不同pH條件下Cr6+對3種藻的毒性效應(yīng)

趙娜，朱琳，馮鳴鳳

南開大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院 污染過程與環(huán)境基準(zhǔn)教育部重點實驗室，天津300071

1 引言（Introduction）

我國水生態(tài)基準(zhǔn)的制定研究零星、分散，當(dāng)前我國《地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》的標(biāo)準(zhǔn)值主要是參考美國各州、日本、前蘇聯(lián)、歐洲等國家及地區(qū)的水質(zhì)基準(zhǔn)值和標(biāo)準(zhǔn)值來確定，沒有考慮我國水生態(tài)系統(tǒng)的區(qū)域性特征（趙娜等，2010）.水生態(tài)體系的區(qū)域性特征如水文條件、氣候等多種因素都會影響污染物在水環(huán)境中的物理、化學(xué)和生物過程，因而可能導(dǎo)致不同的生態(tài)效應(yīng)，這就要考慮到水生態(tài)系統(tǒng)的差異性對水生態(tài)基準(zhǔn)的影響（孟偉等，2006）.因此，在制定水生態(tài)基準(zhǔn)時，開展環(huán)境因子對污染物毒性影響的研究是十分必要的.

鉻（Cr）在環(huán)境中廣泛分布，并且廣泛用于涂料、金屬制造、合金和制革等工業(yè)生產(chǎn)中（王大勇等，2007）.鉻的毒性與其存在的狀態(tài)有極大的關(guān)系，自然水體中主要以三價鉻（Cr3+）和六價鉻（Cr6+）的形式存在，Cr6+的毒性較強，約為Cr3+的100倍，Cr6+具有強致癌變、致畸變、致突變作用（Vajpayee et al.,2000;徐衍忠等，2002）.有調(diào)查顯示，Cr6+在我國的十大流域片都存在著不同程度的污染（胡必彬，2003）.在水生系統(tǒng)及水生食物鏈中，藻類作為水生動物的食物及氧氣來源，占有重要位置.重金屬通過各種途徑進入水體后，首當(dāng)其沖的受害者就是藻類生物，藻類相對細(xì)菌或水生動物而言，對毒物更敏感（邱昌恩，2006;Pascal et al.,2000）.目前已有很多關(guān)于重金屬對藻類影響的研究（Rai et al.,1981;Rojickova-Padrtova and Marsalek,1999）.小球藻、斜生柵藻和銅綠微囊藻是典型的代表藻種，廣泛存在于我國的水體中，對其的研究已有很多報道（王莉等，2009;魏群等，2008;楊州等，2005）.

OECD（theOrganizationforEconomicCooperation and Development）提出的淡水藻生長抑制實驗規(guī)范（OECD,2006）目前已被廣泛應(yīng)用于研究污染物對藻類的毒性的實驗研究中，它已成為被國際公認(rèn)的進行金屬對藻類毒性風(fēng)險評價的實驗規(guī)范之一（Heijerick et al.,2002）.本實驗按照OECD提出的淡水藻生長抑制實驗規(guī)范，選取72h藻生物量為指標(biāo)，研究了不同環(huán)境因子pH條件下，重金屬Cr6+對小球藻、斜生柵藻和銅綠微囊藻的毒性效應(yīng)，旨在為研究重金屬對水生生物及水生態(tài)系統(tǒng)的毒害作用以及我國水體質(zhì)量基準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù).

2 材料與方法（Materials and methods）

2.1 材料

2.1.1 藻種

小球藻（Chlorella vulgaris,FACHB-6）、斜生柵藻（Scenedesmus obliquus,FACHB-416）和銅綠微囊藻（Microcystis aeruginosa,FACHB-524）均購自中國科學(xué)院武漢水生生物研究所淡水藻種庫.

2.1.2 試劑

重鉻酸鉀（K2Cr2O7）以及配制營養(yǎng)液所用的藥品（見表1）均購自天津市北方天醫(yī)化學(xué)試劑廠，均為分析純.

