慢瀉停丸質(zhì)量標準研究

張玉潔

慢瀉停丸質(zhì)量標準研究

張玉潔

目的 制訂慢瀉停丸質(zhì)量標準。方法 用TLC法對黃連、當(dāng)歸、五倍子、山茱萸進行了鑒別試驗，用HPLC法測定藥品中馬錢苷含量。結(jié)果 用TLC法檢出了黃連、當(dāng)歸、五倍子、山茱萸。回歸方程: Y=423 17.6090x -586.5188，r=0.9998(n=6)，平均回收率98.6%,RSD為1.49%。結(jié)論 所建立的方法簡便可行，靈敏、準確、專屬性強、重復(fù)性好，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

慢瀉停丸；黃連；沒食子酸；馬錢苷；TLC；HPLC

慢瀉停丸為我省醫(yī)院制劑注冊藥品，由石榴皮、黃連，黃柏、五倍子、山茱萸等13味中藥組成，具有澀腸止瀉，溫中行氣的功能。適用于體虛多汗、便溏泄瀉、久瀉脫肛等癥。為了有效地控制該制劑的藥品質(zhì)量，對處方中的黃連、當(dāng)歸、五倍子、山茱萸進行了TLC鑒別，對處方中的山茱萸中所含的馬錢苷進行了含量測定，以有效地控制藥品質(zhì)量。

1 儀器及材料

高效液相色譜儀(waters2695)、紫外檢測品(waters2996)、色譜柱(VP-ODS,150mm×4.6mm，5μm)、三用紫外分析儀(上海顧村儀器廠)硅膠G(青島海洋化工廠)、黃連(120913-200407)、當(dāng)歸(120927-200613)、沒食子酸(110831-200302)、熊果酸(110742-20051)，馬錢子苷(111640-200503)對照品及對照藥材均由中國藥品生物制品檢定所提供。慢瀉停丸(由我市醫(yī)院提供，批號20090612 20090725 20090804)。HPLC用甲醇(上海吳涇化學(xué)總廠)為色譜醇；水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 黃連薄層色譜鑒別

取本品粉未2g，加乙醚20ml，超聲處理10min，濾過，乙醚液備用，藥渣揮去乙醚，加甲醇30ml，超聲處理20min，濾過，濾液置水浴上蒸干。殘渣加甲醇10ml使溶解，作為供試品溶液；另取黃連對照藥材50mg，加甲醇5ml，超聲處理5min，取上清液作為對照藥材溶液；并同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版)［1］試驗，吸取上述3種溶液各10μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-水(6:3:1.5:1.5:0.3)為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內(nèi)，展開，取出，晾干。置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的黃色熒光斑點。陰性對照無此斑點。

2.2 當(dāng)歸薄層色譜鑒別

取(1)的乙醚溶液，揮去乙醚，殘渣加乙酸乙酯0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材同法制成對照藥材溶液；并同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述3種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正已烷-醋酸乙酯(9:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照無此斑點。

2.3 沒食子薄層色譜鑒別

取本品粉未5g，加甲醇30ml，超聲處理15min，濾過，濾液蒸干。殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取沒食子酸對照品，加甲醇每1mg/ml的溶液，作為對照品溶液；并同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版)試驗，吸取上述3種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠GF254薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸(5:5:1)為展開劑，展開，取出，晾干。置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照無此斑點。

2.4 山茱萸薄層色譜鑒別

取本品粉未5g，加乙醚30ml，超聲處理10min，濾過，濾液揮干。殘渣加石油醚(30～60℃)30ml，搖勻，浸泡2min，傾去石油醚，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作為對照品溶液；并同法制成陰性對照溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版)試驗，吸取上述3種溶液各50μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)已烷-氯仿-醋酸乙酯-甲酸(20:5:8:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃烘至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無此斑點。

3 含量測量

3.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相:乙腈：水(15:85)，檢測波長：240nm，流速：1.0ml/min，進樣量：l0μ1，柱溫：25℃。

3.2 對照品溶液的制備

精密稱取馬錢苷對照品適量，加甲醇制成馬錢苷溶液40g/ml。

3.3 供試品溶液的制備

取本品適量，研碎，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。

3.4 測定法

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，以上述色譜條件測定，根據(jù)馬錢苷峰面積值，計算供試品中馬錢苷的含量。

3.5 標準曲線的制備

取馬錢苷對照品約1mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取2、4、8、10、12、15μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以馬錢苷進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程為：Y=42316．6090x-586.4188，r=0.9998 (n=6)。

3.6 陰性溶液的制備及試驗

取缺山茱萸的陰性樣品1g，按供試品溶液制備方法同法制備，即得。取馬錢苷對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10L，分別注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。結(jié)果馬錢苷峰保留時間約為6min左右，陰性對照在相應(yīng)位置上無干擾峰，理論塔板數(shù)按馬錢苷峰計在3000以上。

3.7 精密度試驗

精密吸取馬錢苷照品溶液l0μl，注入液譜儀，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，結(jié)果RSD為0.85%。

3.8 重復(fù)性試驗

取樣品6份，按含量測定方法依法測定，結(jié)果RSD為1.20%，表明此方法重復(fù)性較好。

3.9 加樣回收試驗

精密稱取已知含量的樣品適量，共6份分別精密加入一定量的馬錢苷對照品，按上述色譜條件測定，計算回收率，得平均回收率為98.66%，RSD為1.22%

4 討論

4.1 本試驗用TLC法對藥品中的黃連、當(dāng)歸、五倍子、山茱萸進行了鑒別，其方法簡便、快速、重現(xiàn)性好。

4.2 馬錢苷為山茱萸的主要有效成分，具有明顯的抗炎、調(diào)節(jié)免疫的功能[2]，用HPLC法測定了山茱萸中馬錢苷的含量，經(jīng)方法學(xué)考察，本法靈敏度高，重理性好。

[1]中國藥典委員會.中國藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:174.

[2]趙武述,張玉琴,李潔,等.山茱萸成分的免疫活性研究[J].中草藥,1990,21(3):113-116.

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.19.110

473061 南陽市食品藥品檢驗所 (張玉潔)