影響口蹄疫疫苗免疫效果的因素分析

蔣文俊

1.疫苗質(zhì)量方面的因素

1.1 制苗種毒

在口蹄疫疫苗生產(chǎn)中，通過(guò)病毒基因核苷酸序列分析、AC-ELBA和微量血清中和試驗(yàn)測(cè)定口蹄疫疫苗毒株和流行毒株的抗原關(guān)系，選擇病毒遺傳進(jìn)化樹中與流行毒株同源性高、免疫原性好、大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中比較穩(wěn)定、適應(yīng)性好的毒株作為疫苗毒株。制苗種毒的穩(wěn)定性決定著疫苗質(zhì)量的穩(wěn)定性，制苗種毒繼代穩(wěn)定性與毒株特性有關(guān)，一株優(yōu)秀的毒株往往需要經(jīng)過(guò)反復(fù)篩選、馴化。好的種毒決定著好的疫苗，好的疫苗決定了好的免疫效果。

1.2 傳代細(xì)胞

利用BHK-21傳代細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)口蹄疫病毒的生產(chǎn)工藝已經(jīng)非常常見，病毒的增殖復(fù)制質(zhì)量與傳代細(xì)胞制備質(zhì)量有關(guān)，傳代細(xì)胞制備不僅是疫苗生產(chǎn)的源頭，更重要的是直接影響抗原質(zhì)量。傳代細(xì)胞制備質(zhì)量的均勻、穩(wěn)定是抗原質(zhì)量均勻、穩(wěn)定的基礎(chǔ)。

1.3 病毒滅活

滅活工藝對(duì)疫苗質(zhì)量有較大的影響，在滅活過(guò)程中要盡可能減少對(duì)病毒免疫蛋白的破壞，同時(shí)要確保病毒的徹底滅活，使其喪失感染性。在實(shí)際生產(chǎn)中，滅活劑的選擇、滅活溫度及滅活時(shí)間的控制都決定口蹄疫病毒滅活的效果。

1.4 濃縮工藝

滅活抗原通過(guò)截向流超濾或PEG沉淀法進(jìn)行純化和濃縮后，應(yīng)進(jìn)行抗原完整性的檢測(cè)，這是影響疫苗效力的關(guān)鍵指標(biāo)。因?yàn)橐呙缰?46S完整病毒粒子的多少?zèng)Q定著疫苗質(zhì)量和免疫效果的好壞。一般認(rèn)為，起主要免疫作用的是完整病毒粒子，疫苗免疫原性與其中的146S抗原含量有密切關(guān)系；12S病毒亞單位含有能產(chǎn)生抗病毒抗體的VPl，但不產(chǎn)生高水平的中和抗體；75S空衣殼在疫苗免疫中所起的作用不是很清楚，一般認(rèn)為75S在疫苗免疫中所起作用不大。

1.5 佐劑

采用不同佐劑對(duì)口蹄疫疫苗質(zhì)量也會(huì)產(chǎn)生很大影響。油佐劑疫苗可以緩慢地持續(xù)釋放抗原以刺激免疫系統(tǒng)，引發(fā)持續(xù)的免疫反應(yīng)，血清中抗體效價(jià)比較高，但下降比較迅速；leo佐劑疫苗免疫后血清中抗體效價(jià)比較低，但下降比較平緩；水佐劑疫苗已基本淘汰。油佐劑國(guó)內(nèi)常用白油和206佐劑，國(guó)外報(bào)道的有人工合成硫辛酰胺、WSF(分支桿菌細(xì)胞壁的水溶成分制成)和Montanide ISA25。另外，相同佐劑進(jìn)口和國(guó)產(chǎn)質(zhì)量上的差異也會(huì)影響疫苗的質(zhì)量。

1.6 乳化穩(wěn)定性

乳化穩(wěn)定性是疫苗免疫后持久刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要因素，所以疫苗出廠前其物理穩(wěn)定性的測(cè)定是必不可少的，穩(wěn)定性差的疫苗注射后所產(chǎn)生的抗體滴度和接續(xù)時(shí)間必然受影響。

1.7 單價(jià)苗和多價(jià)苗

從實(shí)際使用效果來(lái)看，單價(jià)苗比多價(jià)苗的免疫保護(hù)合格率普遍要高，是否是由于相同單位劑量下單價(jià)苗抗原含量高還是因?yàn)槎鄡r(jià)苗內(nèi)抗體產(chǎn)生的相互影響。由于口蹄疫病毒O型、Asia-1型和A型之間的交叉免疫性很小，在抗體的產(chǎn)生和衰退過(guò)程中，幾種抗體的變化是否一致，是否存在不同型的抗原間相互干擾或免疫細(xì)胞對(duì)兩種抗原同時(shí)刺激的選擇性，目前還沒有一個(gè)明確說(shuō)法。

