暖地大葉蘚化學(xué)成分的研究

焦 威,魯改麗,邵華武,魯潤(rùn)華,3＊

1中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所,成都 610041; 2內(nèi)蒙古巴彥淖爾市中醫(yī)院,臨河 015000;3中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院應(yīng)用化學(xué)系,北京 100094

暖地大葉蘚化學(xué)成分的研究

焦 威1,魯改麗2,邵華武1,魯潤(rùn)華1,3＊

1中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所,成都 610041;2內(nèi)蒙古巴彥淖爾市中醫(yī)院,臨河 015000;3中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院應(yīng)用化學(xué)系,北京 100094

從真蘚科大葉蘚屬植物暖地大葉蘚 Rhodobryum giganteum(schwaegr.)Par.的乙醇提取物中分離得到 9個(gè)化合物,通過波譜分析鑒定其分別為麥角甾-7,22-雙烯-3β,5α,6β-三醇 (1),烏蘇酸 (2),琥珀酸 (3),尿嘧啶(4),棕櫚酸(5),槲皮素(6),碳二十九烷(7),β-谷甾醇 (8),胡蘿卜苷 (9)?；衔?1～9均為首次從該植物中分離得到。

蘚類植物;暖地大葉蘚;回心草;化學(xué)成分

暖地大葉蘚 (Rhodobryum giganteum[Schwaegr.]Par.)系真蘚科 (Bryaceae)大葉蘚屬植物,別名茴心草、茴薪草、鐵腳一把傘、巖谷傘[1-2]。生于潮濕林地土坡、腐木或附于土石上,分布于長(zhǎng)江流域以南暖熱地區(qū),全年可采。暖地大葉蘚作為民族草藥回心草的原植物之一,廣泛應(yīng)用于我國(guó)西南少數(shù)民族,如傈僳族、彝族、景頗族等。它具有養(yǎng)心安神,清肝明目的功效,主治心悸怔重,神經(jīng)衰弱等癥。近年來(lái),暖地大葉蘚應(yīng)用于心血管相關(guān)疾病的良好療效受到了越來(lái)越多的關(guān)注,現(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明,暖地大葉蘚具有顯著降低血粘度、降血脂和抗動(dòng)脈硬化的作用[3-4]。目前,關(guān)于這種民族草藥相關(guān)活性成分的研究還較少,研究的對(duì)象主要集中在其同屬植物大葉蘚,主要得到甾體及黃酮類化合物[5-7],而暖地大葉蘚化學(xué)成分的研究還未見報(bào)道。定性結(jié)果表明:暖地大葉蘚含有揮發(fā)油、酚類、黃酮、有機(jī)酸、甾體化合物、氨基酸和糖類。為了尋找結(jié)構(gòu)新穎的活性成分,本研究組對(duì)產(chǎn)自四川的暖地大葉蘚進(jìn)行了化學(xué)成分研究。從暖地大葉蘚的全草中共分離和鑒定了 9個(gè)化合物。三個(gè)甾體類化合物:麥角甾-7, 22-雙烯-3β,5α,6β-三醇(1),谷甾醇 (8),胡蘿卜苷(9)。一個(gè)三萜類:烏蘇酸(2),一個(gè)黃酮類化合物:槲皮素(6),還有一些小分子有機(jī)化合物:琥珀酸(3)、尿嘧啶(4),棕櫚酸 (5)和碳二十九烷 (7)。其中化合物 1～9均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Perkin-Elmer FTIR紅外光譜儀,Bruker AV-600核磁共振儀 (T MS為內(nèi)標(biāo)),Finnigan LCQDECA質(zhì)譜儀,薄層層析 (GF254)和柱層析硅膠 (160～200,200～300目)均為青島海洋化工廠產(chǎn)品,ODS-A反相填料為 Y MC公司產(chǎn)品。RP-18反相硅膠為 tr imention-al公司產(chǎn)品。MCI gel CHP-20P為日本三菱公司產(chǎn)品。

暖地大葉蘚 (Rhodobryum giganteum (Schwaegr.)Par.)樣品 2005年 9月購(gòu)于四川省成都市,憑證標(biāo)本由中國(guó)科學(xué)院植物研究所賈渝研究員鑒定,標(biāo)本存放于中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所標(biāo)本館。

2 提取與分離

暖地大葉蘚 7 Kg粉碎后,用 95%的乙醇浸泡 3次,每次 7 d,減壓濃縮后得到 1 Kg油狀物,然后用1000 mL水分散,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次,得到石油醚相浸膏 92 g,乙酸乙酯相浸膏30 g。石油醚相經(jīng)MCI gel除去大部分葉綠素,90%甲醇/水體系洗脫。然后經(jīng)硅膠柱層析,石油醚/乙酸乙酯洗脫劑體系 (10∶1,8∶1,6∶1,4∶1,2∶1,1∶1,每個(gè)體系 500 mL)得到 1～3組分。組分 1經(jīng)硅膠柱層析(石油醚/丙酮 10∶1-丙酮),洗脫液中析出白色固體,用石油醚洗滌后得到化合物 7(15mg)。組分2經(jīng)硅膠柱層析 (石油醚/丙酮 10∶1-丙酮),得到化合物 5(62 mg)。組分 3經(jīng)硅膠柱層析 (石油醚/乙酸乙酯 5∶1-丙酮),洗脫液中析出白色晶體,鑒定得到 8(11 mg)。

