ER、PR、C-erbB-2、P53及 Ki-67在乳腺癌組織中表達的相關(guān)性研究

劉 焱 陳 晨 侯傳強 李寶江

(泰山醫(yī)學院附屬泰山醫(yī)院，山東泰安 271000)

隨著乳腺癌分子水平的研究進展，有些與乳腺 癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的分子生物學指標逐漸被認可為乳腺癌的預(yù)后和預(yù)測因子，應(yīng)用于評估患者的預(yù)后，指導(dǎo)乳腺癌患者的治療。其中 ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67在臨床中應(yīng)用較廣泛，但它們陽性表達情況及相關(guān)性文獻報道不一。我們通過聯(lián)合檢測它們在乳腺癌組織的表達，以探討各指標與腫瘤臨床病理特征的關(guān)系以及陽性表達的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取泰安市中心醫(yī)院2010年6月～2010年9月，乳腺癌組織標本138例。患者均為女性，年齡23～75歲，中位年齡49歲?；颊咝g(shù)前均未接受過化療、放療等抗癌治療。全部病例常規(guī)檢查以排除遠處轉(zhuǎn)移。其中pTNM分期:Ⅰ期21例，Ⅱ期82例、Ⅲ期25例、Ⅳ期12例。按照 WHO乳腺腫瘤組織學類型分類標準:浸潤性導(dǎo)管癌130例，浸潤性小葉癌5例，導(dǎo)管內(nèi)癌3例。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移78例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移60例。

1.2 試劑與方法

S-P免疫組化相關(guān)試劑盒及免疫組化染色一抗均購自北京齊松生物技術(shù)有限公司。采用S-P二步法免疫組化染色。切片厚約5 μm，脫蠟，梯度酒精水化，微波熱處理進行抗原修復(fù)，PBS沖洗，3%過氧化氫阻斷過氧化物酶，山羊血清封閉，加用一抗，37℃孵育1～2 h，PBS沖洗5 min×3次;加生物素標記的二抗，室溫下孵育30 min后PBS充分沖洗，加入S-P復(fù)合物孵育20～30 min;PBS沖洗5 min×3次;DAB顯色，蘇木精復(fù)染。自來水沖洗、復(fù)染、封片。用PBS代替一抗作為陰性對照，已知陽性標本作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定

免疫組化陽性判斷標準，ER、PR、Ki-67、P53陽性細胞為細胞核有棕黃色顆粒，凡5個高倍視野陽性細胞數(shù)＜10%為陰性，陽性細胞數(shù)10% ～25%為弱陽性(+)，26% ～50%為陽性(++)，＞50%強陽性(+++)。C-erbB-2陽性細胞為膜著色，不著色為陰性(-);著色陽性細胞數(shù)＞10%為陽性，其中著色弱且不連續(xù)為弱陽性(+)，著色中等部分不連續(xù)為陽性(++)，著色強且連續(xù)為強陽性(+++)。臨床病理特征包括腫瘤病理類型和大小，是否有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。組織學分級按照WHO乳腺癌的組織學分類(2003)，根據(jù)腺管形成、細胞分化及核分裂等3項9分的評定標準，進行組織學分級，分為Ⅰ級、Ⅱ級及Ⅲ級。乳腺癌病理分期標準為2010年第7版TNM分期標準。

1.4 統(tǒng)計學分析

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析，樣本率的比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 ER、PR、C-erbB-2 、P53、Ki-67 在乳腺癌腫的表達及與乳腺癌組織病理特征的關(guān)系，見表1，2。

ER、PR、C-erbB-2、P53 和 Ki-67 陽性表達率分別為62.31% 、59.42% 、50.72% 、43.47% 、60.14%;ER、PR陽性表達與腫瘤大小，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性，與組織學分級和臨床分期相關(guān)。C-erbB-2、Ki-67與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病理分期相關(guān)(P均＜0.05)，Ki-67還與腫瘤組織分級顯著相關(guān)。而P53與與乳腺癌組織病理特征無明顯相關(guān)性。

表1 ER、PR、C-erbB-2、P53、Ki-67在乳腺癌組織中的表達

表2 ER、PR、C-erbB-2、P53和Ki-67與乳癌病理特征的相關(guān)性(n，%)

2.2 ER、PR 與C-erbB-2、P53、Ki-67表達的相關(guān)性見表3。

ER與PR表達呈正相關(guān)，P=0.000;與P53陽性表達無明顯相關(guān)性，與C-erbB-2、Ki-67表達呈負相關(guān)(P ＜0.01)。Ki-67，P53，C-erbB-2 表達呈正相關(guān)(P＜0.05)。

表3 ER、C-erbB-2、P53 和 Ki-67表達的相關(guān)性分析

3 討論

乳腺癌是一種臨床上存在差異的疾病，這種差異是因為很多基因改變和分子事件所導(dǎo)致的。不同的乳腺癌患者有著不同的預(yù)后，需要不同的治療方案，因而乳腺癌患者的預(yù)后評估，及治療的療效評測有著重要意義。由于詢證醫(yī)學的缺乏和檢測方法的限制，目前只有少數(shù)幾種指標被確定為標準的預(yù)后因子。