2.2 實驗儀器

人工氣候箱，分光光度計，生物顯微鏡，凈化工作臺，血球計數(shù)板，高壓滅菌鍋，pH計，照度計.

2.3 藻類培養(yǎng)

采用BG11培養(yǎng)基，由中國科學(xué)院武漢水生生物研究所淡水藻種庫提供配方.由于EDTA會與重金屬形成螯合物，影響重金屬的毒性（Ma et al., 2003;Calace and Petronio,2004;Zhou and Zhang, 1997），所以培養(yǎng)液中去掉EDTA，培養(yǎng)液的組成見表1，pH=8.0.

表1 BG11培養(yǎng)基Table 1 BG11 nutrition solution

將100mL培養(yǎng)液裝入到250mL三角瓶中，用滅菌鍋120℃高壓滅菌20min，接種時在超凈工作臺上紫外滅菌20min.接入適量處于對數(shù)生長期的藻，放入光照培養(yǎng)箱，溫度（25±2）℃，光照4000~ 6000Lux，光暗比為 12h:12h.每天人工搖瓶 3~4次，隨機更換瓶的位置，使其受光均勻.

2.4 實驗方法

EC50被認(rèn)為是最精確的毒性效應(yīng)值，但是它僅僅能反映不同毒物的毒性大小或者不同受體對毒物的耐受性大小，而不能用作安全暴露濃度. OECD曾推薦用NOEC和EC05、EC10或EC20置信區(qū)間的下限來作為安全暴露基準(zhǔn)濃度（Isnard et al., 2001）.NOEC（No Observed Effect Concentrations）是指毒性作用與對照組無顯著差異的最大處理濃度.有研究指出，在以NOEC為毒性效應(yīng)值時，應(yīng)該同時給出最小觀察效應(yīng)值（Van der Hoeven et al.,1998）， 即 LOEC（LowestObserved Effect Concentrations）（與對照組有顯著差異的最小濃度）.

采用國際通用的“瓶法”，嚴(yán)格按照OECD-201淡水藻生長抑制實驗指南（OECD,2006），以72h藻生物量為測試終點，計算比生長率和抑制率，采用SPSS 13.0對結(jié)果進行方差分析（ANOVA），采用多重比較Dunnett-t檢驗確定Cr6+對小球藻、斜生柵藻和銅綠微囊藻產(chǎn)生效應(yīng)的NOEC和LOEC（VanderHoeven,1997;周永欣等，1993;王長友等，2007;莊德輝和周晏敏，1994）并對結(jié)果進行回歸分析，得出EC10和EC20.

其中，μ表示比生長率，d-1；Xj表示第j天的初始藻細(xì)胞數(shù)，mL-1，Xi表示第i天的藻細(xì)胞數(shù)，mL-1；ti某時段初始時間，d；tj表示某時段結(jié)束時間，d.

其中，I為抑制率；μc為對照組的比生長率，μt為處理組的比生長率.

2.5 預(yù)備試驗

2.5.1 繪制OD-N標(biāo)準(zhǔn)曲線

表征藻生物量的方法有很多，本文以光密度（OD）值來代表藻細(xì)胞密度（N）.由于在紫外波段干擾比較多，所以在600~740nm波段對小球藻、斜生柵藻和銅綠微囊藻進行全波段掃描，3種藻在690nm附近有最大吸收峰.

取一定量的藻在顯微鏡下血球計數(shù)板計數(shù)，并測定其吸光值，建立藻細(xì)胞密度（N）與光密度值（OD690）間的線性關(guān)系（pH=8.0），見圖1.回歸方程：小球藻，y=2923.775x-8.480，R2=0.996；斜生柵藻，y=2749.501x+13.246，R2=0.993；銅綠微囊藻，y=3548.449x-9.075，R2=0.999.

2.5.2 影響濃度范圍的確定

用重鉻酸鉀配置鉻貯備液2mg·L（離子濃度），過0.45μm濾膜備用.向滅菌后的100mL培養(yǎng)液中加入不同體積的重鉻酸鉀貯備液，轉(zhuǎn)接處于對數(shù)生長期的藻，置于人工氣候箱培養(yǎng).每24h測定藻的吸光值，觀察藻對Cr6+的敏感度以及Cr6+對藻產(chǎn)生影響的濃度范圍，開始正式實驗.

