豬傳染性胸膜肺炎疫苗的研究與應(yīng)用

楊旭夫，朱必鳳，彭凌

（韶關(guān)學(xué)院，廣東韶關(guān) 512005）

一、病原學(xué)概述

豬傳染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放線桿菌感染引起的豬的一種呼吸道傳染病，又稱豬副溶血嗜血桿菌病和豬胸膜肺炎嗜血桿菌病。本病以急性的出血性滲出性肺炎、胸膜炎和慢性的纖維素性壞死性胸膜肺炎為病理特征。1957年P(guān)attison等首次報(bào)道本病，隨后Mattchews和Pattison于1961年，Olander于1963年相繼報(bào)道本病。最初將其病原菌命名為副溶血嗜血桿菌，后又將從豬體分離的副溶血嗜血桿菌更名為胸膜肺炎嗜血桿菌。1983年P(guān)hol等應(yīng)用DNA雜交技術(shù)，發(fā)現(xiàn)胸膜肺炎嗜血桿菌和1987年由瑞士學(xué)者Bertsschinger等從壞死性胸膜肺炎患豬分離的似溶血巴氏桿菌均與李氏放線桿菌關(guān)系密切，因此建議更名為胸膜肺炎放線桿菌，也就是現(xiàn)在使用的這個(gè)名稱。該種下設(shè)兩個(gè)生物型，生物Ⅰ型和生物Ⅱ型。生物Ⅰ型即依賴生長因子（NAD或Ⅴ因子）菌株（原來的胸膜肺炎嗜血桿菌），生物Ⅱ型即不依賴生長因子菌株。曾經(jīng)有學(xué)者建議將兩個(gè)生物型整合在一起，目前共分為15個(gè)血清型。

研究發(fā)現(xiàn)，各個(gè)國家或地區(qū)存在與流行的胸膜肺炎放線桿菌血清型不完全相同，各血清型菌株間免疫交叉保護(hù)性不強(qiáng)或無，因此調(diào)查本國或本地區(qū)存在的胸膜肺炎放線桿菌血清型對于免疫防制非常重要。較早前的調(diào)查我們國家存在多血清型感染，但以7型為主，4型次之，還分離到3、5和8型菌株。血清學(xué)檢查還發(fā)現(xiàn)9、10和11型抗體。

二、危害

豬傳染性胸膜肺炎是一種世界性疾病，廣泛存在于全世界所有養(yǎng)豬國家。也是國內(nèi)近二十年來比較多發(fā)、死亡率較高的呼吸道傳染病，已經(jīng)引起了養(yǎng)豬業(yè)的高度重視。其主要危害是，能引起急性感染豬大批死亡，慢性感染幸存豬在肺臟和胸膜產(chǎn)生不可逆的纖維素性壞死性胸膜肺炎病變，導(dǎo)致心與肺粘連及肺與胸壁粘連，嚴(yán)重影響豬的生長發(fā)育。一旦飼養(yǎng)條件及氣候發(fā)生突變，極易使慢性感染豬急性發(fā)作而死亡。豬只的爭斗也可使慢性帶病變感染豬突發(fā)呼吸困難，造成急死。慢性病例往往多激發(fā)A型多殺性巴氏桿菌感染。據(jù)統(tǒng)計(jì)，豬肺部的胸膜肺炎病變面積每增加1%，其90 kg上市期便延長1.2 d，多消耗飼料2.45 kg。因此說，傳染性胸膜肺炎所造成的經(jīng)濟(jì)損失，除了引起感染豬的急性死亡，還有飼養(yǎng)費(fèi)用的增加。本文作者曾對國內(nèi)豬呼吸道病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，某大型養(yǎng)豬場由于豬傳染性胸膜肺炎年死亡豬數(shù)達(dá)萬余頭，年用于添加飼料中的預(yù)防藥物費(fèi)用達(dá)200萬元以上。在國內(nèi)被調(diào)查豬場，剖檢病死育肥豬傳染性胸膜肺炎病變發(fā)生率在70.8%～100%，有42.58%激發(fā)A型多殺巴氏桿菌感染。

