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    酵母雙雜交文庫篩選及hTRIP15與Y盒結(jié)合蛋白-1相互作用的探討

    2005-04-29 00:44:03彭永德宋懷東韓澤廣陳家倫
    生命科學研究 2005年1期
    關鍵詞:雙雜交文庫分類號

    彭永德 宋懷東 曲 建 張 新 韓澤廣 陳家倫

    摘要:為探討甲狀腺素受體相互作用蛋白(hTRIP15)是否與其他核蛋白發(fā)生相互作用,以hTRIP15作為“誘餌”,用酵母雙雜交技術篩選人肝cDNA文庫,在高嚴格度選擇培養(yǎng)基(SD-Trp-Leu-Ade-His)上長出的克隆773個,再經(jīng)β-gal表達和PCR等技術進一步縮小范圍,經(jīng)Blastn搜尋最終顯示2個重復克隆編碼一種共調(diào)節(jié)輔因子—Y盒結(jié)合蛋白-1(YB-1)。將插入序列與全長YB-1比較發(fā)現(xiàn)進入ORF內(nèi)320bp,插入序列編碼82aa,該蛋白稱為YB-1-p,經(jīng)蛋白體外翻譯及GST-pulldown試驗證實YB-1-p與hTRIP15可通過與YB-1相互作用,參與調(diào)控MHCⅡ及TSH受體等甲狀腺細胞重要基因表達。

    關鍵詞:Y盒結(jié)合蛋白-1(YB-1);hTRIP15;酵母雙雜交文庫篩選;GST pulldown 試驗

    中圖分類號:Q758

    文獻標識碼:A

    文章編號:1007-7847(2005)01-0015-04

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