2.6 正式試驗

2.6.1 pH對藻種生長的影響

自然水體的pH值范圍一般是中性偏堿，本實驗設(shè)定pH為7.0±0.2、8.0±0.2和9.0±0.2（以下簡寫為pH=7.0、8.0和9.0），用HCl和NaOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH.接種一定量處于對數(shù)生長期的藻，每個pH設(shè)3個平行，置于人工氣候箱中，每隔24h測定藻的光密度值，計算72h的比生長率.

2.6.2 pH對Cr6+毒性的影響

在pH為7.0、8.0和9.0的培養(yǎng)液中，加入不同體積的Cr6+貯備液，充分搖勻后接入一定量處于對數(shù)生長期的藻.設(shè)置Cr6+的處理濃度和一個空白，處理組的 Cr6+的濃度分別為 0.0001、0.001、0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、0.75、1.0和1.5mg·L（離子濃度），每個處理組設(shè)3個平行.放入培養(yǎng)箱中，測定72h時藻的光密度值（OD），并計算Cr6+對藻生長的抑制率，以及 Cr6+產(chǎn)生效應(yīng)的 NOEC、LOEC、EC10和EC20值.

3 結(jié)果（Results）

3.1 不同pH條件下藻的生長

表2比較了不同pH條件下，小球藻、斜生柵藻和銅綠微囊藻在72h時的比生長率.可見，小球藻在pH=7.0時生長率達(dá)到最大，說明生長最好，斜生柵藻和銅綠微囊藻在pH=9.0時生長最好.

表2 不同pH下72h藻的比生長率Table 2 The 72h specific growth rates of the alga at different pH levels

由圖2可見，在pH=7.0時，小球藻在48h和72h時的生長顯著高于pH=8.0和9.0（p<0.01）；在48h和72h時，斜生柵藻在pH=9.0時生長顯著高于pH=7.0（p<0.01），但與pH=8.0相比沒有達(dá)到顯著性差異；在72h時，銅綠微囊藻在pH=8.0和9.0時生長顯著高于pH=7.0（p<0.01），且pH=9.0的生長顯著高于pH=8.0（p<0.05）.

3.2 不同pH下Cr6+的毒性效應(yīng)

水體中三價鉻和六價鉻可以發(fā)生相互的轉(zhuǎn)化，有研究表明隨著pH的增大，六價鉻的還原作用逐漸降低，當(dāng)pH≥6時，六價鉻的光還原反應(yīng)基本消失（鄧琳等，2008）.本工作中依據(jù)《水和廢水監(jiān)測分析方法》（國家環(huán)境保護總局《水和廢水監(jiān)測分析方法》編委會，2006），采用二苯碳酰二肼法，測定反應(yīng)開始和結(jié)束時水體中的Cr6+的含量.結(jié)果顯示Cr6+基本沒有被還原.因此本實驗的結(jié)果可以被認(rèn)為都是Cr6+的毒性效應(yīng).

在72h時測定藻的光密度值，計算各個濃度Cr6+對藻生長的抑制率，以劑量-效應(yīng)關(guān)系作圖（見圖3），并對結(jié)果進行統(tǒng)計分析，得出不同pH條件下的NOEC、LOEC、EC10和EC20，結(jié)果列于表3、表 4和表5.

