抱莖苦荬菜水溶性成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定

姜瑞芝,陳英紅,羅浩銘,徐多多,高 陽,高其品*

1吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院;2長春中醫(yī)藥大學(xué)研發(fā)中心,長春 130021

苦碟子為菊科植物抱莖苦荬菜 Ixeris sonchifolia(Bge.)Hance的干燥地上部分,具有清熱解毒、涼血活血、排濃止痛之功效?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,苦碟子還具有抗腫瘤、抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜及改善心肌供血不足等作用,以其水溶性成分制備的苦碟子注射劑臨床上用于治療冠心病。近年來,隨著現(xiàn)代提取分離和波譜學(xué)技術(shù)以及現(xiàn)代藥理學(xué)的飛速發(fā)展,對(duì)苦荬菜屬植物的化學(xué)成分和生物活性的研究越來越深入,但都集中研究其脂溶性成分。因此,對(duì)苦碟子中水溶性成分進(jìn)行深入研究,對(duì)臨床用藥具有指導(dǎo)意義。本實(shí)驗(yàn)分離鑒定了 5個(gè)化合物分別為木犀草素 -7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(1),木犀草素-7-O-(β-D-葡萄糖 1→2葡萄糖苷 )(2),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(3),菊苣酸(4),(-)3,4-二羥基咖啡酰基酒石酸(5)?；衔?3～5為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Pyris Diamond熔點(diǎn)測(cè)定儀;Perkin-Elmer243B digital polarimeter旋光測(cè)定儀 ;FTS-135型傅立葉紅外光譜測(cè)定儀;島津 UV-2250紫外光譜儀;Braker AV600型核磁共振儀;LCQ噴霧離子阱質(zhì)譜儀(Finngan);薄層板(10×10)和柱色譜硅膠均為(青島海洋化工廠);MDS-5反相制備色譜填料(北京麥迪生新技術(shù)開發(fā)中心);柱色譜聚酰胺(浙江臺(tái)州路橋生化塑料廠);LunaC18制備柱(美國 Phenomenex);分離用甲醇為色譜純;所用試劑均為分析純。

抱莖苦荬菜由通化華夏藥業(yè)股份有限公司提供。樣品由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院資源所徐國經(jīng)副教授鑒定為 Ixeris sonchifolia(Bge.)Hance

2 提取與分離

取抱莖苦荬菜干燥地上部分 50 kg,加 10倍量的水煎煮 2次 ,煎煮液加氧化鈣乳沉淀,離心,沉淀懸浮在乙醇中,加硫酸調(diào)至 pH為 3,離心,上清液加氫氧化鈉調(diào)至中性,回收乙醇,得到提取液 40 g/m L,取提取液 2000 m L經(jīng)聚酰胺柱分離,以水洗至無色,60%乙醇洗至無色,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀分別回收,得到兩部分濃縮液,水洗部分濃縮液經(jīng)大孔樹脂HPD100柱分離,以水洗至無色,20%乙醇洗至無色,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收,得兩部分濃縮液,甲醇-水重結(jié)晶,水洗部分得化合物 5(260mg),20%乙醇部分得化合物 4(320 mg)。60%乙醇聚酰胺洗脫部分經(jīng)反相制備色譜柱(MDS-5),用甲醇:0.4%乙酸(40:60)洗脫,部分收集器收集,薄層層析間管檢測(cè)(氯仿 :甲醇:水 =7:4:1)和 (正丁醇:乙酸:水 =4:1:5),合并相同部分,HPLC-反相 C18制備柱進(jìn)一步分離純化,分別得到化合物 1(300 mg),2(290 mg),3(160mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1 桔黃色粉末,mp.280～282℃,易溶于甲醇、乙醇,鹽酸鎂粉反應(yīng)陽性。UVλMeOHmax:203,348 nm;IR(KBr)υmaxcm-1:3419,2931,1602,1674;ESI-MSm/z:463[M+H]+;1HNMR(DMSO-d2,600 MHz)δ:6.699(1H,S,H-3),6.40(1H,d,J=1.8 Hz,H-6),6.76(1H,d,J=1.8 Hz,H-8),7.37(1H,d,J=2.4 Hz,H-2′),6.85(1H,d,J=8.4 Hz,H-5′),7.43(1H,dd,J=8.4,2.4 Hz,H-6′),5.10(1H,d,J=7.2 Hz,Glu H-1),3.67(1H,d,J=10.2 Hz,Glu H-6);13C NMR(DMSO-d2,150 MHz)δ:71.9(C-4″),72.9(C-2″),73.8(C-5″),76.4(C-3″),94.5(C-8),99.5(C-6),99.5(C-1″),102.7(C-3),105.2(C-10),113.3(C-2′),116.1(C-5′),119.0(C-1′),120.6(C-6′),146.1(C-3′),150.8(C-4′),156.9(C-5),161.0(C-9),162.9(C-7),164.60(C-2),172.5(C-6),181.8(C-4),與參考文獻(xiàn)[1]對(duì)照,鑒定為 luteolin-7-O-β-D-glucuronide。

