黃 嘯,陸 茵
(寧波大學(xué)應(yīng)用海洋生物技術(shù)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,浙江 寧波 315211)
我國(guó)水產(chǎn)品資源豐富,特別是改革開放以來(lái),商品流通加快,水產(chǎn)品也不例外?,F(xiàn)在人們對(duì)水產(chǎn)品的需求不再是數(shù)量,而是更看重其品質(zhì),從而對(duì)鮮活水產(chǎn)品的運(yùn)輸提出了更高的要求。鮮活水產(chǎn)品色香味俱全,具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。然而,水產(chǎn)活體死亡后出現(xiàn)腐敗,口感和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值下降,食用價(jià)值也大打折扣。所以,水產(chǎn)活體運(yùn)輸市場(chǎng)也隨之急速發(fā)展起來(lái)。
水產(chǎn)活體暫養(yǎng)與貯運(yùn)的宗旨是要科學(xué)、合理、經(jīng)濟(jì)地維持水產(chǎn)活體在運(yùn)輸過(guò)程中存活所必需的生態(tài)環(huán)境,環(huán)境條件越是適宜,存活時(shí)間就越長(zhǎng),從而解決運(yùn)輸過(guò)程中存活率低的問(wèn)題。
水產(chǎn)活體在流通中新陳代謝消耗氧氣,同時(shí)產(chǎn)出二氧化碳,氧氣從外界獲取,二氧化碳則應(yīng)及時(shí)排出體外,若過(guò)多滯留于體內(nèi),必然會(huì)擾亂體液酸堿平衡,危及存活。所以呼吸活動(dòng)是水產(chǎn)動(dòng)物流通過(guò)程中的基本生理特征。
水中溶氧是影響水產(chǎn)活體的一個(gè)重要因素。氧分壓直接影響水產(chǎn)活體的鰓或其它呼吸器官的氣體交換,水中溶氧減少會(huì)使水產(chǎn)動(dòng)物呼吸頻率加快,如果水中溶氧濃度低于水產(chǎn)活體的窒息點(diǎn),就會(huì)造成水產(chǎn)活體窒息死亡。各種水產(chǎn)活體的窒息點(diǎn)不盡相同,萬(wàn)松良等[1]報(bào)道鳡魚種的窒息點(diǎn)為 0.78 mg·L-1,其耐低氧能力屬中等偏弱型。廖勛波等[2]研究發(fā)現(xiàn):水溫24.0℃,鄱陽(yáng)湖黃顙魚的臨界窒息點(diǎn)為0.31 mg·L-1。此外,還有不少學(xué)者對(duì)水產(chǎn)活體的窒息點(diǎn)進(jìn)行了研究[3-5]。
在適宜水溫范圍內(nèi),水溫升高,水產(chǎn)活體的呼吸加速;反之,則呼吸減慢。如果水溫劇變,將會(huì)抑制水產(chǎn)活體的呼吸運(yùn)動(dòng)。低溫可降低水產(chǎn)活體對(duì)氧氣的消耗,并抑制二氧化碳、氨、乳酸等生成[6]。陳 進(jìn) 樹[7]在 不 同 的 水 溫 梯 度 (25 ℃、22℃、19℃、16℃)下研究了神仙魚成魚和幼魚的呼吸頻率,結(jié)果表明:水溫對(duì)神仙魚呼吸頻率的影響呈非線性關(guān)系;水溫對(duì)神仙魚幼魚呼吸頻率的影響比成魚明顯。陳松波等[8]在不同溫度條件下 (6℃~34℃)對(duì)鯉魚成魚和幼魚的呼吸頻率進(jìn)行了研究,結(jié)果表明:高溫 (34℃)時(shí)鯉魚呼吸急促,成魚的呼吸頻率可達(dá)130次·min-1,幼魚呼吸頻率可達(dá)170次·min-1;低溫 (6℃)時(shí)呼吸減緩,成魚呼吸頻率下降到11次·min-1,幼魚的呼吸頻率下降到19次·min-1。因此,溫度是影響水產(chǎn)活體呼吸頻率的重要因素。在適宜溫度范圍內(nèi)盡量降低呼吸頻率,就能有效地提高水產(chǎn)活體的存活率。