表3 不同pH值下小球藻的NOEC、LOEC、EC10和EC20Table 3 The NOEC,LOEC,EC10and EC20of Chlorella vulgaris at different pH levels

表4 不同pH值下斜生柵藻NOEC、LOEC、EC10和EC20Table 4 The NOEC,LOEC,EC10and EC20of Scenedesmus obliquus at different pH levels

表5 不同pH值下銅綠微囊藻的NOEC、LOEC和EC20Table 5 The NOEC,LOEC and EC20of Microcystis aeruginosa at different pH levels

由圖3可見，對于小球藻而言，Cr6+在低濃度時產(chǎn)生了刺激效應(yīng)，當(dāng)Cr6+濃度達(dá)到0.1mg·L-1，在pH=8.0時對小球藻產(chǎn)生了顯著的抑制作用；而pH=7.0和9.0時Cr6+對小球藻產(chǎn)生了刺激作用，且隨著濃度的增大，抑制作用增強；當(dāng)Cr6+濃度達(dá)到0.5mg·L-1時，對小球藻產(chǎn)生的抑制率分別為1.33%、4.96%和 2.99%，Cr6+對小球藻的毒性在pH=7.0時最小，在pH=8.0時最大；對于斜生柵藻而言，Cr6+濃度達(dá)到0.5mg·L-1時，在pH=7.0、8.0和9.0條件下產(chǎn)生的抑制率分別為12.17%、8.02%和5.87%，Cr6+對斜生柵藻的毒性在pH=9.0時最小，在pH=7.0時最大；對于銅綠微囊藻而言，Cr6+濃度達(dá)到0.5mg·L-1時，在pH=7.0、8.0和9.0條件下產(chǎn)生的抑制率分別為 58.34%、55.78%和52.75%，Cr6+對銅綠微囊藻的毒性在pH=9.0時最小，在pH=7.0時最大.

由表3可見，pH=7.0時，Cr6+對小球藻的毒性效應(yīng)值NOEC、LOEC、EC10和EC20最大，這說明在pH=7.0時，Cr6+對小球藻的毒性效應(yīng)最小，而在pH=8.0時，效應(yīng)值最小，說明其毒性最大；同樣，由表4可見，pH=9.0時，Cr6+對斜生柵藻的毒性最小，pH=7.0時毒性最大；由表5可見，pH=9.0時，Cr6+對銅綠微囊藻的毒性最小，pH=7.0時毒性最大.以上結(jié)果表明，在藻的最適生長pH條件下，Cr6+對藻的毒性最小，即在最適pH條件下，藻對Cr6+的抗性最大.

比較以上3個表中的結(jié)果，同樣在最適生長pH條件下，毒性效應(yīng)值EC20大小順序為：銅綠微囊藻（pH=9.0）<斜生柵藻（pH=9.0）<小球藻（pH= 7.0）；同樣在生長較差的pH條件下，毒性效應(yīng)值EC20大小順序為：銅綠微囊藻（pH=7.0）<斜生柵藻（pH=7.0）<小球藻（pH=9.0），這說明Cr6+對銅綠微囊藻的毒性要比對小球藻和斜生柵藻的大，即銅綠微囊藻對Cr6+更加敏感.

4 討論（Discussion）

由表2和圖2可見，小球藻、斜生柵藻和銅綠微囊藻在不同pH條件下，生長速度不同.藻類生長與藻本身的生理特點以及溫度、光照、營養(yǎng)鹽、其它生物、pH等諸多環(huán)境因素有關(guān)，水體pH是一個重要的生態(tài)因子，與藻類生長關(guān)系密切.不同藻類有一定的pH適應(yīng)范圍，即使同一屬的兩種藻，在不同pH下，其生長也可能有很大差別（劉春光等，2005）.水體pH主要從兩方面對藻生長產(chǎn)生影響，一方面改變環(huán)境酸堿度，酸性太強（H+濃度高）或堿性太強（OH-濃度高）都會對藻細(xì)胞產(chǎn)生傷害，只有在適宜的酸堿度范圍內(nèi)，藻細(xì)胞才能正常生長繁殖；另一方面水體pH是影響碳酸鹽平衡系統(tǒng)以及不同形態(tài)無機碳分配關(guān)系，從而對藻類生長產(chǎn)生影響（許海等，2009）.有資料表明，小球藻的最適pH值為6.0~7.0（張麗君等，2001），斜生柵藻的最適pH值為9.0~10.0（許海等，2009），銅綠微囊藻的最適pH值為8.5~9.5（金相燦等，2004），這與本實驗結(jié)果一致.

