中藥方劑對鴨疫里氏桿菌疫苗的免疫佐劑作用

肖琛聞 鮑國連 韋 強 劉 燕 季權(quán)安

鴨疫里氏桿菌病又稱鴨傳染性漿膜炎，是由鴨疫里氏桿菌(RA)引起的鴨、鵝、火雞等多種禽類的一種急性或慢性傳染病。1～8周齡鴨敏感，惡劣環(huán)境條件可以促發(fā)感染。發(fā)病率為5%～90%，病死率高達80%，慢性耐過鴨主要表現(xiàn)神經(jīng)性癥狀，導(dǎo)致殘鴨和僵鴨。RA疫苗分滅活苗、弱毒活苗和亞單位菌苗等。高福等在研制RA福爾馬林滅活苗的基礎(chǔ)上，制得了礦物油佐劑滅活苗，最低保護率為75%，但注射部位有微弱的不吸收硬結(jié)。蘇小運等研制的鋁膠滅活苗一免后7～10d保護率為50%，20d后保護率為75%，保護率出現(xiàn)較慢。弱毒苗的缺點是容易造成細菌在被免動物體內(nèi)返毒，危害更大；亞單位菌苗雖然能夠提供較好的保護力，但其存在潛在的不確定性，因而暫時仍不能推廣?，F(xiàn)在還沒有理想的鴨疫里氏桿菌疫苗。

很多研究報道中藥復(fù)方也可作為佐劑，有增強疫苗免疫的效果，例如當(dāng)歸補血湯、四君子湯、玉屏風(fēng)散、小柴胡湯等。本研究試圖將玉屏風(fēng)散、四君子湯以及兩者之合方玉風(fēng)君子湯用于鴨疫里氏桿菌滅活濕苗中，觀察其免疫佐劑效果，為新型鴨疫里氏桿菌疫苗的開發(fā)提供新的思路。

(1)玉屏風(fēng)散的水煎劑(YPF)

取黃芪90g、白術(shù)60g、防風(fēng)30g，加水540ml(按每克生藥加水3ml)，冷水浸泡30 min。煮沸后90℃慢煎40

min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，二煎加水360 ml(按每克生藥加水2 ml)，煮沸后，90℃慢煎40 min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，合并濾液，95℃水浴濃縮至150ml，濃度為1.2g／ml。

(2)四君子湯的水煎劑(SJZ)

取黨參40g、白術(shù)18g、茯苓18g、甘草12g，混合加水264ml，煮沸后90℃慢煎40min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，二煎加水176 ml，煮沸后，90℃慢煎40 min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，合并濾液，95℃水浴濃縮至100ml，濃度為0.88g／ml。

(3)玉風(fēng)君子湯(YFJZ)

黃芪90g、白術(shù)60g、茯苓30g、防風(fēng)30g、黨參30g、甘草10g，混合加水750ml，煮沸后90℃慢煎40 min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，二煎加水500ml，煮沸后，90℃慢煎40min，趁熱過濾，濾液自然滴盡，合并濾液，95℃水浴濃縮至250ml，濃度為1 g／ml。

試驗結(jié)果表明在免疫后3周，合方組能夠顯著提高鴨對于鴨疫里氏桿菌的抗體水平。玉屏風(fēng)散能夠提高鴨對于RA抗體的產(chǎn)生水平，但無統(tǒng)計學(xué)差異，四君子湯似乎對細菌苗的免疫并無佐劑作用。

有文獻報道玉屏風(fēng)散或四君子湯能夠提高動物特異性或特異性免疫反應(yīng)，本研究所得結(jié)果與文獻報道并不符。分析原因可能有以下幾點：①本研究中所使用的為細菌性疫苗，玉屏風(fēng)散或四君子湯的佐劑效果不佳或許與此有關(guān)，兩方對于病毒性疫苗的免疫效果更佳；②服用劑量不一樣可能是造成佐劑效果不明顯的原因之一。

本研究中只有合方對鴨RA抗體產(chǎn)生起顯著性作用，研究發(fā)現(xiàn)，合方對于鴨疫里氏桿菌疫苗的免疫主要在體液免疫方面發(fā)揮佐劑作用，在細胞免疫作用并不十分明顯，然而在流式細胞研究中我們發(fā)現(xiàn)了一個有趣的現(xiàn)象：即所有試驗組（除四君子湯組外）CD4+、CD8+細胞百分比同對照組相比有所下降但試驗組CD4+／CD8+比值卻高于對照組，無統(tǒng)計學(xué)差異。CD4+／CD8+的比值增高，說明受免動物的細胞免疫有增強趨勢。但為什么絕對百分比有所下降，分析原因可能與本研究中受免動物在5日齡時就給藥有關(guān)，雛鴨在生長初期免疫系統(tǒng)并沒有完全發(fā)育，在這時給雛鴨服用具有免疫調(diào)節(jié)功能的中藥或許反而對雛鴨的免疫系統(tǒng)發(fā)育造成一種負(fù)影響。免疫系統(tǒng)的生長在其后階段對于中藥具有某種依賴性，因此如何選擇一個給藥最佳時間成為今后研究的又一課題。

體重試驗表明，所有試驗組方劑對于鴨的生長無副作用。因此，可以對本研究中的合方玉風(fēng)君子湯在鴨疫里氏桿菌疫苗上的佐劑運用方面作進一步研究。