乙酸乙酯部分用硅膠柱層析,洗脫劑體系為氯仿/丙酮 (12∶1,10∶1,8∶1,6∶1,4∶1,1∶1,每個(gè)體系500 mL),根據(jù) 10%硫酸乙醇顯色情況用薄層點(diǎn)板方法將所有餾分分為 1～5段。分別將 1～3部分用MCI gel除去大部分葉綠素,80%甲醇/水體系洗脫。第 4、5段由于含有大量的褐色不溶膠狀物,未進(jìn)行進(jìn)一步分離。第 1段進(jìn)一步經(jīng) ODS-A層析 (70%, 80%甲醇/水,甲醇),得到粗品。再經(jīng)石油醚/丙酮梯度洗脫,得到化合物 1(24 mg)、2(536 mg)。第 2段用ODS-A柱純化,洗脫劑采用(70%,80%,90%甲醇/水,甲醇),得到化合物 9(13mg)。其黃色母液經(jīng)硅膠柱層析(氯仿/丙酮,甲醇),得到化合物 6(17 mg)。第 3段過濾除去大量的褐色膠狀物,得到的過濾液減壓蒸干后,用甲醇溶解,重結(jié)晶得到化合物3(29 mg),然后母液用 RP-18柱純化,洗脫劑采用甲醇/水(65%,70%,80%甲醇/水,甲醇),得到化合物 4(16 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1 白色粉末,C28H46O3,紫外燈下沒有熒光斑點(diǎn),噴硫酸乙醇,加熱后顯藍(lán)紫色斑點(diǎn)。ESIMSm/z:453[M+Na]+。1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ:5.22(1H,AB,H-22),5.16(1H,AB,H-23), 5.07(1H,br s,H-7),4.45(1H,d,J=5.0 Hz,H-3),4.20(1H,d,J=5.0 Hz,H-6),3.74(1H,m,H-3),0.86(3H,d,J=7.0 Hz,H-21),0.96(3H,d,J =6.0 Hz,H-24),0.89(3H,s),0.53(3H,s),0.78 (3H,d,J=7.0Hz,H-27),0.80(3H,d,J=7.0 Hz, H-28)。13C NMR(150 MHz,DMSO-d6)δ:32.9(C-1),31.6(C-2),66.4(C-3),40.7(C-4),75.0(C-5),72.6(C-6),140.1(C-7),119.9(C-8),42.7 (C-9),37.1(C-10),21.8(C-11),39.4(C-12), 43.5(C-13),54.6(C-14),23.1(C-15),28.2(C-16),55.8(C-17),12.5(C-18),18.2(C-19),40.5 (C-20),21.4(C-21),135.8(C-22),131.9(C-23),42.5(C-24),32.9(C-25),19.9(C-26),20.2 (C-27),17.8(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致,鑒定該化合物為麥角甾-7,22-雙烯-3β,5α,6β-三醇 (ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol)。

化合物 2 白色粉末,紫外燈下沒有熒光斑點(diǎn),噴硫酸乙醇溶液,加熱后顯藍(lán)紫色斑點(diǎn)。IRυmax(KBr)cm-1:3427,2917,2849,1576,1541,1471;ESIMSm/z:479[M+Na]+。1H NMR(600 MHz pyridine-d5)δ:0.91,1.04,1.07,1.23,1.25(15H,s,5× CH3),0.96(3H,d,J=6.0 Hz,H-29),1.01(3H,d, J=6.0 Hz,H-30),2.63(1H,d,J=10.5 Hz,H-18), 3.45(1H,m,H-3α),5.50(1H,t,J=3.0 Hz,H-12)。13C NMR(150 MHz,pyridine-d5)δ:15.5(C-24),16.3(C-25),17.2(C-26),17.3(C-29),18.6 (C-6),21.2(C-30),23.4(C-11),23.7(C-27), 24.7(C-16),27.9(C-2),28.5(C-14),28.6(C-22),30.9(C-20),33.4(C-6),37.1(C-9),37.2 (C-21),38.9(C-1),39.2(C-3),39.2(C-20), 39.3(C-19),39.8(C-8),42.3(C-14),47.8(C-17),47.8(C-9),53.3(C-18),55.6(C-5),77.9 (C-3),125.4(C-12),139.0(C-13),179.6(C-28)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致,鑒定該化合物為烏蘇酸(ursolic acid)。