圖3比較了不同pH值條件下，Cr6+對小球藻、斜生柵藻和銅綠微囊藻的抑制率.在不同的pH條件下，相同濃度的Cr6+對藻產(chǎn)生毒性作用不同，且有種類差異，表明pH對Cr6+的毒性效應(yīng)產(chǎn)生影響. Cr6+對不同藻產(chǎn)生的毒性強度不同，在較大濃度下，都產(chǎn)生了顯著的抑制作用，且都隨著濃度的增大，抑制效應(yīng)增強.結(jié)果表明，在藻的最適pH條件下，Cr6+的毒性最小，即在最適pH條件下，藻對Cr6+的抗性最大.且Cr6+對銅綠微囊藻的毒性大于小球藻和斜生柵藻的毒性，銅綠微囊藻對Cr6+更為敏感，這同許多研究結(jié)果一致（鄭春艷和張庭廷，2008;Ma,2005）.

重金屬對藻類的毒性作用取決于金屬元素的形態(tài)、濃度、環(huán)境因素和重金屬元素之間的相作用，也取決于實驗藻種及藻類細(xì)胞的生理生化過程.其中影響重金屬毒性的環(huán)境因素主要有pH值、溫度、光照、溶氧及螯合劑等（高為和張燁，2009;姜彬慧和林碧琴，2000）.以往的研究多注意到水體pH的變化會影響金屬的化學(xué)形態(tài)，從而導(dǎo)致其毒性有所不同（Kim et al.,1999;Park et al., 2009;孔繁翔等，1997;Peterson,1990）.本研究發(fā)現(xiàn)即使Cr6+的形態(tài)在pH值為7~9的范圍內(nèi)無明顯變化，也會造成對不同藻種的毒性效應(yīng)不同，這說明藻本身的生理特性也是影響重金屬毒性的主要因素之一.本實驗中，小球藻、斜生柵藻和銅綠微囊藻的最適生長pH分別是 7.0、9.0和 9.0，而Cr6+在最適pH條件下，對這3種藻的毒性分別也是最小，表明藻生長較好時，對毒物的抗性較大.

一般在確定污染物的環(huán)境基準(zhǔn)時，只考慮對所選擇典型代表生物的毒效應(yīng)，很少一并考慮環(huán)境因素.但從生態(tài)學(xué)角度，環(huán)境因素的影響不可忽視.我國幅員遼闊，不同流域/區(qū)域水環(huán)境生態(tài)特征、水環(huán)境承載力等都有很大的差異（孟偉等，2006）.由于水生態(tài)體系的局域性特征如水文條件、氣候、群落的生態(tài)機構(gòu)等多種因素都會影響污染物在水環(huán)境中的物理、化學(xué)和生物過程，因而可能導(dǎo)致不同的生態(tài)效應(yīng).因此，在制定我國的水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)時，要充分考慮到環(huán)境因子對污染物毒性的影響.

Calace N,Petronio B M.2004.The role of organic matter on metal toxicity and bio-availability［J］.Annali Di Chimica,94（7-8）:487-493

Deng L,Yang F,Deng N S.2008.Photoreduction of chromium（Ⅵ）in aqueous solutions with chlorella vulgar is under metal halide lamps［J］.Journal of Southeast University（Natural Science Edition）,38（6）:1044-1048（in Chinese）

Editorial Board of State Environmental Protection Administration Water and Wastewater Monitoring Analysis Method.2006.Metals and their compounds［M］.Water and Wastewater Monitoring Analysis Method（Fourth Edition）.Beijing:China Environmental Science Press,344-349（in Chinese）

Gao W,Zhang Y.2009.Toxic effect of heavy metal in leaching solution of fly ash from solid waste combustion to Alga［J］. EnvironmentalScience and Technology,22（1）:24-26（in Chinese）

Hu B B.2003.Status quo of water pollution and main characteristics in ten watersheds of China［J］.Chongqing Environmental Sciences,25（6）:15-17（in Chinese）

