甜菜夜蛾核型多角體病毒的致病力測定與群養(yǎng)對病毒產(chǎn)量的影響

徐樹蘭，李輝，陳其津

（1.中山大學生命科學學院，廣州，510275；2.廣州市生物防治站）

甜菜夜蛾核型多角體病毒的致病力測定與群養(yǎng)對病毒產(chǎn)量的影響

徐樹蘭2，李輝2，陳其津1

（1.中山大學生命科學學院，廣州，510275；2.廣州市生物防治站）

以3齡中甜菜夜蛾幼蟲為試蟲，測定出甜菜夜蛾核型多角體病毒的半致死濃度（LC50）為1.66×105PIB/mL，計算出 1×108PIB/mL、1×107PIB/mL、1×106PIB/mL 3 種濃度的半致死時間（LT50）分別為 3.95 d，4.47 d，5.35 d；研究了甜菜夜蛾群養(yǎng)條件對病毒產(chǎn)量的影響，確定出感染濃度為1×108PIB/mL、感染齡期為5齡初幼蟲、飼養(yǎng)密度為30頭/dm2時獲得的病毒產(chǎn)量最高。

甜菜夜蛾核型多角體病毒；生物測定；幼蟲密度；病毒產(chǎn)量

甜菜夜蛾核型多角體病毒 （Spodoptera exigua Nuc1eopo1yhedrovirus，SeNPV）是一種能有效防治甜菜夜蛾的病原微生物。自20世紀60年代以來，國內外學者在病毒的分離鑒定、致病力測定、致病機理、分子生物學、病毒制劑的研究以及田間應用等方面做了許多工作[1～4]。但對工廠化生產(chǎn)病毒的方法還不是很清楚，因此，本試驗利用美國的分離毒株對甜菜夜蛾日本品系的致病力進行了測定，并對甜菜夜蛾群體飼養(yǎng)與病毒產(chǎn)量的關系進行了研究，以期為大規(guī)模飼養(yǎng)甜菜夜蛾、生產(chǎn)病毒提供參考?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 供試幼蟲與病毒株

甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）幼蟲日本品系由中山大學昆蟲學研究所養(yǎng)蟲室提供，為人工飼料飼養(yǎng)的健康幼蟲。

甜菜夜蛾核型多角體病毒毒株由美國Federici教授惠贈，中山大學昆蟲學研究所龐義教授提供。

1.2 感染方法

用PBS緩沖液將病毒原液稀釋成6個濃度：1.0×108PIB/mL、1.0×107PIB/mL、1.0×106PIB/mL、1.0×105PIB/mL、1.0×104PIB/mL、1.0×103PIB/mL。均勻切取一定大小的飼料（使幼蟲1 d內吃完），放入直徑3 cm、高5 cm的塑料小管中，用微量加樣器吸取10 L病毒液，均勻滴加于飼料表面，將健康的3齡中幼蟲放入其中，每管1頭，移入溫度為（27±1）℃，相對濕度70%，光暗比為12 h∶12 h的光照培養(yǎng)箱內飼養(yǎng)。

群養(yǎng)增殖時，先把3齡中健康幼蟲接入直徑為13 cm，高2.5 cm的塑料小圓盒中喂食涂過毒的飼料，飼養(yǎng)條件同單頭飼養(yǎng)的條件。

1.3 管理和記錄

單頭飼養(yǎng)時，幼蟲取食完感染病毒的飼料后，加入正常飼料繼續(xù)飼養(yǎng)，每天更換飼料，逐日檢查活蟲數(shù)和病毒感染死亡蟲數(shù)。用定量蒸餾水清洗和收集當日死蟲，4℃保存，留待多角體計數(shù)，于感染后第10天結束。每處理30頭，重復3次，以健康幼蟲作對照。

群養(yǎng)增殖時，感染24 h后，轉入大塑料方盒（40 cm×25 cm×10 cm）內進行飼養(yǎng)，同時更換無毒飼料。每天觀察清理，更換新鮮飼料，回收病死蟲體，10 d內全部結束。

1.4 感染齡期對群養(yǎng)病毒增殖量的影響

用濃度為1.0×108PIB/mL的病毒液分別感染3齡中、4齡中和5齡初幼蟲，感染24 h后，按照30頭/dm2的飼養(yǎng)密度，轉入大塑料方盒中飼養(yǎng)。10 d后，測定幼蟲的病毒感染死亡率、平均單頭幼蟲病毒含量、1 g蟲尸病毒含量和病毒總產(chǎn)量。

1.5 幼蟲飼養(yǎng)密度對病毒增殖量的影響

用40 cm×25 cm×10 cm的大塑料方盒，分別按15，20，25，30，35，40，45 頭/dm2的密度飼養(yǎng) 5 齡初染毒的幼蟲，每日分多次收取即將死亡的幼蟲，記錄所收幼蟲頭數(shù)，并稱質量，以測定病毒感染死亡率、總蟲尸質量、平均單頭幼蟲病毒含量和病毒總含量；同時從每次收取的蟲尸中隨機抽取10頭，分別稱質量并測算多角體含量，計算1 g蟲尸病毒含量。

