從而增加鈉、水重吸收,使血容量和血壓增高。近年研究證明 ALD還作為獨立的因素參與了腎、心、肝、肺等器官組織的纖維化。研究發(fā)現(xiàn),多種腎衰竭動物模型和臨床 CRF患者均存在高醛固酮血癥[8,9]。ALD是有絲分裂和膠原合成的強烈刺激物,可以促進(jìn)腎臟纖維化[10]。ALD也是慢性腎臟疾病進(jìn)展中的一個獨立致病因素,它可通過血壓和直接的細(xì)胞作用造成腎損傷,ALD受體拮抗劑能夠有效的降低血壓,減少蛋白尿,延緩腎臟疾病進(jìn)展,與 ACEI共同保護(hù)殘腎功能[11]。

    本實驗結(jié)果顯示:模型大鼠血漿 AngⅡ和 ALD含量顯著升高,與文獻(xiàn)報道相吻合[8,9];經(jīng)各種中醫(yī)措施治療四周后,各組大鼠血漿 AngⅡ、ALD含量均有不同程度降低,綜合療法組降低幅度最大;結(jié)合殘腎病理觀察,確實起到了延緩模型大鼠GS和腎間質(zhì)纖維化的作用。綜合療法對模型大鼠起到較明顯的治療效果,發(fā)揮了保護(hù)腎功能,延緩病理進(jìn)展的作用。其作用機制可能與降低血漿 AngⅡ和 ALD水平,影響腎臟血流動力學(xué),減少水鈉潴留,拮抗腎小球硬化和腎間質(zhì)纖維化而延緩腎損害的進(jìn)展有關(guān)。

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