Heijerick D G,De Schamphelaere K A C,Janssen C R.2002. Biotic ligand model development predicting Zn toxicity to the alga Pseudokirchneriella subcapitata:possibilities and limitations［J］.Comparative Biochemistry and Physiology C-Toxicology& Pharmacology,133（1-2）:207-218

Isnard P,Flammarion P,Roman G,BabutM,Bastien Ph, Bintein S,Essermeant L,Ferard J F,Gallotti-Schmitt S,Saouter E,Saroli M,Thiebaud H,Tomassone R,Vinimian E.2001. Statistical analysis of regulatory ecotoxicity tests［J］.Chemosphere, 45（4-5）:659-669

Jin X C,Li Z C,Zheng S F,Yang S F,Hu X Z,Chu Z S. 2004.Studie s on the growth characteristics of Microcystis aerugino sa［J］.Research of Environmental Sciences,17（s1）: 52-61（in Chinese）

Jiang B H,Lin B Q.2000.Toxicologicaleffectsofheavy metalson alga［J］.JournalofLiaoning University（Natural Sciences Edition）,27（3）:281-287（in Chinese）

Kim S D,Ma H Z,Allen H E,Cha D K.1999. ToxicityInfluence of dissolved organic matter on the toxicity of copper to Ceriodaphnia dubia:Effect of complexation kinetics［J］.Environmental Toxicology and Chemistry,18（11）:2433-2437

Kong F X,Chen Y,Zhang M.1997.Effects of nickel,zinc and aluminum on the growth and enzyme activities of green alga Selenastrum capricornutum［J］.Acta Scientiae Circumstantiae,17（2）:193-198（in Chinese）

Liu C G,Jin X C,Sun L,Zhong Y,Dai S G,Zhuang Y Y. 2005.Effects of pH on growth and species changes of algae in freshwater［J］.Journal of Agro-Environment Science,24（2）: 294-298（in Chinese）

Meng W,Zhang Y,Zheng B H.2006.The quality criteria, standards of water environment and the water pollutant control strategy on watershed［J］.Research of Environmental Sciences, 19（3）:1-6（in Chinese）

Ma M,Zhu W Z,Wang Z J,Witkamp G J.2003. Accumulation,assimilation and growth inhibition of copper on freshwater alga（Scenedesmus subspicatus 86.81 SAG）in the presence of EDTA and fulvic acid［J］.Aquatic Toxicology,63（3）:221-228

Ma J Y.2005.Differential sensitivity of three cyanobacterial and five green algal species to organotins and pyrethroids pesticides［J］.Science of the Total Environment,341（1-3）:109-117

OECD.2006.OECD Guidelines for the Testing ofChemicals, Freshwater Alga and Cyanobacteria,Growth Inhibition Test-201［S］.OECD

Pascal R,Marc L,Christos P,Gilles R,Erwan S,Sophie G S, Herve′T,Paule V.2000.Comparison of four chronic toxicity tests using algae,bacteria,and invertebrates assessed with sixteen chemicals［J］.Ecotoxicology and Environmental Safety,47（2）: 186-194

Park E J,Jo H J,Jung J H.2009.Combined effects of pH, hardness and dissolved organic carbon on acute metal toxicity to Daphnia magna［J］.Journal of Industrial and Engineering Chemistry,15（1）:82-85

Peterson H G.1990.Toxicity testing using a chemostat grown green alga, Selenastrum capricornutum ［J］. Plant Toxicity Assessment,2:1058-1189

Qiu C E.2006.Overview of the toxic effects of six common heavy metals on algae［J］.JournalofChongqing Medical University,31（5）:776-778（in Chinese）

Rai L C,Gaur J P,Kumar H D.1981.Phycology and heavymetal pollution［J］.Biological Reviews of the Cambridge Philosophical Society,56（2）:99-151

Rojickova-Padrtova R,Marsalek B.1999.Selection and sensitivity comparisons of algal species for toxicity testing［J］.Chemosphere, 38（14）:3329-3338