三、藥物防治

由于胸膜肺炎放線桿菌各地分離菌株對抗菌素的敏感性差異較大，同一地區(qū)不同時(shí)間分離菌株對抗菌素敏感性也不一致，長期用藥物預(yù)防很容易產(chǎn)生耐藥性。藥物治療，傳染性胸膜肺炎患豬出現(xiàn)臨床癥狀往往在胸腔已經(jīng)形成不可逆的病變，特別是纖維素性粘連和肺臟壞死病變，藥物治療不會(huì)使已經(jīng)產(chǎn)生的病變消失，因此對出現(xiàn)臨床癥狀豬進(jìn)行個(gè)體治療是沒有意義的。早期治療，有一定的效果，但是治療時(shí)機(jī)不好把握。只能是發(fā)現(xiàn)病例后，同群豬用敏感的抗菌素進(jìn)行預(yù)防性用藥，來減少臨床發(fā)病。最有效的辦法是進(jìn)行免疫預(yù)防。

四、免疫預(yù)防及疫苗研究

從目前的免疫研究結(jié)果看，免疫預(yù)防所使用的疫苗一定要有血清型的針對性，因此調(diào)查當(dāng)?shù)亓餍芯甑难逍蛯τ谘兄朴行У臏缁钜呙绶浅Ｖ匾，F(xiàn)在所使用最多的疫苗仍然是全菌體細(xì)胞滅活疫苗，存在的問題是，滅活疫苗雖然能夠抵御同型菌株的攻擊，但胸膜肺炎相關(guān)的肺臟病變發(fā)生率仍然很高，致使屠宰豬的肺臟廢棄率居高不下。

傳染性胸膜肺炎滅活疫苗對異型菌株攻擊或感染保護(hù)率不高或者無良好交叉保護(hù)作用，研制具有血清型菌株之間交叉保護(hù)作用強(qiáng)的免疫防制劑，是近些年來豬傳染性胸膜肺炎預(yù)防研究的熱點(diǎn)。已經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，采用ApxⅡ操縱子特異性點(diǎn)突變的胸膜肺炎放線桿菌菌株作為活疫苗，具有一定的交叉保護(hù)作用。用無莢膜的變異菌株做活疫苗免疫證明，1型和5型菌株間有交叉保護(hù)作用。德國學(xué)者于2006年報(bào)道，用刪除產(chǎn)生尿素酶ureC基因和毒素ApxⅡA基因的胸膜肺炎血清2型菌株，作為活疫苗免疫接種實(shí)驗(yàn)豬能夠保護(hù)同血清型菌株攻擊。2008年報(bào)道，在此基礎(chǔ)上又將有關(guān)厭氧呼吸3個(gè)酶的編碼基因和一個(gè)鐵吸收的基因刪除，使之成為缺失6個(gè)基因的活菌疫苗株，采用氣溶膠免疫可對同型和異型菌株攻擊均產(chǎn)生有效保護(hù)。英國皇家學(xué)院號稱已經(jīng)研究成功了豬傳染性胸膜肺炎活疫苗，生產(chǎn)容易，價(jià)格低廉，高效可使免疫接種豬終身得到免疫保護(hù)，完全可以抵御各種血清型感染。英國皇家學(xué)院正在尋求合作開發(fā)伙伴，但是關(guān)于對此產(chǎn)品的應(yīng)用評價(jià)未見詳細(xì)報(bào)道。

關(guān)于亞單位疫苗的研究，據(jù)報(bào)道用含滅活A(yù)pxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ毒素和一種外膜蛋白亞單位疫苗免疫實(shí)驗(yàn)，結(jié)果實(shí)驗(yàn)組與對照組在日增重和相關(guān)病變發(fā)生率上無明顯區(qū)別。而這種亞單位疫苗與全菌體滅活疫苗對比試驗(yàn)，亞單位苗達(dá)到100%保護(hù)，全菌體滅活疫苗保護(hù)率為71.4%；剖檢肺臟病變率分別為6.3%和17.8%。