1.6 多角體計數(shù)及生物測定數(shù)據(jù)處理

分別將各處理每日收集的病死蟲液勻漿、稀釋，用血球計數(shù)板計數(shù)。每樣品重復3次。

用常規(guī)生物統(tǒng)計方法求出各組的死亡率或校正死亡率。用計算機軟件求出LC50，LT50及其95%置信限[3]。

2 結果與分析

2.1 SeNPV對甜菜夜蛾的致病力測定結果

利用甜菜夜蛾核型多角體病毒對3齡中甜菜夜蛾的LC50及LT50進行測定，結果見表1。從表1結果可明顯看出，隨著感染濃度的增高，LT50就縮短， 當濃度為 1×106PIB/mL時，LT50是 5.348 d；而當感染濃度高達1×108PIB/mL時，LT50為3.951 d。

2.2 感染齡期對SeNPV增殖量的影響

從表2可知，用1×108PIB/mL濃度感染5齡初甜菜夜蛾，其感染率盡管比感染3齡中、4齡中幼蟲的低，但是平均單頭多角體病毒產(chǎn)量和多角體總產(chǎn)量都顯著高于3齡中和4齡中幼蟲感染的產(chǎn)量。因此，以高濃度感染高齡幼蟲所獲得的高病毒產(chǎn)量的方法，能克服甜菜夜蛾幼蟲個體較小，病毒增殖相對困難的問題。

2.3 飼養(yǎng)密度對SeNPV增殖量的影響

從表3可知，不同的飼養(yǎng)密度對SeNPV增殖有著較大的影響。當飼養(yǎng)密度為15~30頭/dm2時，隨著飼養(yǎng)密度的增高，SeNPV的增殖量不斷增高。但密度超過30頭/dm2后，蟲尸回收率降低，病毒總產(chǎn)量也下降。因此，以飼養(yǎng)密度30頭/dm2的增殖效果最佳。

表1 SeNPV對3齡甜菜夜蛾的半致死濃度和時間測定

表2 感染齡期對SeNPV增殖量的影響

表3 飼養(yǎng)密度對SeNPV增殖量的影響

3 小結與討論

本研究利用美國的分離毒株對日本的甜菜夜蛾品系進行生物測定，LC50測定結果為 1.66×105PIB/mL，與張俊杰等[5]報道的中國分離毒株的致病力相近。但在田間使用是否達到這一效果，有待進一步的研究。致病力測定一般采用2～3齡蟲，供試幼蟲的蟲齡要一致，幼蟲太小易傷亡，太大敏感性差。所以本試驗采用3齡中的幼蟲，若采用2齡中或3齡初的幼蟲，其感染死亡率會更高。

影響群體飼養(yǎng)甜菜夜蛾增殖病毒產(chǎn)量的因子很多，本文僅選擇了感染齡期和飼養(yǎng)密度兩方面內容進行研究，目的是為了工廠化生產(chǎn)提供可行的試驗數(shù)字和技術，其他影響病毒產(chǎn)量的有關因子我們正在研究中。

[1]陳其津，李廣宏，龐義，等.甜菜夜蛾核型多角體病毒殺蟲劑研究進展[J].中國病毒學，2000（15）：234-235.

[2]李廣宏，陳其津，龐義.甜菜夜蛾核多角體病毒的研究與應用進展[J].中國生物防治，1999，15（4）：178-182.

[3]陳其津，李廣宏，林楊帆.殺蟲劑毒力測定數(shù)據(jù)的快速運算與分析[J].中山大學學報論叢，2001，21（3）：39-43.

[4]Smith P H,V1ak J M.Quantitative and qua1itative aspects in the production of a nuc1ear po1yhedrosis virus inSpodoptera exiguaLarvae[J].Ann App1 Bio1,1988,112(2):249-259.

[4]張彬，劉懷，王進軍，等.甜菜夜蛾研究進展[J].中國農學通報，2008，24（10）：427-433.

[5]張俊杰，李茂儉，未榮杰，等.甜菜夜蛾核型多角體病毒中國分離株的分離鑒定及毒力測定 [J].中國病毒學，2001，16（4）：361-362.

Bioassay ofSpodoptera exiguaNuclear Polydedrosis Virus and Effect of Different Larvae Density on SeNPV Yield

XU Shu1an2,LI Hui2,CHEN Qijin1
(1.Co11ege of Life Sciences,Sun Yat-sen University,Guangzhou 510275;2.Bio1ogica1 Contro1 Station of Guangzhou)

Bioassay method was used to study the pathogenicity ofSpodoptera exiguanuc1ear po1ydedrosis virus(SeNPV)to the midd1e 3th-instar 1arvae ofS.exigua.The resu1ts demonstrated thatLC50of SeNPV toS.exiguawas 1.66×105PIB/mL.The resu1ts a1so showedLT50was 3.95 days,4.47 days and 5.35 days when the concentrations of 1×108PIB/mL,1×107PIB/mL,1×106PIB/mL were used respective1y.Furthermore,the effect of 1arva1 stadium and 1arva1 popu1ation density on mu1tip1ication was a1so studied.It is showed that greatest production of SeNPV cou1d be obtained when the ear1y 5th-instar 1arvae are infected by concentration of 1×108PIB/mL and reared with the density of 30 1arvae per square decimeter.

Spodoptera exiguanuc1ear po1ydedrosis virus;Bioassay;Larvae density;SeNPV yie1d

10.3865/j.issn.1001-3547.2010.18.004

公益性行業(yè)（農業(yè)）科研專項項目（200803007），廣州市科技計劃項目（2007Z3-E0581）

徐樹蘭（1981-），女，碩士，主要從事微生物殺蟲劑的研究

陳其津，通信作者，電話：13610044229，E-mai1： 1sscqj@mai1.sysu.edu.cn

2010-06-22