1.8 效力測(cè)定

疫苗效力測(cè)定一般采用直接動(dòng)物攻毒測(cè)定疫苗保護(hù)率，至少3／4免疫動(dòng)物獲得攻毒保護(hù)，則該疫苗合格。但在實(shí)踐中，每一批次都進(jìn)行攻毒試驗(yàn)必然會(huì)大幅增加疫苗的生產(chǎn)成本，因此，近年逐漸使用微量血清中和試驗(yàn)、液相阻斷ELISA、乳鼠保護(hù)試驗(yàn)等方法替代本動(dòng)物攻毒試驗(yàn)對(duì)疫苗進(jìn)行效力評(píng)估。而且研究表明，攻毒保護(hù)率與微量血清中和試驗(yàn)、液相阻斷ELISA和乳鼠保護(hù)試驗(yàn)所測(cè)定的抗體水平具有較高的相關(guān)性。所以，不同疫苗評(píng)估方法將造成出廠疫苗質(zhì)量的不一，從而引起免疫效果的不同。

1.9 抗原含量

在進(jìn)行豬口蹄疫免疫時(shí)，疫苗選擇很關(guān)鍵，普通苗好還是濃縮苗好，從文獻(xiàn)資料和實(shí)際應(yīng)用當(dāng)中可以看出，口蹄疫疫苗中的抗原量決定著疫苗的免疫效果，濃縮滅活苗單位體積中的抗原量比普通苗高5～10倍，抗原量越高，免疫反應(yīng)越快，免疫持續(xù)期越長(zhǎng)。

2.非疫苗質(zhì)量方面的因素

2.1 免疫程序

合理的免疫程序能最大限度地發(fā)揮疫苗的性能，通過(guò)多年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)證明，除弱毒疫苗只需一次免疫外，現(xiàn)在的滅活疫苗一次免疫效果始終不理想。一般情況下一次免疫后，血清抗體效價(jià)較低且持續(xù)時(shí)間短，不足以抵抗口蹄疫病毒的攻擊；二次免疫后，抗體水平大大提高，免疫持續(xù)期也較長(zhǎng)，免疫保護(hù)期可達(dá)6個(gè)月以上。從免疫學(xué)角度看，動(dòng)物機(jī)體首次接觸外來(lái)抗原后，產(chǎn)生的抗體以IgM為主，IgM抗體有5個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，可以在短期內(nèi)中和大量抗原，但是它與抗原的結(jié)合力較弱，在體內(nèi)維持的時(shí)間不長(zhǎng)，且不穩(wěn)定；二次接觸相同抗原后，記憶細(xì)胞迅速激活，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平的IgG抗體。摸清疫苗在動(dòng)物體的抗體動(dòng)態(tài)變化規(guī)律、疫苗在免疫抗體水平高低和持續(xù)期長(zhǎng)短上的差異以及掌握動(dòng)物機(jī)體健康狀態(tài)，根據(jù)不同動(dòng)物、不同年齡、不同豬場(chǎng)、不同疫苗來(lái)確定最適免疫程序。

2.2 母源抗體

豬、牛、羊出生后都能從注射過(guò)口蹄疫疫苗的母體獲得不同程度的母源抗體水平，但如果沒有及時(shí)進(jìn)行疫苗免疫，一段時(shí)間(如：新生仔豬30日齡左右，新生犢牛80日齡左右，新生羔羊30日齡左右)之后抗體水平就無(wú)法抵抗強(qiáng)毒的攻擊。如果參考斷乳日期并綜合分析后確定首免時(shí)間，應(yīng)會(huì)有更好的免疫效果，因?yàn)橐坏嗳?，新生?dòng)物母源抗體滴度隨即下降。

2.3年齡差異

不同年齡動(dòng)物免疫口蹄疫疫苗后抗體消長(zhǎng)情況不同，青年動(dòng)物在免疫后抗體維持時(shí)間較長(zhǎng)，而成年動(dòng)物和幼年動(dòng)物相對(duì)較短。這可能是由于青年動(dòng)物的體質(zhì)和免疫應(yīng)答比成年動(dòng)物和幼年動(dòng)物好。免疫時(shí)應(yīng)根據(jù)具體情況選擇免疫程序，不能為了省事就大小動(dòng)物一起免疫，因?yàn)檫@樣不僅造成人力、物力和財(cái)力的浪費(fèi)，還會(huì)影響免疫效果。

