詹氏甲烷球菌ＤＮＡ連接酶在大腸桿菌中的表達(dá)純化及連接活性鑒定

張　洋　謝響明　劉建華

摘要：對(duì)一種耐熱性古茵——詹氏甲烷球茼(Methanocaldococetis jennaschii)的DNA連接酶進(jìn)行了克隆、表達(dá)、純化，并對(duì)其生物化學(xué)特性和酶學(xué)活性進(jìn)行了初步研究．詹氏甲烷球菌DNA連接酶重組蛋白在ATP及Ma²⁺二價(jià)陽(yáng)離子存在的條件下具有連接酶活性，能夠封閉DNA鏈上的切割．通過(guò)不同溫度下的測(cè)試，50～80℃為較適合連接溫度，其耐熱性強(qiáng)，甚至在90℃下加熱5 min后仍有連接酶活性；其發(fā)揮活性的pH值范圍比較寬泛，最適pH值為6.0～9.0．這是國(guó)際上對(duì)詹氏甲烷球菌DNA連接晦的首次報(bào)導(dǎo)。