高效液相法測定骨筋丸膠囊中血竭素的含量

彭 禹 李文春 賽春梅 劉文亮

（1、黑龍江中醫(yī)藥大學2007級在職碩士研究生課程班，黑龍江 哈爾濱，150040 2、哈藥集團中藥有限公司研發(fā)中心，黑龍江 哈爾濱150078）

骨筋丸膠囊收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》第十三冊[1]，由血竭、三七、秦艽、白芍、馬錢子、乳香、沒藥、獨活、牛膝等十四味藥組成，具活血化瘀，舒筋通絡，祛風止痛的功效。其中血竭為進口藥，并且價格昂貴為保證藥品質量，避免廠商少投或不投血竭，筆者建立了血竭的含量測定指標，該方法操作簡單，靈敏，結果準確可靠。

1 儀器與試藥

儀器：Waters515-2487高效液相色譜儀；色譜工作站：N2000（浙江大學）；TU-1901型 紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；KQ500B型超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）；對照品：血竭素高氯酸鹽110811-200203（中國藥品生物制品檢定所提供）；骨筋丸膠囊(哈藥集團三精制藥諾捷有限責任公司)；乙腈為色譜純，水為純化水；其他試劑為市售分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色 譜 柱：Hypersil BDS 5μm.4.6mm×150mm；流動相：乙腈-0.05 moloL-1磷酸二氫鈉溶液(40:60)，流速：1.0mL·min-1；檢測波長：440nm；柱溫：室溫;進樣量:10μL；理論板數(shù)：按血竭素高氯酸鹽峰計算應不低于2000。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品10.0 mg于100mL棕色量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度;搖勻，精密量取4 mL至10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，制成每1mL中含血竭素高氯酸鹽40.0μg，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備[2]

取內容物約1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加3%磷酸甲醇溶液50ml，稱重，超聲處理30分鐘，放置至室溫，加3%磷酸甲醇溶液補至原重，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 最大吸收波長的確定

血竭素高氯酸鹽（3%磷酸甲醇溶液）的紫外掃描圖譜顯示，其最大吸收峰位于440.1nm處，因此將檢測波長定為440nm。見圖1

按處方比例，制成不含血竭的陰性樣品，同法制成陰性樣品的供試品溶液。

2.6 干擾試驗

取對照品、供試品及缺血竭的陰性對照樣品，各進樣10μL測定。結果血竭素峰與其它組分峰分離度良好，缺血竭的樣品對測定無干擾，見圖。

2.7 線性關系考察

精密量取血竭素高氯酸鹽對照品溶液(濃度:0.080mgomL-1)，1、2、4、6、9mL于10mL量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液至刻度，搖勻。進樣10?L測定，記錄峰面積。以對照品的進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，回歸方程為：Y=2172953.706X+38020.767 γ=0.999 9(n=5)。結果表明血竭素高氯酸鹽在0.08~072?g范圍內，進樣量與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關系。

2.8 精密度試驗

精密吸取對照品溶液(濃度：40.0μg·mL-1)10μL，進樣測定峰面積，重復進樣5次，用峰面積計算均值與SD值，結果RSD=1.60%(n=5)，說明精密度符合含量測定要求。

2.9 重復性試驗

取供試品6份(批號：071001)，每份約1.5 g，精密稱定，照2.3項下方法制備供試液，進樣10?L測定含量，血竭素高氯酸鹽含量為0.768mgog-1，RSD為1.24%(n=6)，說明精密度符合含量測定要求。

2.10 穩(wěn)定性試驗

取同一份供試品(批號:071001)，分別于0、2、4、6、8、10 h進樣10?L測定峰面積，用峰面積計算均值與SD值，結果血竭素室溫條件下，棕色瓶中密閉保存10 h內穩(wěn)定，RSD=0.93%(n=6)。

2.11 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量 (批號:071001，0.768mgog-1)的樣品0.75 g，分別精密加入血竭素高氯酸鹽0.5mg，按2.3項下方法制備供試品溶液，進樣10μL測定，結果見表1

?

