干燥方式對銀杏葉黃酮含量影響試驗

蘇定昌

摘要為探討不同干燥方式對銀杏植物中黃酮含量的影響,以高效液相色譜分析法測定以不同干燥方式處理后的銀杏葉總黃酮醇苷含量。結果表明,以曬干、陰干、烘干和微波干燥處理后,銀杏葉總黃酮含量分別為0.751%、0.849%、0.826%和0.884%,干燥方法以微波最好,陰干次之,曬干最差。直射光線對黃酮含量影響較大,在銀杏采集加工中,應避免用曬干的方法處理。

關鍵詞銀杏葉;總黃酮;干燥方式;含量測定

中圖分類號 S664.3 文獻標識碼A文章編號 1007-5739(2009)14-0078-02

銀杏(Ginkgo biloba)又名公孫樹,屬侏羅紀植物,被譽為植物界的“活化石”,是我國的特產(chǎn)植物,在湖北省恩施自治州種植十分廣泛,據(jù)統(tǒng)計,截止2008年底,恩施州銀杏實有面積已達9 053.2hm2,產(chǎn)量達2 218t。銀杏樹在用材、綠化環(huán)境方面作用巨大,銀杏的種子又名白果,是傳統(tǒng)的滋補藥物和食物;其果、葉含有豐富的銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、去甲基銀杏雙黃酮及二萜內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B、銀杏內(nèi)酯C等,均可作藥用,其中銀杏葉中所含的槲皮素、山萘素、異鼠李素等黃酮化合物具有活血化淤、降低血脂、擴張腦血管、清除自由基和抗衰老等功效和作用,已廣泛用于治療冠心病、心絞痛、治療老年癡呆癥和增強記憶功能、防治皮膚病、脫發(fā)等多種疾病[1]。如何更好地開發(fā)利用銀杏植物是當前生物化學研究中的一大熱門,本研究采用高效液相色譜分析法測定以不同的干燥方式處理后銀杏葉總黃酮醇苷含量,探討銀杏采集加工中直射光線對黃酮含量的影響。

1材料與方法

1.1材料和儀器

1.1.1材料。銀杏葉于2008年6月下旬采于恩施州利川市團堡鎮(zhèn)銀杏基地內(nèi),分別采用曬干、陰干、烘干和微波干燥4種方法進行干燥處理。

1.1.2儀器。為美國PerKinElmer公司Series200高效液相色譜儀(包括Series200紫外檢測器、Series200二元泵、600Series接口及色譜工作站)。

1.1.3供試藥劑。槲皮素、山奈素、異鼠李素對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號分別為10081200406、110861200405、110860200407),甲醇(色譜純,天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心),磷酸(分析純,天津市化學試劑一廠),水為飲用純凈水(杭州娃哈哈集團生產(chǎn))。

1.2測定方法

1.2.1色譜條件。SymmetryC18色譜柱(4.6mm×250.0mm,5μm,美國Waters公司),流動相為甲醇∶0.4%磷酸水溶液(52∶48),流速1mL/min,檢測波長370nm,柱溫35℃,進樣量20μL。

1.2.2溶液制備。①對照品溶液。精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的槲皮素、山萘素、異鼠李素對照品適量(分別為15.6mg、17.0mg、10.0mg)置100mL量瓶中,加甲醇微熱使溶解并稀釋至刻度,搖勻,備用。②樣品溶液。分別稱取經(jīng)4種方法進行干燥處理后的銀杏樣品各1.50g,60℃水浴回流提取8h,過濾,濾液定容分別至50mL,搖勻后各取lmL,置于10mL刻度試管中,用甲醇稀釋至刻度,供分析用。

1.2.3標準曲線。分別精密量取對照品貯備液2mL、4mL、8 mL,置于100mL容量瓶中,充分混勻,用甲醇稀釋至刻度,制成3份對照品溶液(濃度分別為槲皮素:12μg/mL、24μg/mL、48μg/mL;山柰酚:6μg/mL、12μg/mL、24μg/mL;異鼠李素:2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL),按上述色譜條件進樣測定。以對照品濃度C(μg/mL)為橫坐標,峰面積A為縱坐標,繪制標準曲線,得線性回歸方程:

槲皮素:A=80 074C-52 255,r=0.999 4,線性范圍為15.6~78.0μg/mL;山萘素:A=63 168C+35 558,r=0.998 2,線性范圍為17.0~85.0μg/mL;異鼠李素:A=60 465C+20 840,r=0.999 6,線性范圍為10.0~50.0μg/mL。范圍內(nèi)與各自的峰面積積分值呈良好線性關系。