化合物 3 無(wú)色塊狀晶體 (甲醇),C4H6O4,mp. 184～186°C,紫外燈下沒有熒光斑點(diǎn),硫酸乙醇和碘顯色劑都不顯色,1%甲基紅的乙醇溶液顯粉紅色的斑點(diǎn)。ESI-MSm/z:141[M+Na]+。1H NMR (600 MHz,DMSO-d6)δ:2.43(4H,s,H-3,4),12.12 (2H,br s,COOH)。13C NMR(150 MHz,DMSO-d6) δ:29.2(C-2,3),174.0(C-1,4)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致,鑒定該化合物為琥珀酸 (succinic acid)。

化合物 4 無(wú)色針狀晶體 (甲醇),C4H4N2O2, mp.334～336°C,紫外燈下有熒光斑點(diǎn),硫酸乙醇顯色劑不顯色。1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ: 5.44(1H,d,J=7.5 Hz,H-2),7.37(1H,d,J=7.5 Hz,H-3),10.97(1H,br s,NH),10.78(1H,br s, NH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致,鑒定該化合物為尿嘧啶 (uracil)。

化合物 5 白色固體,C16H32O2,紫外燈下無(wú)熒光斑點(diǎn),常用顯色劑不顯色,1%甲基紅的乙醇溶液顯粉色斑點(diǎn)。ESI-MSm/z:255[M-H]-,511[2MH]-。 I Rmax(KBr)cm-1:3423,2918,2849,1704, 1471。1H NMR(CDCl3)δ:0.88(3H,t,J=7.0 Hz, H-16),1.26～1.30(24 H,m,H-4～H-15),1.63 (2H,m,H-3),2.34(2H,t,J=7.0 Hz,H-2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致,鑒定該化合物為棕櫚酸(palmitic acid)。

化合物 6 黃色粉末,C15H12O7,在紫外燈下(365 nm)有亮藍(lán)色熒光,硫酸乙醇顯色劑顯黃色斑點(diǎn)。ESI-MSm/z:303[M-H]-。1H NMR(600 MHz, DMSO-d6)δ:6.17(1H,d,J=2.0 Hz,H-6),6.37 (1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.86(1H,d,J=8.5 Hz, H-5′),7.52(1H,dd,J=8.5,2.0 Hz,H-6′),7.65 (1H,d,J=2.0 Hz,H-2′),12.46(1H,s,5-OH)。13C NMR(150 MHz,DMSO-d6)δ:147.5(C-2),136.2 (C-3),176.1(C-4),156.6(C-5),98.6(C-6), 164.3(C-7),93.8(C-8),161.2(C-9),103.5(C-10),122.4(C-1′),115.5(C-2′),145.5(C-3′), 148.2(C-4′),116.1(C-5′),120.4(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致,鑒定該化合物為槲皮素 (quercetin)。

化合物 7 白色粉末,C29H60,紫外燈下無(wú)熒光斑點(diǎn),常用顯色劑不顯色。1H NMR(600 MHz,DMSO-d6)δ:0.86(6H,t,J=6 Hz,2×CH3),1.23 (54H,m,27×CH2)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致,鑒定該化合物為碳二十九烷(nonacosane)。

化合物 8 無(wú)色針晶(丙酮),mp.142～144℃,紫外燈下無(wú)熒光斑點(diǎn),噴硫酸乙醇溶液顯紫紅色斑點(diǎn),與β-谷甾醇對(duì)照品在三種溶劑體系薄層層析對(duì)照, Rf值相同。因此確定為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物 9 白色粉末,mp.302～304°C,紫外燈下無(wú)熒光斑點(diǎn),噴硫酸乙醇溶液顯紫紅色斑點(diǎn),與胡蘿卜苷對(duì)照,Rf值及顏色均相同,混合后熔點(diǎn)不下降。因此確定為胡蘿卜苷(daucosterol)。

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Studies on the Chem ical Constituents ofRhodobryum giganteum(schwaegr.)Par.

J IAO Wei1,LU Gai-li2,SHAO Hua-wu1,LU Run-hua1,3＊1Chengdu Institute of B iology,Chinese Academ y of Sciences,Chengdu 610041,China;2InnerM ongolia Bayanaoer Chinese Hospital,Bayanaoer,015000,China;3Departm ent of Applied Chem istry,College of Sciences,China Agricultural University,Beijing 100094,China

To study the chemical constituents ofRhodobryum giganteum (schwaegr.)Par.,chromatographic methods were used to isolate and spectroscopic methodswere used to elucidate the structures of isolated compounds.Nine compoundswere obtained and identified as ergosta-7,22-dien-3β,5α,6β-triol(1),ursolic acid(2),succinic acid(3),uracil(4),palmitic acid(5),quercetin(6),nonacosane(7),β-sitosterol(8),daucosterol(9).All these compounds were isolated from this plant for the first time.

Moss;Rhodobryum giganteum(schwaegr.)Par.;huixincao;chemical constituents

1001-6880(2010)02-0235-03

2008-12-15 接受日期:2009-04-28

中國(guó)科學(xué)院成都生物研究所知識(shí)創(chuàng)新領(lǐng)域前沿項(xiàng)目(08B1041);國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(2009CB522800)

＊通訊作者 E-mail:rhlu.cn@gmail.com

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