水體pH值對(duì)水產(chǎn)活體的呼吸狀態(tài)也有很大影響,淡水魚最適pH為6.5~8.5,海水魚為7.0~8.5。余日清等[9]研究了低 pH(6.0~3.6)對(duì)草魚呼吸活動(dòng)機(jī)能及耗氧代謝的影響,結(jié)果表明:在pH 4.6~3.6條件下,草魚呼吸和氣體代謝活動(dòng)受干擾的程度隨酸度增大而急劇加重,具體表現(xiàn)為呼吸頻率加快,深度加大,耗氧率起始升高繼而迅速下降,并在極端pH(3.6)下最終引起機(jī)體組織缺氧而致死。
氨是毒性高、通透性大的化合物。水體中氨積累到一定程度時(shí),會(huì)妨礙水產(chǎn)動(dòng)物的呼吸,即使是低濃度的氨也是有害的。陳惠等[10]做了不同氨濃度對(duì)魚類的毒性試驗(yàn),結(jié)果表明氨對(duì)魚類的毒性較大,半數(shù)致死量在1 mg·L-1左右。
魚類對(duì)水環(huán)境中的二氧化碳也非常敏感,它直接影響鰓的氣體交換,如果含量過(guò)多,則對(duì)魚類有麻醉作用。水環(huán)境中的其它因素,如懸濁物、鹽度等[11]都能影響水產(chǎn)活體的興奮狀態(tài),從而影響水產(chǎn)動(dòng)物的呼吸。
運(yùn)輸過(guò)程中,水產(chǎn)活體的尿量及尿濃度增加,尿中離子組成也起劇烈變化,加上未經(jīng)體循環(huán)排出的食物消化廢物,都會(huì)促成活體死亡。
水產(chǎn)魚類主要通過(guò)呼吸器官、腸道、皮膚和腎等排除體內(nèi)代謝廢物,其中腎是主要排泄器官,以尿的形式排出。一般,肉食性魚類的尿呈酸性,草食性魚類的尿呈堿性。淡水魚類排水量大于海水魚類。
如果排泄物在運(yùn)輸環(huán)境中積累,會(huì)使水質(zhì)惡化,加上細(xì)菌的作用,水中氨氮含量會(huì)不斷增加,減弱水產(chǎn)動(dòng)物的吸氧能力,造成水產(chǎn)動(dòng)物死亡。蔣艾青[12]發(fā)現(xiàn)排泄物如果處理不當(dāng),就會(huì)造成水中氨氮和亞硝態(tài)氮的積累,造成水質(zhì)惡化,引起魚類死亡。
影響水產(chǎn)動(dòng)物健康的不良刺激因素很多,可歸納為物理因素、化學(xué)因素、生物因素及綜合因素4個(gè)方面。物理應(yīng)激因素主要有溫度、光照、聲音、電流等。化學(xué)應(yīng)激因素主要有pH、溶解氣體、鹽度、重金屬和有機(jī)質(zhì)等[13]。
當(dāng)生存環(huán)境因子發(fā)生突變時(shí),水產(chǎn)動(dòng)物的神經(jīng)、內(nèi)分泌、激素、血液指標(biāo)等生理狀態(tài)也會(huì)發(fā)生變化,并產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),導(dǎo)致新陳代謝過(guò)程加劇,引起死亡。