2.4 不同動(dòng)物

豬、牛、羊由于種類、品種不同，注射疫苗后產(chǎn)生抗體的情況也不同。山羊產(chǎn)生抗體的比例較高，牛次之，豬最差。

2.5 注射劑量

實(shí)際注射劑量的準(zhǔn)確性直接會(huì)影響疫苗免疫后的效果，嚴(yán)格按照疫苗使用說(shuō)明書中的劑量注射，確保注射到動(dòng)物體內(nèi)的疫苗劑量達(dá)到要求。注射前搖動(dòng)疫苗瓶，以免吸取疫苗時(shí)疫苗不均勻，注射時(shí)注射器和針頭(或塑料軟管)等會(huì)殘留一些疫苗，因此抽吸疫苗時(shí)在準(zhǔn)確劑量的基礎(chǔ)上多吸10%左右，保證實(shí)際注射量。

2.6 多種疫苗同時(shí)注射

生產(chǎn)中，由于需要免疫的疫病種類很多，有時(shí)會(huì)將口蹄疫疫苗與其他疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射(切不可混合后注射)，以節(jié)省人力和物力。但多種疫苗同時(shí)注射，是否會(huì)相互干擾各種疫苗抗體的產(chǎn)生，是否存在著順序競(jìng)爭(zhēng)、分子間競(jìng)爭(zhēng)；滅活疫苗與弱毒苗同時(shí)注射，滅活苗是否被抑制。如果以上問(wèn)題沒有確切的答案，在生產(chǎn)中必須同時(shí)注射多種疫苗時(shí)一定要注意，因?yàn)檫@可能對(duì)抗體的產(chǎn)生造成不利影響，容易造成免疫效果不好或免疫失敗。

2.7 接種途徑

在口蹄疫的免疫中，多數(shù)廠家推薦的均為肌肉注射，只有弱毒疫苗采用噴霧免疫。肌肉注射時(shí)不同的動(dòng)物注射部位不同，牛選擇頸部三角區(qū)的中央，羊選擇頸部中1／3處，豬在耳后三指處。近年來(lái)，中獸醫(yī)學(xué)者提出穴位(多為后海穴)注射免疫，并且在實(shí)踐中得到一定的認(rèn)可，他們認(rèn)為穴位注射免疫比肌肉注射更容易激發(fā)動(dòng)物機(jī)體的免疫系統(tǒng)，起到免疫放大作用，產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫保護(hù)力，而且安全性高于肌肉注射。但穴位注射效果的確實(shí)性和可操作性仍需進(jìn)一步研究。

2.8 無(wú)菌操作

由于注射器械、針頭消毒不徹底或注射部位消毒不嚴(yán)，接種時(shí)沒有一畜一針(頭)，致使動(dòng)物接種后出現(xiàn)嚴(yán)重的應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)菌感染和疾病傳播，影響免疫效果。

2.9 疫苗保存

完善的疫苗冷鏈體系是有效免疫的重要保證，運(yùn)輸、存放時(shí)溫度達(dá)不到疫苗保存要求而勉強(qiáng)保存或突然停電使保存溫度快速上升，造成疫苗破乳或抗原失活，這些都會(huì)影響疫苗免疫效果。

2.10 防疫意識(shí)普及

要做好群眾的口蹄疫免疫預(yù)防宣傳工作，由于口蹄疫疫苗容易引起免疫反應(yīng)甚至導(dǎo)致個(gè)別死亡，部分地區(qū)因免疫反應(yīng)死亡牲畜的補(bǔ)償工作不到位，使群眾對(duì)防疫工作產(chǎn)生抵觸情緒拒絕免疫，甚至與防疫員達(dá)成某種默契，不打針就登記免疫。因此，要加大(中華人民共和國(guó)動(dòng)物防疫法)的宜傳力度，讓廣大養(yǎng)殖戶充分認(rèn)識(shí)口蹄疫防制的重要性和必要性，不能因?yàn)楣ぷ髦械囊稽c(diǎn)失誤，影響整個(gè)防疫大局。

2.11 其他

疫苗接種前后7d內(nèi)使用抗病毒藥物及其他藥物或發(fā)生疾病等都可能影響機(jī)體免疫球蛋白的產(chǎn)生。