使用雙三元梯度液相色譜(DGLC)——讓工作變得更簡單

使用雙三元梯度液相色譜(DGLC)
——讓工作變得更簡單

戴安(DIONEX)園地

液相色譜技術(shù)在經(jīng)過長時間有關(guān)速度的討論后,開始逐漸回歸到關(guān)注液相的實用,說到底,一個技術(shù)的好壞優(yōu)劣還是要看它解決實際問題的能力 .美國戴安公司一向以離子色譜著稱于世,近十年開始在液相色譜技術(shù)方面也不斷推出新的技術(shù),UltiMate3000雙三元梯度液相色譜(DGLC)就是在近年來推出的最實用的液相色譜技術(shù) .

戴安雙三元梯度系統(tǒng)是在一個儀器箱內(nèi)放置兩臺三元梯度泵,通過共用自動進樣器、柱溫箱、軟件和電腦達到兩套分析系統(tǒng)的功能,可以有以下的幾種組合方式:雙三元泵并聯(lián),雙三元泵串聯(lián),在線固相萃取,不同應用間切換,二維或多維色譜分析 .

雙三元梯度泵并聯(lián)使用:

一套雙梯度系統(tǒng)可以完成兩套單梯度系統(tǒng)的工作,共享自動進樣器,效率提高 100%.

雙三元梯度泵串聯(lián)使用:

兩個流路共用自動進樣器和檢測器:一個泵用于分析,另一個泵用于色譜柱再生,色譜柱在兩個流路間切換,從運行周期中減去沖洗及平衡色譜柱的時間,可縮短 20%—50%的運行時間 .

全自動在線固相萃取:

一個泵用于在線固相萃取,另一個泵用于色譜分析,吸附在 SPE柱的待分析物通過切換閥切換到分析流路中,可以將原來用 4—5h進行固相萃取前處理的樣品縮短到 20m in左右在線完成,凈化或濃縮樣品并直接分析.

不同應用間自動切換:

針對同時使用不同淋洗液 (正相和反相淋洗液)的用戶,可以通過兩個泵和兩個十通切換閥切換實現(xiàn) .可使用不同的溶劑組合,不同的色譜柱,通過變色龍 (Chrom eleon)軟件在兩個應用之間自動切換,不需要手工更換溶劑及色譜柱,適合在兩種不同應用間反復切換 .

二維或多維色譜分析:

二維或多維液相可以用來分析復雜的樣品以及高的峰容量,二維色譜可以是兩種不同分析機理的色譜法結(jié)合,比如一維是離子交換 (IEX),第二維為反相液相(RP-LC)或者是親和色譜與 RP-LC結(jié)合,儀器包括了所有二維所需的管路套盒和連接指導,變色龍軟件可實時監(jiān)控全部流程,樣品在第一根色譜柱上分離,與色譜柱選擇性相同的組分結(jié)合到柱上,通常得到一個單峰,然后這個組分被轉(zhuǎn)移到第二根色譜柱上分離分析 .

以上組合中最具有實用價值的方式是“全自動在線固相萃取”.利用這種組合方式,您可以實現(xiàn)復雜樣品的直接進樣,色譜分析,可以將原來需要用天來計算樣品前處理及色譜分析時間縮短到短短的幾十分鐘甚至十幾分鐘,對于水、油、血液、體液等等各種復雜的樣品基質(zhì),需要做的僅僅是:1.啟動儀器,2.得到結(jié)果 .

實例測定

實例為食用油中多環(huán)芳烴的在線固相萃取及液相色譜分析,可以簡單有效地完成食用油樣品中美國 EPA 610方法所列出的 12種多環(huán)芳烴類化合物的在線固相萃取-HPLC的分析 .

儀器條件:

UltiMate DPG 3600A泵 (帶脫氣機),UltiMate TCC-3200柱溫箱 (帶兩個六通閥),W PS 3000TSL自動進樣器,RF2000熒光劑監(jiān)測器,使用變色龍軟件控制儀器運行 .

色譜條件:

固相萃取柱:Ch rom Spher Pi,(3.0mm×80 mm,Varian),分析柱:Supelco PAH(4.6mm×250 mm),進樣體積80μl(使用 100μl進樣環(huán)),柱溫 30℃,自動進樣器溫度 40℃,流動相 A:水,B:乙腈,C:異丙醇 .

食用油樣品在線固相萃取和 HPLC分離實驗流程見圖 1到圖 3.

圖 1 泵A吸取異丙醇將樣品運送至固相萃取柱,在線富集,同時泵B平衡分析柱

圖 2 泵A吸取乙腈水溶液將異丙醇和油從萃取柱上沖干凈,同時仍使用泵B平衡分析柱

圖 3 將富集了被分析物的固相萃取柱切換到分析流路,從而實現(xiàn)樣品的在線富集和分析

圖 4為美國 EPA 610方法所列出的 12種多環(huán)芳烴類化合物的連續(xù) 7次進樣的標準色譜圖 .保留時間的 RSD在0.026%—0.072%之間,色譜峰面積的 RSD在 4.1%—6.7%之間 .圖 5為 3種食用油樣品的在線固相萃取-HPLC色譜圖.

圖 4 12種多環(huán)芳烴類化合物標準色譜圖

圖 5 3種食用油樣品的在線固相萃取-HPLC色譜圖

色譜峰:1.phenanthrene;2. an thracene;3. fluoran thene;4.pyrene;5.benzo[a]anth racene;6.chrysene;7. benzo[b]fluoranthene;8.benzo[k]fluoranthene;9. benzo[a]pyrene;10. dibenzo[a,h]anthracene;11.benzo[g,h,i]perylene;12.indeno[1,2,3-cd]pyrene;13.enzo[b]crysene(內(nèi)標物)