水產(chǎn)動(dòng)物在運(yùn)輸過(guò)程中受到刺激因子的作用后,會(huì)首先出現(xiàn)交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)反應(yīng)。Cannon最早全面研究了交感-腎上腺髓質(zhì)系統(tǒng)的作用,曾提出應(yīng)急反應(yīng)學(xué)說(shuō),認(rèn)為機(jī)體遭遇特殊情況時(shí),這一系統(tǒng)將立即被激發(fā),腎上腺素與去甲腎上腺素的分泌大大增加,它們作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),提高興奮性,使機(jī)體處于警覺(jué)狀態(tài)[14]。反應(yīng)靈敏、呼吸加快、心跳加快、血壓升高,有利于應(yīng)急時(shí)重要器官得到更多的血液供應(yīng);肝糖原分解增強(qiáng)、脂肪分解加速、血糖升高,以適應(yīng)在應(yīng)急情況下對(duì)能量的需要。實(shí)際上,引起應(yīng)急反應(yīng)的各種刺激,也是引起應(yīng)激反應(yīng)的刺激,當(dāng)機(jī)體受到應(yīng)激刺激時(shí),同時(shí)引起應(yīng)急反應(yīng)與應(yīng)激反應(yīng),兩者相輔相成,共同維持機(jī)體的適應(yīng)能力。
劉小玲[15]指出應(yīng)激從以下2個(gè)方面影響魚體的健康。一是強(qiáng)烈的或劇烈的機(jī)能和組織改變,導(dǎo)致局部或全身性病變;二是通過(guò)抑制免疫機(jī)能(包括特異性的和非特異性的),導(dǎo)致魚類死亡率提高。
為降低水產(chǎn)動(dòng)物的應(yīng)激反應(yīng)與新陳代謝,減少對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的傷害,提高存活率,麻醉劑已廣泛用于水產(chǎn)動(dòng)物的活體運(yùn)輸中。麻醉運(yùn)輸是采用麻醉劑抑制水產(chǎn)動(dòng)物的中樞神經(jīng),抑制其反射功能,從而降低呼吸和代謝強(qiáng)度,提高存活率的運(yùn)輸方式。麻醉運(yùn)輸具有存活率高、運(yùn)輸密度大、運(yùn)輸時(shí)間長(zhǎng)、操作方便等優(yōu)點(diǎn),到達(dá)目的地后,水產(chǎn)動(dòng)物放入清水中即可復(fù)蘇,采用適量的麻醉劑可以使水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)應(yīng)激的強(qiáng)度降低,并且麻醉魚的皮質(zhì)醇激素水平恢復(fù)要比非麻醉的快,麻醉運(yùn)輸維護(hù)了魚血液生化指標(biāo)的穩(wěn)定,對(duì)于維持魚體生理代謝平衡有重要作用。劉長(zhǎng)琳[16]等用MS-222對(duì)半滑舌鰨進(jìn)行麻醉實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)MS-222麻醉半滑舌鰨效果較好,魚體入麻時(shí)間短、復(fù)蘇快,安全邊界寬,反復(fù)麻醉無(wú)明顯耐受性,是理想的水產(chǎn)用麻醉劑。國(guó)外一些學(xué)者也發(fā)現(xiàn) MS-222 用于真鯛[17]、庸鰈[18]的麻醉運(yùn)輸效果較好,水產(chǎn)活體運(yùn)輸存活率較高。張富林等[19]等用丁香酚做麻醉劑,發(fā)現(xiàn)效果比 MS-222還要好,所用濃度更低,麻醉開始時(shí)間更短。
