ＨＰＬＣ法測定婦科凝膠中蛇床子素的含量

呂建偉　陳惠紅

【摘要】目的：建立婦科凝膠中蛇床子素的HPLC測定方法。方法：采用高效液相色譜法，用Shimpack VP～ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm)，以乙腈～水（60∶40）為流動相，流速：1.0mL.min-1，檢測波長為323nm。結(jié)果:蛇床子素在7.2～57.6μg.mL-1，呈良好的線性關(guān)系（r =0.9999），平均回收率為99.14%，RSD=1.32%。結(jié)論：所建方法準(zhǔn)確可靠，操作簡便，穩(wěn)定性好，可用于婦科凝膠的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】HPLC法；婦科凝膠；蛇床子素

【中圖分類號】R931.71【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A【文章編號】1007-8517(2009)12-0020-01

婦科陰道炎是臨床常見病、多發(fā)病之一，是由于婦女卵巢功能衰退、體內(nèi)雌激素缺失，抵抗力衰退以及局部不潔所致的陰道炎癥反應(yīng)[1]。我院傳統(tǒng)經(jīng)驗方婦科洗劑治療各種婦科陰道炎癥獲較滿意的較果，其由黃柏、苦參、蛇床子、魚腥草、野菊花等中藥組成，具有清熱燥濕、瀉火解毒、殺蟲止癢等功效，臨床用于治療婦科各種陰道炎癥。但存在體積大，使用不便等缺點，為更好地發(fā)揮婦科洗劑的臨床療效，提高其生物利用度，將該方的藥材提取有效成分制備成新劑型婦科凝膠。為了控制該制劑質(zhì)量，本文對處方主藥之一蛇床子中蛇床子素的含量測定進(jìn)行研究。

1儀器與試藥

1.1儀器LC-20A高效液相色譜儀，SPD-20A紫外檢測器，LC-20AT輸液泵，LCsolution工作站（日本島津公司）；AL204電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；UV-1601紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

1.2試藥蛇床子素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110822-200305，供含量測定用）；乙腈為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純。婦科凝膠（本院自制，批號：20090415、20090416、20090417）。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Shimpack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm,5μm)，流動相：乙腈～水（60∶40），流速：1.0mL.min-1，柱溫：30℃，檢測波長為323 nm，理論塔板數(shù)按蛇床子素峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2測定波長選擇取蛇床子素對照品適量，加乙醇使溶解，用紫外分光光度計于200～400nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明，蛇床子素對照品在323nm波長處有最大吸收峰，因此選擇波長323nm為測定波長。

2.3對照品溶液的制備 取蛇床子素對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每0.072mg.mL-1的溶液，即得。

2.4線性相關(guān)考察精密吸取對照品溶液1.00、2.00、4.00、6.00、8.00 mL于10 mL量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20μL進(jìn)樣，按“2.1”項下的色譜條件，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸分析，得回歸方程：A=83416190C+24359，r=0.9999，結(jié)果表明蛇床子素在7.2～57.6μg.mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5供試品溶液的的制備取本品2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇20 ml，稱定重量，超聲提取15 min，再稱定重量，用乙醇補足減少的重量，過濾，即得。

2.6陰性對照試驗取不含蛇床子的陰性樣品，照供試品溶液的制備方法，制備陰性對照溶液。按“2.1”項下的色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20μL進(jìn)樣測定，結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上有一相同保留時間的色譜峰，而陰性對照溶液無干擾，見圖1。

2.7精密度試驗取同一濃度對照品溶液20μL，按“2.1”項下的色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測得峰面積的RSD為1.08%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.8穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別在放置0、0.5、1、2、4、8h后，依法測定，結(jié)果RSD為1.36%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9重復(fù)性試驗取同一批樣品，精密稱定6份，按供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，計算含量，RSD為1.52%。

2.10加樣回收率試驗精密稱取已知含量的樣品6份，每份約1.25g，各精密加入蛇床子素對照品，按“2.5”項下方法處理后，再按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定，各進(jìn)樣20μL，測得蛇床子素峰面積，計算回收率，詳見表1。

2.11樣品的測定取批號為20090415、20090416、20090417共3批婦科凝膠，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下的色譜條件測定。按外標(biāo)法計算蛇床子素含量，結(jié)果，3批樣品的平均含量分別為0.25、0.20、0.18mg.g-1。

3討論

3.1提取時間的選擇本試驗參考有關(guān)資料，樣品用乙醇超聲提取，并考察了超聲提取時間對樣品中蛇床子素提取的影響,結(jié)果用乙醇超聲處理10、20、30min測定結(jié)果相近，為確保提取完全,故選擇超聲處理15min。

3.2流動相的選擇曾參考相關(guān)文獻(xiàn)，分別選用不同比例的甲醇-水，乙腈-水作為流動相進(jìn)行試驗，根據(jù)分離情況，甲醇～水作為流動相雖然經(jīng)濟(jì)實惠，但分離效果不是很理想，最后選擇乙腈～水（60∶40）為流動相，可以使蛇床子素與其他成分很好地分離，峰型理想，且陰性對照無干擾。

(收稿日期：2009.03.10)