微柱凝膠法在交叉配血試驗中弱陽性結(jié)果的分析

張寶艷

準確的交叉配血是臨床安全輸血的重要保證。以往的鹽水配血法只能檢測出血清中的完全抗體,微柱凝膠技術(shù)可檢測出血清中的不完全抗體,有標本用量少、靈敏度高、特異性強、操作簡便、結(jié)果可長期保存等優(yōu)點[1]。由于靈敏度高,因此在配血過程中常出現(xiàn)弱陽性結(jié)果,若不能快速作出準確的判斷,則會影響臨床輸血的及時性和安全性。我們將 2008年采用微柱凝膠技術(shù)配血過程中遇到的弱陽性結(jié)果的判定報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2008年 1月至 12月在本院需要輸血的住院或門診患者 6668例次,均為惡性腫瘤患者。

1.2 材料 血型不完全抗體檢測卡由長春博訊生物技術(shù)有限責任公司提供,孵育器、專用離心機由長春博研科學儀器有限責任公司提供,0.9%氯化鈉溶液由中國大塚制藥有限公司提供,低離子溶液由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供。

1.3 標本處理 血液標本常規(guī) EDTA抗凝血(抗凝劑與血液比例為 1∶9),血液加入試管后注意及時混勻。離心后與血細胞分離清楚,血漿高度≥1.5cm,不能溶血。

1.4 方法與原理 制備受、供者血漿和 0.5%～0.8%紅細胞懸液,標記配血卡。主側(cè)加入供血者紅細胞懸液和受血者血漿各 50μl,次側(cè)加入受血者紅細胞懸液和供血者血漿各 50μl,然后在 37℃孵育器中孵育 15m in,再使用專用離心機離心5min,900 r/min,2min,1500 r/min,3min,取出肉眼觀察結(jié)果。此方法是通過調(diào)節(jié)凝膠的濃度來控制凝膠間隙的大小,使其間隙只能允許游離的紅細胞通過,從而使游離的紅細胞和聚集的紅細胞分離。當抗原、抗體反應,抗人球蛋白試驗時,血細胞發(fā)生凝集、離心時,凝集塊不能通過凝膠間隙,而留在凝膠孔的上層,呈陽性反應,根據(jù)微柱上面的凝塊或顆粒的多少、散布的程度來判斷陽性的強弱,未凝集的血細胞離心時可通過凝膠間隙,而沉積在凝膠孔的底部,則呈陰性反應。

2 結(jié)果

在 6668例次微柱凝膠法配血結(jié)果中,纖維蛋白含量過高影響判定結(jié)果的 58例;冷凝集素影響交叉配血的 5例,這 5例中主、次側(cè)微柱均出現(xiàn)不同程度的弱凝集把這些卡放在 37℃孵育器孵育 15min后離心,凝集有不同程度的減弱。對這些病例測定冷凝集素效價均在 1∶512以上,從而證實這 5例交叉配血困難均由于冷凝集素的影響;自身凝集造成微柱次側(cè)弱凝集 54例,這些病例主側(cè)大多為陰性,而次側(cè)均呈現(xiàn)不同程度的弱凝集,凝集顆粒散布在微柱的中下部,而不是在微柱的頂端呈一線狀沉淀,不規(guī)則抗體篩查試驗均為陰性,自身對照均出現(xiàn)弱陽性,冷凝集素效價均在 1∶128以下;藥物影響判定結(jié)果的 4例,均為次側(cè)出現(xiàn)弱陽性;陳舊血標本影響判定結(jié)果 10例,均為次側(cè)出現(xiàn)弱陽性。

3 討論

纖維蛋白含量過高影響配血結(jié)果,是由于患者血液標本抗凝效果不佳,內(nèi)含不易察覺的纖維蛋白出現(xiàn)細胞凝塊,這種假凝集程度一般較弱,黏附一定量紅細胞的纖維蛋白大多聚集在微柱的最上層,但顏色較淡,而大部分紅細胞則沉積到微柱的底端,這種情況一般不難判斷[2]。因此為了防止血液凝固給試驗帶來不良影響,患者血液抽出后應立即注入抗凝管,并充分搖勻。

冷凝集素綜合征患者應盡量避免輸血,可輸可不輸者盡量不輸,必須輸時,可輸入同型的洗滌紅細胞,并在室溫放置復溫后再輸注,輸時應緩慢,在輸血過程中應密切注意觀察[3]。

自身凝集的患者一般是由于多次輸血的患者和腫瘤患者,54例均為腫瘤患者,其本身易產(chǎn)生高效價的冷凝集素,且紅細胞上 T、Tn類抗原易暴露,纖維蛋白易升高;反復多次輸血的患者由于輸注大量異體血液制品而產(chǎn)生紅細胞及白細胞抗體。這些抗體易吸附在患者的紅細胞上,故主要出現(xiàn)微柱次側(cè)的凝集。這類患者應盡量減少輸血,必須輸血時,可輸少量濃縮紅細胞或洗滌紅細胞。洗滌患者紅細胞后重新配血均呈陰性結(jié)果。

10例由陳舊血樣造成配血弱陽性的患者均重取血樣,重新配血后均呈陰性。一般陳舊血標本放入 4～10℃冰箱保存后,在體外致敏造成假陽性結(jié)果。筆者在工作中還發(fā)現(xiàn)快過期的配血卡也容易造成弱陽性結(jié)果,應注意辨別,亦應合理調(diào)配配血卡,以免造成配血困難。

1 舒象武.應用微柱凝膠抗球蛋白技術(shù)進行交叉配血.中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志,2003,13:116-118.

2 陳靜,馬濤.微柱疑膠技術(shù)篩選及鑒定不規(guī)則抗體的臨床應用.河北醫(yī)藥,2008,30:1233-1234.

3 王靜,沈立松,沈霞.冷凝集素綜合癥引起交叉配血困難 1例報告.臨床輸血與檢驗,2001,3:57.