其它常用的麻醉劑還有乙醇、乙醚、二氧化碳、三氯乙醛、三氯特丁醇、三溴乙醇、巴比妥鈉、尿烷、苯巴比妥鈉、碳酸氫鈉、丁香油、苯唑卡因[20]、乙二醇苯醚等[21]。
充氧運(yùn)輸是指運(yùn)輸途中按設(shè)定的要求向水體內(nèi)充氧,保證水產(chǎn)動(dòng)物在運(yùn)輸途中氧氣充足,確保水產(chǎn)動(dòng)物在運(yùn)輸途中的水體環(huán)境溶氧不低于水產(chǎn)動(dòng)物的窒息點(diǎn)。氧氣供應(yīng)充足,可在一定時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)高密度暫養(yǎng)。充氧運(yùn)輸具有存活率高,運(yùn)輸密度高,且能最大程度地保持水產(chǎn)動(dòng)物正常的生理水平。目前,應(yīng)用的比較多的水體充氧方式有噴淋式增氧、射流式增氧等機(jī)械方式;使用密封袋運(yùn)輸這種人為充入氧氣的方法;在水體中投入增氧劑來(lái)增氧的方法。陳文召等[22]研究了一種雙噴嘴射流器的充氧性能,在較佳工作條件下,動(dòng)力效率高,如能運(yùn)用在水產(chǎn)活體運(yùn)輸中,能達(dá)到高效的充氧效果。鄧希海[23]設(shè)計(jì)了一種換水換氣式充氧密封水產(chǎn)苗種運(yùn)輸裝置,鳙魚苗存活最長(zhǎng)時(shí)間為55 h。劉德禧[24]用密封充氧運(yùn)輸魚苗的方法,發(fā)現(xiàn)充氧一次可以運(yùn)輸30 h左右。張耀明等[25]早在1983年就利用雙氧水作增氧劑運(yùn)輸魚苗,取得很大成功。楊正鋒等[26]討論了增氧劑在水產(chǎn)生產(chǎn)多個(gè)環(huán)節(jié)中的應(yīng)用,說(shuō)明在長(zhǎng)途運(yùn)輸中也可使用一定量的增氧劑來(lái)提高運(yùn)輸成活率。
無(wú)水運(yùn)輸是讓水產(chǎn)動(dòng)物脫離大量的水環(huán)境,到達(dá)降低其新陳代謝的目的。研究較多的是將水產(chǎn)動(dòng)物的運(yùn)輸環(huán)境溫度降到生態(tài)冰溫,使其在生態(tài)冰溫下冬眠。處于冰溫冬眠的水產(chǎn)動(dòng)物,呼吸和新陳代謝極低,為無(wú)水?;钸\(yùn)輸提供了條件。國(guó)外早就進(jìn)行了生態(tài)冰溫的運(yùn)輸研究,把牙鲆降溫馴化,在生態(tài)冰溫區(qū)冬眠后,從水中撈出,在無(wú)水、體表干燥的狀態(tài),用0.5℃的冰溫卡車運(yùn)輸6 h后,將其放入水中,幾秒鐘后魚蘇醒、游動(dòng),牙鲆的口感、風(fēng)味超群。另一組實(shí)驗(yàn),牙鲆120尾、河豚10尾、鯛6尾,冰溫陸運(yùn)約20 h,運(yùn)輸過(guò)程中,使用了滲入魚體表呼吸所需的氧的緩沖材料,魚表皮干燥至水分含量20%,呈現(xiàn)“木乃伊”狀態(tài),把魚放入水中,魚立刻蘇醒。采用同樣的技術(shù)和方法,進(jìn)行了24 h空運(yùn)試驗(yàn),取得成功,魚體全部存活。運(yùn)用活體冰溫干燥法,使冰溫區(qū)人工冬眠的魚干燥,抑制了魚體表的呼吸代謝,魚的生存時(shí)間延長(zhǎng)了10倍,能經(jīng)受20 h以上的長(zhǎng)途運(yùn)輸[27]。另外,干燥冬眠的魚體,魚肉的口感、光澤均良好,這是由于人工冬眠緩慢降低水溫處理后,魚肉的呈鮮味物質(zhì):天冬氨酸、谷氨酸含量增加,而發(fā)苦味的亮氨酸、異亮氨酸等含量減少。