Vajpayee P,TripathiR D,Rai U N,Ali M B,Singh S N. 2000.Chromium（VI）accumulation reduces chlorophyll biosynthesis, nitrate reductase activity and protein content in Nymphaea alba L.［J］.Chemosphere,41（7）:1075-1082

Van der Hoeven N.1998.Power analysis for the NOEC:What is the probability ofdetecting smalltoxic effects on three different species using the appropriate standardized test protocols？［J］.Ecotoxicology,1998,7（6）:355-361

VanderHoeven N.1997.How to measure no effect,part III: Statisticalaspects of NOEC,ECxand NEC estimates［J］. Environmentrics,8（3）:255-261

Wang D Y,Hu Y O,Xu X M.2007.Comparison of Multi-Biological Toxicities between Chromium Exposed Caenorhabditis elegans and Their Progeny［J］.Asian Journal of Ecotoxicology,2（3）:297-303（in Chinese）

Wang L,Tang L Y,WeiC X,Liu D D,Yang X.2009. Ecological toxicity of di（2-Ethylhexyl）phthalate on Scenedesmus Obliquus［J］.Asian Journal of Ecotoxicology,4（3）:452-456（in Chinese）

Wei Q,Hu Z Q,Li G B,Xiao B,Tao M P,Sun H.2008. Effects of chromium on the growth of microalgae［J］.Ecology and Environment,17（1）:12-15（in Chinese）

Wang C Y,Wang X L,Sun B Y,Su R G.2007.In situ test of copper on Skeletonema costatuma ecotoxicological effect［J］. China Environmental Science,27（5）:703-706（in Chinese）

Xu Y Z,Qin X N,Liu X H,Zhang N X,Zhou Y L.2002. The study ofchromium pollution and ecologicaleffects［J］. EnvironmentalScience & Technology,25（s1）:8-28（in Chinese）

Xu H,Liu Z P,Yuan L,Yang L Z.2009.Effect of pH on growth of several freshwater algae［J］.Environmental Science& Technology,32（1）:27-30（in Chinese）

Yang Z,Kong F X,Shi X L,Yang J X.2005.Effects of Brachionus calyciflorus culture media filtrate on Microcystis aeruginosa,Scenedesmus obliquus and Chlorella vulgaris colony formation and growth［J］.Chinese Journal of Applied Ecology, 16（6）:1138-1141（in Chinese）

Zhou Y X,Zhang Z S.1989.Toxicity Test Method for Aquatic［M］.Beijing:Agriculture Press,170-191（in Chinese）

Zhou Y X,Zhou R Z,Xu L H.1993.Toxicity of copper to Javenile Loach［J］.Acta Hydrobiologica Sinica,17（3）:240-245（in Chinese）

Zhuang D H,Zhou Y M.1994.Toxicity of K2Cr2O7to Geriodaphnia Auadrangula［J］.Acta Scientiae Circumstantiae,14（3）:335-340（in Chinese）

Zhang L J,Yang R D,Xiao H.2001.The hetertrophic culture of Chlorella and optimization of growth condition［J］.Guangxi Flora,21（4）:353-357（in Chinese）

Zhao N,Feng M F,Zhu L.2010.Toxic effects chromium（Cr6+）on Chlorella vulgaris and Scenedesmus obliquus at different pH［J］.Journal of Southeast University（Medical Science Edition）, 29（4）,382-386（in Chinese）

Zheng C Y,Zhang T Y.2008.Growth inhibition of ellagic acid on Microcystis aeruginosa and Scenedesmusobliquus［J］.Journal of Anhui Normal University（Natural Science）,31（5）:73-76（in Chinese）

中文參考文獻

鄧琳,楊芳,鄧南圣.2008.小球藻引發(fā)水中Cr（Ⅵ）的光化學(xué)還原研究［J］.東南大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）,38（6）:1044-1048

國家環(huán)境保護總局《水和廢水監(jiān)測分析方法》編委會.2006.金屬及其化合物［M］.水和廢水監(jiān)測分析方法（第四版）.北京：中國環(huán)境科學(xué)出版社，344-349

