曲馬多對(duì)異丙腎上腺素所致小鼠心肌缺血損傷的抑制作用

呂建英

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院麻醉科 內(nèi)蒙古通遼 028000)

曲馬多是較新型中樞鎮(zhèn)痛藥，現(xiàn)臨床廣泛應(yīng)用。研究表明，用于胸痛的緩解率可高達(dá)92%[1]，在治療心肌梗死和不穩(wěn)定心絞痛方面已取得成效。有關(guān)曲馬多對(duì)心肌保護(hù)作用的報(bào)道不多，本文旨在探討曲馬多對(duì)心肌缺血損傷的拮抗作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物。清潔級(jí)，雄性昆明種小鼠，體質(zhì)量(20±2)g，由北京中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供(許可證號(hào):SCKX(京)2004－0001)。常規(guī)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.1.2 藥品與試劑。鹽酸異丙腎上腺素(isoproterenol，Iso):上海禾豐制藥廠(批號(hào):080801);曲馬多(Tramadol，TRD):廣州貝氏藥業(yè)有限公司(批號(hào):20080509);普萘洛爾(propranolol，Pro)注射液:上海禾豐制藥廠(批號(hào):080606);肌酸激酶(creatine kinase，CK)測(cè)定試劑盒(批號(hào):20100111)、乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)測(cè)定試劑盒(批號(hào):20100111)，購(gòu)自南京建成生物工程研究所;其它試劑均為市售分析純。

1.1.3 儀器。低溫離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠，型號(hào):TDL－5－A);心電圖機(jī)(上海醫(yī)用電子儀器廠，批號(hào):ECG－6511);數(shù)顯恒溫水浴鍋(國(guó)華電器有限公司，型號(hào):HH－6);Bio－Rad3550型自動(dòng)酶聯(lián)免疫測(cè)定儀(美國(guó) Bio－Rad公司);MP200A型電子天平(上海第二天平儀器廠)等。

1.2 方法

1.2.1 異丙腎上腺素致小鼠心肌缺血后小鼠常壓耐缺氧試驗(yàn)(耐缺氧實(shí)驗(yàn))[2]。小鼠60只，隨機(jī)分為6組:①正常對(duì)照組:NS+NS;②模型組:生理鹽水(NS)+Iso;③陽(yáng)性對(duì)照組:Pro30mg/kg+Iso20mg/kg;④TRD 低劑量組:TRD2.5mg/kg+Iso20mg/kg;⑤TRD中劑量組:TRD5mg/kg+Iso20mg/kg;⑥TRD高劑量組:TRD10mg/kg+Iso20mg/kg。小鼠禁食12h后，Pro與TRD各組均腹腔注射預(yù)防給藥，給藥容積為0.2mL/10g。各組給藥30min后，小鼠背部皮下多點(diǎn)注射Iso20mg/kg(正常對(duì)照組皮下注射等容積NS)造模。15min后將小鼠放入容積為250mL的密閉廣口瓶中，瓶蓋周圍涂以凡士林，以保證密封，瓶?jī)?nèi)放有25g鈉石灰，以呼吸停止為指標(biāo)，觀察并記錄小鼠存活時(shí)間。

1.2.2 異丙腎上腺素致小鼠心肌缺血模型[3]。小鼠分組同上。各組小鼠分別按照給藥劑量腹腔注射預(yù)防給藥(同上)，給藥容積為0.2mL/10g。30min后，除正常對(duì)照組外，各組小鼠皮下注射Iso20mg/kg(正常對(duì)照組皮下注射等容積NS)，連續(xù)3d。末次給藥后2h，小鼠摘眼球采血，分離血清待測(cè)心肌酶。

1.2.3 心臟重量指數(shù)測(cè)定。小鼠取血后迅速開(kāi)胸取出心臟(除去大血管、結(jié)締組織，用濾紙吸干表面血液后稱重)，并計(jì)算心重指數(shù)=心臟重量(mg)/體質(zhì)量(g)。

1.2.4 血清酶學(xué)測(cè)定。各組小鼠血清用酶標(biāo)儀測(cè)定LDH和CK吸光度值，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

2 結(jié)果

2.1 曲馬多對(duì)心肌缺血小鼠常壓缺氧存活時(shí)間的影響 小鼠心肌缺血后，在缺氧情況下小鼠生存時(shí)間以模型組最短，與正常對(duì)照組比較，具有顯著性差異(P＜0.01)。與模型組比較，Pro組及TRD不同劑量組小鼠存活時(shí)間均延長(zhǎng)，其中TRD中劑量組最明顯，差異具有顯著性(P＜0.01)，見(jiàn)表1。

2.2 曲馬多對(duì)小鼠血清LDH及CK活性的影響 模型組血清LDH、CK活性均明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01);與模型組比較，Pro組及TRD各劑量組LDH及CK活性均有降低，以TRD中劑量組和高劑量組作用明顯，差異有顯著性(P＜0.05，P＜0.01)，見(jiàn)表2。

2.3 曲馬多對(duì)小鼠心臟重量指數(shù)的影響 模型組及各用藥組心臟重量指數(shù)均較正常對(duì)照組高，其中模型組最高，與正常對(duì)照組比較差異有顯著性(P＜0.01)。給藥組，心臟指數(shù)都有下降趨勢(shì)，尤其曲馬多中劑量組心重指數(shù)更低，與Pro組相近，見(jiàn)表3。

表1 TRD對(duì)ISo致小鼠心肌缺血后常壓缺氧生存時(shí)間的影響(±s，n=10)

表1 TRD對(duì)ISo致小鼠心肌缺血后常壓缺氧生存時(shí)間的影響(±s，n=10)