王曉飛等[28]測(cè)定麥穗魚的生態(tài)冰溫帶為:-1℃ ~0.6℃;健康魚體、暫養(yǎng)48 h后,控制不同溫度下的降溫速率將麥穗魚的溫度降至0.6℃,放入塑料保鮮袋無(wú)水充氧封口包裝,在低溫 (0±1)℃下?;羁蛇_(dá)12 h。黑鯛的生態(tài)冰溫為 -1.1℃ ~6℃[29];經(jīng)過(guò) 48 h暫養(yǎng)后緩慢降溫到6℃,在低溫 (2±0.5)℃無(wú)水條件下供純氧可以使黑鯛存活6 h。孫寧[30]以聚苯乙烯盒作運(yùn)輸容器,填充物分別為浸水海綿和木屑,進(jìn)行羅氏沼蝦活蝦的無(wú)水活體運(yùn)輸模擬試驗(yàn),取得較高的存活率,證實(shí)羅氏沼蝦活蝦無(wú)水運(yùn)輸?shù)目尚行浴?/p>
超低溫運(yùn)輸是指將環(huán)境溫度降到-60℃以下,達(dá)到保存生物材料數(shù)月,甚至數(shù)年以上的運(yùn)輸方法。由于超低溫溫度太低,而且成本高,所以在水產(chǎn)材料方面,一般只用來(lái)保存魚類的精液、貝類配子及胚胎以及海藻等水產(chǎn)材料。為了防止超低溫對(duì)水產(chǎn)材料的低溫傷害,要向保存液中加入低溫保護(hù)劑 (抗凍劑),如二甲基亞砜、乙二醇、乙酰胺、丙二醇等。英國(guó)學(xué)者 Blaxter[31]首次作了冰凍保存太平洋鯡魚精巢的試驗(yàn),獲得了成功。用干冰(-79℃)保存6個(gè)月的精巢解凍授精,獲得80%的受精率,開創(chuàng)了冷凍精液也可以獲得高受精率的先例。Erdahl[32]冷凍鮭魚精液,獲得大于90%的受精率。Mounib[33]冷凍保存大西洋鮭精液,液氮保存1年后,受精率為80%。近年來(lái),超低溫冷凍保存得到更進(jìn)一步的發(fā)展。肖志忠等[34]的高效大黃魚精液的超低溫保存實(shí)驗(yàn)取得成功。廖馨等[35]對(duì)青蝦精子的超低溫冷凍保存技術(shù)進(jìn)行了研究,以壬氏液為稀釋液,添加8%DMSO為抗凍保護(hù)劑,4℃ 平衡 30 min, -20℃平衡 15 min,-80℃平衡15 min后投入液氮中保存,解凍時(shí)將冷凍管浸入55℃水浴中10~15 s至半融取出自然解凍,精子能維持 60%的存活力。葉霆等[36]以0.5 mL的麥細(xì)管為凍存管,以Cortland溶液為稀釋液,以10%DMSO為抗凍劑超低溫凍存黑鯛精子,凍精的激活率和受精率分別達(dá)到92.51%+1.25%和89.35%+1.99%。
水產(chǎn)活體暫養(yǎng)和運(yùn)輸流通過(guò)程中的生理變化是研究暫養(yǎng)和運(yùn)輸方法的基礎(chǔ),只有進(jìn)行深入的水產(chǎn)活體生理研究,才能為暫養(yǎng)和運(yùn)輸提供理論依據(jù)。
現(xiàn)代水產(chǎn)活體流通的運(yùn)輸方式多為各種方法的綜合運(yùn)用[29-33],只有綜合利用好各種運(yùn)輸方法才能使水產(chǎn)活體的運(yùn)輸效果好。隨著各種運(yùn)輸方式研究的發(fā)展深入,水產(chǎn)活體的流通運(yùn)輸必將朝著存活率高,運(yùn)輸密度大,運(yùn)輸時(shí)間長(zhǎng),操作簡(jiǎn)便,成本低廉的方向發(fā)展。
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