香蕉紅素氧還蛋白酵母雙雜交cDNA文庫的構(gòu)建及鑒定

程　萍　馮仁軍　袁克華　張銀東

摘要：結(jié)合改良的BD SMART^TMPCR cDNA Synthesis Kit User Manual cDNA合成試劑盒，反轉(zhuǎn)錄合成帶有目的接頭cDNA第一鏈，通過LD-PCR，擴(kuò)增雙鏈cDNA(ds cDNA)，產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后回收，與經(jīng)同樣雙酶切的酵母雙雜交系統(tǒng)中pGADT7載體連接轉(zhuǎn)化，并進(jìn)行了鑒定，結(jié)果表明：提取的RAN的A₂₆₀，A₂₈₀=1.82，表明所提RNA純度高；雙鏈cDNA文庫大于0.2kb，且彌散較長，成瀑布條帶狀；根據(jù)生長菌落計(jì)數(shù)，文庫含有1.2×10⁶轉(zhuǎn)化子，重組子不同插入片段在0.3～2kb之間，表明該文庫達(dá)到建庫要求，為下一步進(jìn)行酵母雙雜交試驗(yàn)奠定基礎(chǔ)，此方法用于構(gòu)建cDNA文庫與酵母雙雜交系統(tǒng)相結(jié)合的研究目前尚未見過相關(guān)報(bào)道。

關(guān)鍵詞：香蕉紅素氧還蛋白；SMART法；cDNA文庫；酵母雙雜交

中圖分類號：S668.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1007－7847(2009)04－0349－05