長春花組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)初探

吳全德 游建剛

（黑龍江省柴河林業(yè)局，黑龍江 海林 157131）

長春花[Catharanthus roseus(L.)G.Don]為夾竹桃科多年生草本或亞灌木花卉，既可用于城市園林地被，也可用于室內(nèi)盆栽觀賞[1]；該花卉又有很好的藥用價值，從中提取分離出長春堿、長春新堿、蛇根堿等100多種吲哚生物堿[2]，其中長春堿和長春新堿是目前應(yīng)用最廣泛的天然抗腫瘤藥物[3]。對長春花進(jìn)行組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)研究，可以在短時間內(nèi)獲得優(yōu)良品種的種苗，也可能提高其植株中生物堿的含量，為工業(yè)生產(chǎn)吲哚生物堿類藥用成分提供技術(shù)支撐。

1 試驗材料與方法

1.1 長春花植株無菌材料的獲得

采用生長健壯無病蟲害的長春花植株獲得的種子作為外植體。將曬好的長春花種子用蒸餾水浸種4h，用75%酒精消毒30s，放入濃度為1.1%有效氯的次氯酸鈉中消毒30min，然后無菌水沖洗3～5次，每次3min～5min，無菌濾紙吸干表面水分，再接種于1/2MS 培養(yǎng)基中，每瓶接種子20 粒，3個重復(fù)，10d 以后長出無菌苗。

1.2 培養(yǎng)條件與方法

誘芽培養(yǎng)基為MS+0.50mg/L 6-BA+0.06mg/L IBA。從種子長出的帶有2 片真葉的無菌苗，用剪刀剪出心芽 (帶2 片真葉)，接入誘芽培養(yǎng)基中，25d 后觀察誘芽情況。

試管苗增殖到一定數(shù)量后，選擇高度基本一致的單株不定芽接入生根培養(yǎng)基1/2MS+0.10mg/L IBA+0.20mg/L NAA 中，誘導(dǎo)生根，16d 后觀察發(fā)根情況。

以上培養(yǎng)基均加入7g/L 瓊脂和3%蔗糖，pH值5.6～5.8，接種完畢后將培養(yǎng)瓶置于25℃左右恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，光照條件為12h/d，濕度40%～70%進(jìn)行培養(yǎng)。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 無菌苗的生長與增殖

用種子繁殖無菌苗，種子的消毒至關(guān)重要，不同的消毒劑及消毒時間都會影響消毒效果。次氯酸鈉是長春花種子較好的消毒劑，用1.1%有效氯的次氯酸鈉消毒種子30min，種子發(fā)芽率達(dá)96.7%，而且沒有感染植株。

將帶有2 片真葉的無菌苗，用剪刀剪出心芽，接入誘芽培養(yǎng)基中，25d 后出芽，總出芽數(shù)135個，增殖系數(shù)達(dá)到4.83，而且苗壯，生長旺盛，葉色濃綠，芽增殖多?？梢?，MS+0.50mg/L 6-BA+0.06mg/L IBA+30g/L 蔗糖+7g/L 瓊脂是長春花芽增殖培養(yǎng)的最適培養(yǎng)基。

2.2 生根培養(yǎng)

芽增殖到一定數(shù)量后，將不定芽接入以1/2MS 為基本培養(yǎng)基，添加30g/L 蔗糖和7g/L 瓊脂的培養(yǎng)基中誘根，設(shè)置0.10mg/L IBA、0.20mg/L NAA 的生長素配比。接種7d 后開始發(fā)根，根系白色，長勢旺，無愈傷組織產(chǎn)生，也無新芽誘導(dǎo)，生根率高達(dá)90%以上，平均根數(shù)較多。說明該生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根效果最好。

2.3 煉苗及移栽

當(dāng)長春花的幼根在生根培養(yǎng)基上長到1～3cm時，去掉封口膜，移出培養(yǎng)室，于自然光溫室中煉苗3d 后，洗凈培養(yǎng)基，移栽到用2%甲醛水溶液消毒過的含水量為60%的基質(zhì)（腐殖土∶珍珠巖為 2∶1）中，覆蓋塑料薄膜保濕 5～7d，保持溫度25℃左右，濕度80%～90%，在移栽后7～9d 就開始發(fā)新葉。30d 后觀察統(tǒng)計，移栽成活率達(dá)92%。移栽至裝有營養(yǎng)土的營養(yǎng)缽中繼續(xù)煉苗25d 后，可植入大田。

3 結(jié)論

在植物組培快繁中，增殖系數(shù)和成苗率一直是人們關(guān)心的問題，只有增殖速度快，在生產(chǎn)實踐中才有應(yīng)用價值。只有選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞分裂素和生長素的濃度組合，才能取得較好的培養(yǎng)效果[4]。在長春花的組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)研究中，植物生長素6-BA 和IBA 對長春花芽誘導(dǎo)效果較明顯，MS+0.50mg/L 6-BA+0.06mg/L IBA+30g/L 蔗糖+7g/L 瓊脂培養(yǎng)基芽增殖效果最好。在生根培養(yǎng)的過程中，IBA 和 NAA 誘導(dǎo)的生根率高，且長勢好。因此，1/2MS+0.10mg/L IBA+0.20mg/L NAA+30g/L 蔗糖+7g/L 瓊脂為最佳生根培養(yǎng)基。培養(yǎng)所獲得的試管苗經(jīng)煉苗后，移栽成活率較高。

通過組織培養(yǎng)，從由種子長出的無菌苗取外植體到再生苗移栽到大田整個過程僅要50～60d，可快速、高效且低成本的解決長春花生產(chǎn)中所需的種苗問題。

[1]陳俊愉，程緒珂.中國花經(jīng)[M].上海：上海文化出版社，1990，484.

[2]中國科學(xué)院北京植物研究所.中國高等植物圖鑒：第3 冊.北京：科學(xué)出版社，1974.

[3]季字彬.中藥有效成分藥理與應(yīng)用.哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，1995.

[4]陳泉，李建國.長春花高效快繁技術(shù)研究.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（22）：10404-10406.