高為,張燁.2009.垃圾焚燒飛灰浸出液中重金屬對藻類的毒性［J］.環(huán)境科技,22（1）:24-26

胡必彬.2003.我國十大流域片水污染現(xiàn)狀及主要特征［J］.重慶環(huán)境科學(xué),25（6）:15-17

金相燦,李兆春,鄭朔方,楊蘇文,胡小貞,儲昭升.2004.銅綠微囊藻生長特性研究［J］.環(huán)境科學(xué)研究,17（s1）:52-61

姜彬慧,林碧琴.2000.重金屬對藻類的毒性作用研究進展［J］.遼寧大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）,27（3）:281-287

孔繁翔,陳穎,章敏.1997.鎳、鋅、鋁對羊角月芽藻（Selenastrum capricornutum）生長及酶活性影響研究［J］.環(huán)境科學(xué)學(xué)報,17（2）:193-198

劉春光,金相燦,孫凌,鐘遠(yuǎn),戴樹桂,莊源益.2005.pH值對淡水藻類生長和種類變化的影響［J］.農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報, 2005,24（2）:294-298

孟偉,張遠(yuǎn),鄭丙輝.2006.水環(huán)境質(zhì)量基準(zhǔn)、標(biāo)準(zhǔn)與流域水污染物總量控制策略［J］.環(huán)境科學(xué)研究,19（3）:1-6

邱昌恩.2006.六種常見重金屬對藻類的毒性效應(yīng)概述［J］.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,31（5）:776-778

王大勇,胡亞歐,許雪梅.2007.鉻暴露導(dǎo)致的秀麗線蟲多重毒性的世代間比較［J］.生態(tài)毒理學(xué)報,2（3）:297-303

王莉,唐麗雅,魏晨曦,劉丹丹,楊旭.2009.鄰苯二甲酸二（2-乙基）己酯對斜生柵藻的生態(tài)毒性作用［J］.生態(tài)毒理學(xué)報,4（3）:452-456

魏群,胡智泉,李根保,肖波,陶梅平,孫浩.2008.鉻離子對藻類生長的影響［J］.生態(tài)環(huán)境,17（1）:12-15

王長友,王修林,孫百曄,蘇榮國.2007.銅對中肋骨條藻生態(tài)毒性效應(yīng)的現(xiàn)場實驗［J］.中國環(huán)境科學(xué),27（5）:703-706

徐衍忠,秦緒娜,劉祥紅,張乃香,周英蓮.2002.鉻污染及其生態(tài)效應(yīng)［J］.環(huán)境科學(xué)與技術(shù),25（s1）:8-28

許海,劉兆普,袁蘭,楊林章.2009.pH對幾種淡水藻類生長的影響［J］.環(huán)境科學(xué)與技術(shù),32（1）:27-30

楊州,孔繁翔,史小麗,楊家新.2005.萼花臂尾輪蟲培養(yǎng)濾液對銅綠微囊藻、斜生柵藻和小球藻群體形成及生長的影響［J］.應(yīng)用生態(tài)學(xué)報,16（6）:1138-1141

周永欣,周仁珍,徐立紅.1993.銅對大鱗泥鰍幼魚的毒性［J］.水生生物學(xué)報,17（3）:240-245

莊德輝,周晏敏.1994.重鉻酸鉀對方形網(wǎng)紋搔的毒性研究［J］.環(huán)境科學(xué)學(xué)報,14（3）:335-340

趙娜,馮鳴鳳,朱琳.2010.不同pH值條件下Cr6+對小球藻和斜生柵藻的毒性效應(yīng)［J］.東南大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）,29（4）, 382-386

張麗君,楊汝德,肖恒.2001.小球藻的異養(yǎng)生長及培養(yǎng)條件優(yōu)化［J］.廣西植物,21（4）:353-357

鄭春艷,張庭廷.2008.鞣花酸對銅綠微囊藻和斜生柵藻的生長抑制作用［J］.安徽師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版）,31（5）: 73-76 ◆