注:與正常對(duì)照組比較:＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＜0.05，△△ P＜0.01

組別 小鼠存活時(shí)間(min)正常對(duì)照組38.6 ±4.2模型對(duì)照組 21.1 ±3.6＊＊Pro對(duì)照組 29.8 ±3.7△TRD 高劑量組 28.3 ±3.2△TRD 中劑量組 32.4 ±4.1△△TRD低劑量組26.9 ±3.8

表2 TRD對(duì)ISo致心肌缺血小鼠血清LDH、CK的影響(±s)

表2 TRD對(duì)ISo致心肌缺血小鼠血清LDH、CK的影響(±s)

注:與正常對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，△P＜0.05，△△ P＜0.01

組別 LDH(U/L) CK(U/ml)正常對(duì)照組1011.6 ±272.8 333.8 ±90.7模型對(duì)照組 1742.8±246.7＊＊ 657.2±142.8＊＊Pro對(duì)照組 1420.5±123.2△ 472.8±101.5△△TRD 高劑量組 1243.4±172.7△△ 502.5±111.3△TRD 中劑量組 1269.8±248.4△△ 421.6±90.2△△TRD 低劑量組 1401.1 ±207.8△525.1 ±105.6

表3 曲馬多對(duì)ISo致小鼠心肌損傷心臟重量指數(shù)的影響(±s)

表3 曲馬多對(duì)ISo致小鼠心肌損傷心臟重量指數(shù)的影響(±s)

注:與正常對(duì)照組比較，＊＊P＜0.01;與模型組比較，△P＜0.05，△△ P＜0.01

組別 心重指數(shù)(mg/g)正常對(duì)照組4.56 ±0.41模型對(duì)照組 5.68 ±0.50＊＊Pro對(duì)照組 5.01 ±0.32△△TRD 高劑量組 5.09 ±0.35△TRD 中劑量組 4.95 ±0.39△△TRD低劑量組5.13 ±0.49

3 討論

研究證實(shí)，皮下注射大劑量Iso可造成大鼠心肌梗死樣損害的模型，小鼠常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)是篩選抗心肌缺血藥的方法之一。異丙腎上腺素作用于心臟β受體，通過(guò)加快心率，增強(qiáng)心肌收縮力，使心肌耗氧量顯著增加，從而引起心肌耗氧量增加性缺血[4]。小鼠在常壓缺氧狀態(tài)下存活時(shí)間可反映機(jī)體對(duì)周圍環(huán)境缺氧的耐受能力，小鼠注射異丙腎上腺素后在常壓缺氧狀態(tài)下會(huì)明顯增加心肌耗氧量，造成心肌缺氧，縮短小鼠生存時(shí)間[5]。本實(shí)驗(yàn)采用小鼠頸背部皮下注射異丙腎上腺素制備心肌缺血、增加心臟耗氧及常壓缺氧模型，觀察TRD對(duì)缺血缺氧心肌的保護(hù)作用，結(jié)果表明，TRD能明顯延長(zhǎng)其生存時(shí)間，增強(qiáng)整體動(dòng)物在缺氧條件下的生存能力，說(shuō)明TRD能改善缺血心肌氧的供求矛盾，對(duì)心肌缺血有保護(hù)作用。CK和LDH的活力是評(píng)價(jià)心肌細(xì)胞損害程度的重要指標(biāo)[6]，CK和LDH在心肌組織含量較高且分布均勻，當(dāng)心肌細(xì)胞受到破壞時(shí)，胞漿中的LDH大量溢出。心肌缺血或心肌受損時(shí)，缺血心肌的CK和LDH的釋放量增加，導(dǎo)致血清CK和LDH含量增加。觀察CK和LDH的活力，有助于評(píng)價(jià)保護(hù)心肌藥物的療效。實(shí)驗(yàn)表明，模型組小鼠血清中CK、LDH活性比正常對(duì)照組明顯增加，說(shuō)明Iso對(duì)心肌細(xì)胞的損害導(dǎo)致血清CK、LDH活性增強(qiáng)，陽(yáng)性對(duì)照組Pro對(duì)缺血心肌具有保護(hù)作用，能明顯降低缺血心肌小鼠血清中CK、LDH的活性。TRD中、高劑量組的小鼠血清CK、LDH的活性明顯降低。

曲馬多作為一種中樞性鎮(zhèn)痛藥在臨床得到廣泛應(yīng)用[7]。并有大量關(guān)于曲馬多在鎮(zhèn)痛方面的研究與報(bào)道 。在急性心肌梗死發(fā)作時(shí)，靜脈注射曲馬多可以使疼痛明顯緩解。然而，除鎮(zhèn)痛作用外，關(guān)于曲馬多對(duì)梗死心肌的保護(hù)作用目前報(bào)道不多。心肌梗死的病理生理變化過(guò)程非常復(fù)雜，曲馬多保護(hù)心肌作用的觀點(diǎn)不同，部分認(rèn)為緩解疼痛可降低心肌耗氧量;部分認(rèn)為曲馬多降低交感活性及神經(jīng)體液因素也起重要作用。曲馬多一方面通過(guò)作用于中樞，切斷了連鎖反應(yīng)通路，減少炎性介質(zhì)釋放，而減弱了心肌的損傷;另一方面可能通過(guò)抗傷害作用(鎮(zhèn)痛作用)抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)，減少兒茶酚胺釋放，從而降低心率，減輕心臟負(fù)荷，減少心肌耗氧，從而對(duì)心肌產(chǎn)生了一定程度的保護(hù)作用[8]。對(duì)曲馬多所表現(xiàn)出來(lái)的心肌保護(hù)作用機(jī)制的研究還不十分完善，有待進(jìn)一步研究。

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