化合物 2 黃白色粉末,mp.270～272℃,鹽酸鎂粉反應(yīng)陽性:203,348 nm;IR(KBr)υmaxcm-1:3109,2728,1610,1612.;ESI-MSm/z:609[MH]-;1H NMR(DMSO-d2,150 MHz)δ:6.74(1H,s,3-H),6.50(1H,d,J=2.4 Hz,6-H),6.80(1H,d,J=1.8 Hz,8-H),7.30(1H,d,J=2.4 Hz,2′-H),br3.673-3.633(3′-H),br3.125-3.001(4′-H),6.90(1H,d,J=8.4 Hz,5′-H),7.50(1H,dd,J=8.4,2.4Hz,6′-H),5.10(1H,d,J=7.2 Hz,Glu-H-1),br3.673-3.633(Glu-H-6),4.18(1H,d,J=7.8 Hz,Glu-H-1′),br3.673-3.633(Glu-H-4′),3.97(1H,d,J=10.2 Hz,Glu-H-6′);13C NMR(DMSO-d2,150 MHz)δ:164.5(C-2),103.1(C-3),181.9(C-4),156.9(C-5),99.6(C-6),162.9(C-7),94.8(C-8),161.1(C-9),105.3(C-10),119.2(C-1′),113.5(C-2′),145.8(C-3′),150.0(C-4′),116.0(C-5′),121.3(C-6′),99.8(Glu-C-1),73.5(Glu-C-2),76.2(Glu-C-3),69.4(Glu-C-4),76.7(Glu-C-5),61.1(Glu-C-6),103.5(Glu-C-1′),73.1(Glu-C-2′),75.4(Glu-C-3′),70.1(Glu-C-4′),77.0(Glu-C-5′),68.5(Glu-C-6′),與參考文獻(xiàn)[2]對(duì)照,鑒定為 luteolin-7-O-(β-D-glucopyranosyl-2glucopyranoside)。

化合物 3 黃棕色粉末,mp.280～282℃,易溶于甲醇、乙醇,鹽酸鎂粉反應(yīng)陽性;:206,336 nm;IR(KBr)υmaxcm-1:3451,2901,1658,1609。ESI-MSm/z:431[M-H]-;1H NMR(DMSO-d2,150 MHz)δ:7.96(2H,d,J=8.7 Hz,2′,6′-H),6.94(2H,d,J=8.7 Hz,3′,5′-H),6.45(1H,d,J=1.8 Hz,6-H),6.83(1H,d,J=1.8 Hz,8-H),6.89(1H,s,3-H),5.07(1H,d,J=7.5Hz,Glu-1-H);13C NMR(DMSO-d2,150MHz)δ:164.2(C-2),103.0(C-3),181.9(C-4),156.9(C-5),99.5(C-6),163.0(C-7),94.8(C-8),105.2(C-10),120.8(C-1),128.5(C-2,6),116.0(C-3,5),161.5(C-4),(C-1),72.9(C-2),76.4(C-3),71.9(C-4),74.2(C-5),172.67(C-6)。與參考文獻(xiàn)[3]對(duì)照,鑒定為 apigenin-7-O-β-D-glucuronide。

1 Feng XZ(封錫志),Xu SX(徐綏緒),Yue DB(岳大彪),et al.New flavonoids from Ixeris sonchifolia Hance.Chin JMed Chem(中國藥物化學(xué)雜志 ),1999,9:121-122.

2 Simonyan AV,Shinkarenko AL,Litvinenko VI.Flavonoid glycosides of some species of thyme cultivated in the Caucasus.Rastitel'nye Resursy,1973,9:395-399.

3 Zhu H(朱華),Xiao JB(肖建波),Zou DF(鄒登峰),et al.Isolation,purification and identification of apigenin-7-O-β-D-glucuronide in marchantia convoluta with silica column chromatography,RP-HPLC and LC-ESI-MS.Nat Prod Res Dev(天然產(chǎn)物研究與開發(fā))2005,1:38-41.

4 Lamidey AM,Fernon L,Pouysegu L,eta l.A convenientsynthesis of the echinacea-derived immunostimulator and HIV-1 integrase inhibitor(-)-(2R,3R)-chicoric acid.Heletica Chim ica Acta,2002,85:2328-2334.

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