1.2.4重復性試驗。取樣品溶液各3份作試品溶液,按上述色譜條件測得槲皮素、山萘素和異鼠李素的含量,按下式[2]換算成總黃酮醇苷的含量。

總黃酮醇苷=(槲皮素含量+山萘素含量+異鼠李素含量)×2.51。

1.2.5穩(wěn)定性實驗。取樣品溶液,每隔1h按上述方法測定1次。結果含量分別為:0h為35.37%,1h為35.70%,2h為35.36%,4h為35.25%,5h為35.21%,6h為35.10%,標準偏差(RSD)為0.6%,結果表明樣品溶液在6h內(nèi)穩(wěn)定。

2結果與分析

2.1流動性的選擇及pH值對色譜分離的影響

銀杏葉經(jīng)酸水解后,含有3種主要黃酮甙元,由于黃酮甙元的酚羥基易于電離,組分峰拖尾,加入磷酸調(diào)整流動相pH值為2.5,組分峰的對稱性良好,色譜圖見圖1。

2.2不同干燥方法對葉中銀杏黃酮含量的影響

從表1可以看出,干燥方法以微波干燥最好,陰干次之,曬干最差,微波與曬干相比, 黃酮苷含量相1.33 mg/mL。

3結論與討論

3.1測定銀杏葉中黃酮化合物的方法

銀杏葉中黃酮類物質(zhì)主要有槲皮素(Quercetin,Q)、山萘酚(Kaempferal,K)和異鼠李素(Isorhamntein,I)3種,它們主要以葡萄糖、鼠李糖等結合而成的糖苷形式存在[2]。測定銀杏葉中黃酮化合物的方法很多,如導數(shù)光譜法、近紅外光譜法、分光光度法、示波極譜法、熒光光度法、庫侖滴定法、毛細管電泳法和高效液相色譜法等[2]。本試驗采用高效液相色譜法(HPLC)測定銀杏葉中的槲皮素、山萘素、異鼠李素等黃酮化合物的含量,結果表明,采用上述方法對復方銀杏葉片中主要活性成分槲皮素、山萘素、異鼠李素等黃酮化合物的含量進行測定,方法簡便、結果準確、精確度高、分離效果良好。取對照品溶液和陰性對照溶液分別進行紫外掃描,在200~300nm兩者均有較強吸收,在300~400nm陰性對照溶液吸收較小,在370nm波長下,這3種黃酮幾乎有相同的定量因子f值(單位峰面積),相對誤差不大于0.6%,故選擇在370nm作為槲皮素、山萘素、異鼠李素的測定波長。試驗過程中選擇甲醇∶0.4%磷酸水溶液作為流動相,并對流動相組成比例進行選擇,結果表明,各色譜峰分離度良好,峰型尖銳,保留時間適中。

3.2干燥方法的影響

銀杏葉黃酮類化合物在受熱時容易發(fā)生酚性氧化反應,從而使活性成分的含量降低,黃酮類化合物的物理化學變化在提取分離時已經(jīng)開始,并延續(xù)至濃縮干燥過程。在銀杏葉的采集加工中,干燥方法的選用非常重要,實驗室常用的干燥方法有噴霧干燥、真空干燥、微波干燥、常壓烘干等方法。其中,噴霧干燥因受熱時間短,有效成分破壞較少,微波干燥利用高速旋轉(zhuǎn)的水分子,達到加熱的同時,也加速對苷類成分的水解,可減少黃酮損失[4]。這2種方法都是較先進的干燥方法。本試驗結果也驗證了這一點。但在生產(chǎn)實踐中,大規(guī)模采集加工銀杏葉選用噴霧干燥、真空干燥、微波干燥、常壓烘干都不太現(xiàn)實,相比之下,以陰干和在60℃條件下烘干比較好。這是因為直射光線對黃酮含量影響較大,采集加工銀杏葉應避免用曬干的方法,可采用陰干的方式處理。

4參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)(2005年版)[M].北京:化學工業(yè)出版社,2005.

[2] 沈潔,任世禾.復方銀杏葉膠囊質(zhì)量標準的研究[J].上海中醫(yī)藥雜志,2007,41(6):79.

[3] 傅亞,劉火安.銀杏黃酮柱層析提取新工藝研究[J].四川食品與發(fā)酵,2005(3):45-47.

[4] 朱平華.銀杏葉中黃酮類化合物的提取工藝研究[J].化工生產(chǎn)與技術,2006,13(6):25-27.