2.12 樣品的測定

取樣品照2.3項下方法制備供試液，進樣10μL測定，照外標法計算樣品中血竭素高氯酸鹽的含量，并按公式計算成血竭素的含量。血竭素重量＝血竭素高氯酸鹽重量/1.377。結果見表2

?

3 討論

3.1 骨筋丸膠囊臨床主要應用［3］風濕關節(jié)炎等的抗炎鎮(zhèn)痛及由各種原因引起的骨質增生、關節(jié)和神經(jīng)部位的疼痛。中醫(yī)學認為，與風寒濕邪、勞損、外傷有關，還與年老體衰、元氣不足密切相關，內外相合，致氣血痹阻，經(jīng)脈失養(yǎng)，久病入絡而引發(fā)。骨筋丸膠囊由血竭、三七、乳香、沒藥、制馬錢、延胡索、秦艽、紅花、獨活、牛膝等組成，有活血化瘀、舒筋通絡、祛風止痛的作用。骨筋丸以三七為君藥，對改善機體內環(huán)境，促進椎間的穩(wěn)定性有重要作用；以活血化瘀、行氣止痛的藥為臣佐藥；以牛膝引諸藥入絡為使藥。方中三七、延胡索、牛膝、血竭活血化瘀，改善血液循環(huán)障礙，馬錢、獨活、桂枝、秦艽祛風濕，溫經(jīng)，通絡止痛，消除神經(jīng)根水腫，從而解除神經(jīng)受壓刺激癥狀，達到臨床治愈或改善。該藥配伍恰當，使氣血旺行、脈絡通暢、行氣止痛，達到了標本同治，內外因兼顧。

3.2 血竭［4］為傳統(tǒng)中藥，味甘、咸；性溫、平；歸心、肝經(jīng)；具活血化瘀、消腫止痛、收斂止血，生肌斂瘡、補血之功效，常用于內外諸科及婦科的各種血癥。如：跌打損傷、瘀血、出血、癰疽潰瘍、瘡面久不愈合、胃腸炎癥、肢體麻木、閉經(jīng)痛經(jīng)、血瘀、瘀阻等病癥。血竭歷來是許多中醫(yī)古方和經(jīng)驗方的重要組成藥材，被喻為“和血之圣藥”（《本草綱目》），近代主要為來自印度尼西亞和馬來西亞產(chǎn)的蘇門達臘血竭。建立其貴細藥血竭的含量指標對保證臨床療效有重要意義。

3.3 在供試品制備過程中，作者通過熱回流提取與超聲波提取的對比，結果發(fā)現(xiàn)血竭素的熱穩(wěn)定性較差，回流提取的含量較超聲波提取含量少約30%，參照藥典血竭的含量測定供試品制備方法，采用3%磷酸甲醇提取，該供試品溶液在棕色玻璃容器中，室溫放置10小時穩(wěn)定性良好。

3.4 通過文獻報道，骨筋丸膠囊的含量研究報道較多，其中測芍藥苷、人參皂苷Rg1、龍膽苦苷、士的寧、馬錢子堿等，且各廠家執(zhí)行各自的注冊標準，執(zhí)行含量標準也各不相同，致使有的廠家不控制血竭投料，或僅按鑒別水平投料致使市售藥品質量偏差較大，不能保證臨床用藥的有效性與安全性，故建議各廠家統(tǒng)一質量標準。

[1]國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十三冊［S］.1997：139

[2]國家藥典委員會.中國藥典2005年版一部［S］.化學工業(yè)出版社，北京，2005：296

[3]賀芬，李艷春.骨筋丸片治療頸椎病療效觀察［J］.美國中華臨床醫(yī)學雜志，2006，8（3）:329-330.

[4]鄭慶安，陳江，張穎君等.著名民間藥物血竭的起源與傳播［J］.云南植物研究，2003，增刊16：102-107.