正常乳腺上皮的生長和發(fā)育受雌、孕激素的調(diào)控，當上皮細胞癌變時，雌、孕激素受體(ER、PR)部分或全部缺失。如果乳腺癌細胞保留ER和PR，則表明該乳腺癌的生長和繁殖受內(nèi)分泌調(diào)控，稱為為激素依賴性乳腺癌，否則為非依賴性乳腺癌。Colditz［1］等認為，PR陽性無轉(zhuǎn)移者比PR陰性無轉(zhuǎn)移者存活期長，兩者5年總生存率比較，差異有顯著意義(P＜0.05)。ER、PR陽性往往和癌組織高分化，細胞增殖活性低，沒有或較少出現(xiàn)P53，C-erbB-2的變異和擴增等因素有關(guān)［2，3］。本組138例乳腺癌患者的激素受體測定結(jié)果亦證實，ER、PR陽性表達與乳腺癌病理組織學分級、病理分期相關(guān)，高分化和早期腫瘤陽性表達率高。ER、PR陽性表達高的C-erbB-2、P53、Ki-67 陽性表達率低。

C-erbB-2基因是人類表皮生長因子受體(EGFR)家族的第2個成員，其基因位于染色體17q21，編碼相對分子質(zhì)量185kD的具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白，在細胞信號傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，是細胞增殖、分化、移動和存活的重要調(diào)節(jié)因子。它在正常組織中不表達或低表達，在許多上皮來源的惡性腫瘤中表現(xiàn)為擴增或高表達［4］。C-erbB-2的預(yù)后價值早在1987年就被提出［5］，C-erbB-2高表達常提示腫瘤惡性程度高，常伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預(yù)后差，易復(fù)發(fā)［6］。本組實驗亦顯示，C-erbB-2陽性與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分期呈正相關(guān)，陽性表達率越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高。另外 C-erbB-2表達與P53、Ki67表達呈正相關(guān)。雖然C-erbB-2與淋巴結(jié)陰性患者預(yù)后相關(guān)性還有爭議，但目前已公認，C-erbB-2與淋巴結(jié)陽性患者預(yù)后相關(guān)，是判斷乳腺癌預(yù)后的獨立指標。

P53基因是一種抑癌基因，分為野生型及突變型，突變型P53不僅失去了正常野生型P53抑癌功能反而促進細胞惡性轉(zhuǎn)化的活性，P53基因突變可能是乳腺癌病情進展惡化的重要因素［7］。普遍認為P53基因蛋白表達與乳腺癌浸潤性增生和預(yù)后不良相關(guān)。據(jù)報道乳腺癌中P53蛋白的陽性率為20% ～60%，本組P53陽性率為43.47%，且與C-erbB-2、Ki67表達呈正相關(guān)。但P53陽性表達與腫瘤的臨床病理特征無顯著性相關(guān)，這與國內(nèi)有些文獻報道不一致［8］。筆者分析認為雖然突變型P53基因作為單個生物學指標的特異性不強，但在腫瘤的生長過程中與其它因素間可能有著重要的協(xié)同和調(diào)節(jié)作用，從而影響到乳癌的發(fā)生和預(yù)后。

Ki-67抗原是一種表達增殖期細胞的核抗原基因，被視為評估腫瘤細胞增殖活性的一個標志物。由于其半衰期短，脫離細胞周期后迅速降解，故己成為檢測腫瘤細胞增殖活性最可靠的指標［9］。有報道［10］對68項研究進行meta分析，發(fā)現(xiàn)早期乳腺癌淋巴結(jié)陽性者Ki-67高表達比例增高，預(yù)后較差，提示Ki-67有促使腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的能力。本組實驗中乳腺癌組織Ki-67陽性率為60.14%，Ki-67陽性表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，組織學分級，病理分期相關(guān)，說明Ki-67的表達與腫瘤的生長和浸潤密切相關(guān)。結(jié)果還顯示Ki-67的表達與P53，C-erbB-2表達呈正相關(guān)，和李寶江等報道一致［11］。

ER、PR 、C-erbB-2、P53、Ki-67 檢測方法相對簡單，是目前臨床較常用的乳腺癌分子生物學指標，不僅是預(yù)后因子，也是重要的乳腺癌療效預(yù)測因子。通過我們的研究及文獻報道，可以發(fā)現(xiàn)這些生物學因子之間有著復(fù)雜的關(guān)系，在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中相互作用、互相影響。雖然目前它們具體的作用機理還不明晰，通過探究它們的相互關(guān)聯(lián)和作用，能更好地了解乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展及生物學行為，為乳腺癌的個性化治療提供依據(jù)，進一步改善乳腺癌的治療效果。

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