近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，已經(jīng)對革蘭氏陰性菌進(jìn)行噬菌體裂解基因E和葡萄球菌核酸酶基因SN重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化，實(shí)現(xiàn)了遺傳學(xué)滅活，將細(xì)菌體內(nèi)容物通過形成的微孔道溢出，保留了細(xì)菌體的完整性，使細(xì)菌體表面結(jié)構(gòu)不發(fā)生任何改變，即所謂的“細(xì)菌幽靈（bacterial ghost）”。用這樣的“細(xì)菌幽靈”作為免疫制劑，有許多諸如安全、有效、穩(wěn)定、易于保存、不需要免疫佐劑和引起良好的黏膜免疫等優(yōu)點(diǎn)。國外有學(xué)者已經(jīng)將胸膜肺炎放線桿菌血清9型菌株制備成細(xì)菌幽靈疫苗，取得了良好的免疫保護(hù)作用。

雖然在豬傳染性胸膜肺炎免疫制劑上研究頗多，具有交叉保護(hù)作用的疫苗尚在研究階段，在市面上使用的大都是滅活疫苗，僅在疫苗菌株血清型上有些差異。在我國，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所科研人員，在國內(nèi)率先分離鑒定了胸膜肺炎放線桿菌，根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果，以當(dāng)時(shí)最為多發(fā)的血清7型為研究對象，研制成功了滅活疫苗。該苗免疫保護(hù)率達(dá)到96%以上，抗病變保護(hù)率達(dá)87.5%，于2000年通過國家農(nóng)業(yè)部組織的科技成果鑒定?，F(xiàn)在我國存在使用的商品化豬傳染性胸膜肺炎疫苗仍然是滅活疫苗，只不過是變成了雙價(jià)苗和三價(jià)苗而已。

五、科學(xué)使用疫苗

在使用疫苗免疫前，有條件的養(yǎng)豬單位應(yīng)對本場進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，了解存在的胸膜肺炎放線桿菌的血清型，如果清凈群要了解本地區(qū)豬傳染性胸膜肺炎的疫情及存在的血清型，選用血清型針對性強(qiáng)的疫苗，特別是滅活疫苗一定要有血清型針對性。其次是根據(jù)本場豬傳染性胸膜肺炎的發(fā)病特點(diǎn)，進(jìn)行免疫程序制定。如果新發(fā)病豬群，往往發(fā)病日齡提前，最好采用被主動(dòng)結(jié)合免疫。如果是多次發(fā)病或常發(fā)豬群，往往發(fā)病日齡偏后，可根據(jù)母源抗體的測定情況，確定免疫接種時(shí)間。根據(jù)筆者以前的實(shí)驗(yàn)，油佐劑滅活疫苗免疫可不用考慮母源抗體的干擾問題，在常發(fā)豬群，仍然可以進(jìn)行被主動(dòng)結(jié)合免疫程序。再次，注意疫苗的保質(zhì)期、疫苗的保藏與運(yùn)輸，嚴(yán)格按照生產(chǎn)廠家的要求去做。

總之，豬傳染性胸膜肺炎的免疫問題在世界范圍內(nèi)仍然沒有徹底解決，由于種豬的交流，有傳入新血清型的可能，做好引種檢疫是必要的。還要密切注意病原菌血清型的變化，進(jìn)行定期監(jiān)測，適時(shí)研制血清型針對性強(qiáng)的疫苗。同時(shí)也期待著免疫保護(hù)率高的，特別是抗病變保護(hù)率高能引起血清型間交叉保護(hù)的新型疫苗面世。提醒養(yǎng)豬單位，在疫苗免疫預(yù)防的同時(shí)，切記搞好環(huán)境衛(wèi)生，切斷疾病傳播途徑。一方面可以盡快控制豬傳染性胸膜肺炎的疫情，一方面還能避免豬傳染性胸膜肺炎與其它呼吸道病混合感染造成的較大經(jīng)濟(jì)損失。

（略）